“Año del Fortalecimiento de la Soberanía Nacional”

UNIVERSIDAD MARIA AUXILIADORA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

CURSO: FARMACOTECNIA

PRACTICA N °8
TEMA: PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN DE AMINOACIDOS

DOCENTE: Q.F. JVIER ALONSO SANCHEZ SIESQUEN

TURNO: NOCHE CICLO: V SECCION: N1

INTEGRANTES:

CABANILLAS PAUCAR, PAHOLA

CORDOVA QUIÑON IRMA
DIAZ IRIGOIN MARLENY
GALÁN LORO LILIANA ELIZABETH
JANAMPA MENESES MÓNICA
LINDO ATACHAGUA LIZ
SOLANO FLORES HERCILIO
VALENCIA SULLCA IRIS

2022-II
 PRACTICA N° 8: PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN DE
AMINOACIDOS

1. OBJETIVOS

. Realizar la determinación cualitativa de aminoácidos.

. Realizar la identificación para determinar aminoácidos específicos.

. Identificar los aminoácidos por cromatografía de papel.

El uso de la cromatografía en papel para la separación e identificación de

aminoácidos es de gran importancia, la fase móvil empleada generalmente es
una mezcla de n‐butanol/ácido acético/agua. La separación implica que los
aminoácidos cuya cadena lateral (R) tenga un carácter más apolar, tendrán
tendencia a desplazarse con la fase móvil, mientras que lo aminoácidos que
sean polares, ya sean con carga o sin carga, serán retenidos por la fase
estacionaria. Ello es así, porque la fase móvil está formada por solventes que
son más apolares que el agua, que es el solvente de la fase estacionaria.

2. INTRODUCCION

Los aminoácidos son moléculas orgánicas que contienen un grupo amino

(NH2) en uno de los extremos de la molécula y un grupo ácido carboxílico
(COOH) en el otro extremo. Los aminoácidos son las unidades que forman a
las proteínas, sin embargo, tanto estos como sus derivados participan en
funciones celulares tan diversas como la transmisión nerviosa y la biosíntesis
de porfirinas, purinas, pirimidinas y urea. Los polímeros cortos de aminoácidos
(péptidos) tienen funciones importantes en el sistema neuroendocrino como
hormonas, factores que liberan hormonas, neuromoduladores o
neurotransmisores.

Todas las proteínas son polímeros, y los a-aminoácidos son los monómeros

que se combinan para formarlas. Son ácidos carboxílicos con un sustituyente
alfa-amino. La radical variable determina su solubilidad y permite clasificarlos.
Aminoácidos con cadenas laterales alifáticas. Glicina, alanina, valina, leucina e
isoleucina.

Aminoácidos con cadenas laterales que contienen hidroxilo o azufre. En esta

categoría podemos situar a serina, cisteína, treonina y metionina.

Aminoácidos aromáticos. Existen tres: fenilalanina, tirosina y triptófano.

Aminoácidos básicos. Histidina, lisina y arginina

3. MATERIALES Y EQUIPOS

. Matraz Erlenmeyer de 250 ml . Pinzas para tubo s de ensayo

. Papel filtro . Lampara de luz UV

. Vasos de precipitado de 100 a 250 . Capilares de luz sin heparina

ml
. Microjeringas
. Balanza analitica
. Cuba cromatografica
. Espatulas
. Mechero Busen
. Lunas de reloj
. Cocinilla Electrica de plancha
. Probetas de 50 y 100ml
. Baño maria
. Embudo de vidrio
. Hielo
. Tubos de ensayo
. Frasco aspersor

4. MUESTRAS

. Tirosina

. Triptofano

. Arginina

. Histidina

. Glicina

. Clara de huevo
. Proteinas hidrolizadas
. Leche
5. REACTIVOS
. Ninhidrina 0.3% etanólico
. Ácido nítrico concentrado
. Hidróxido de sodio 20%
. Hidróxido de sodio 10%
. Reactivo de Millon
. Solución de sulfato de mercurio II
. Ácido nítrico 2M
. Hidróxido de sodio 40%
. Acetato de plomo 10%
. Solución de sacarosa
. Ácido sulfúrico concentrado
. Solución de α-naftol etanólico
. Agua de cloro
. Ácido sulfanílico 0.5%
. Solución de nitrito de sodio
. Hidróxido de amonio 10%
. Formalina diluida
. Sulfato de mercurio II 10%
. Nitroprusiato de sodio en solución
. Amoniaco en solución
. Butanol
. Ácido acético glacial
6. PROCEDIMIENTOS

a. PRUEBA DE MILLON (Identifica restos fenólicos)

1. Poner en los tubos de ensayo nuestras muestras como glicina,

metionina, triptófano, tirosina, histidina,

2. Adicionamos agua y disolvemos

3. Adicionamos el reactivo de MILLON.

 4. Llevamos a baño maria por 5 a 10 minutos.

5. Notamos el resultado, el reactivo del MILLON reacciona con el

triptofano.

Resultado: Positivo al aminoácido tyrosina formando un precipitado por los

restos fenólicos presentes.
 b. PRUEBA PARA AMINOACIDOS AZUFRADOS (Prueba del
acetato de plomo básico)

1. Preparamos las muestras.

2.preparamos el hidróxido al 40%

2. Agregamos 8 gotas de hidróxido de sodio al 40 % a la muestra.

 3. Llevamos a baño maria de a 5 a 10 minutos.

4. Dejamos enfriar y agregamos 5 gotas de acetato de plomo al 10 %.

5. Observamos los resultados, formación del color marron oscuro o gris.

Resultado: Positivo aminoácido metionina formando un precipitado de color

gris oscuro.
 c. PRUEBA PARA EL AMINOACIDO TRIPTOFANO

7.En 2 ml de la muestra, que están en tubos de ensayo, adicionamos 8

gotas de sacarosa y mezclamos.

8.Luego aplicamos en zona el ácido sulfúrico 0.5 ml

Resultado: triptófano positivo formando un anillo de color rojo.

a. PRUEBA DE XANTOPROTEICA (Identifica aminoácidos

aromáticos)

 A 2 mL de solución muestra (glicina, metionina, triptófano, tirosina,

histidina) contenida en tubos de ensayo, adicionar 0.5 mL de ácido
nítrico concentrado y llevarlo a baños maría por unos minutos, dejarlo
 enfriar, posteriormente adicionar a todos los tubos 1 mL de hidróxido de
sodio al 20 %.

Resultado: Positivo al aminoácido tirosina y triptófano presentando formación

de color amarillo, que luego se intensifica por alcalinización hasta un color
anaranjado

b. PRUEBA DE SAKAGUCHI (Identificación de arginina)

 A 2 mL de solución muestra (aminoácidos, albúmina, otras muestras)

contenida en tubos de ensayo, enfriar en baño de hielo por 10 minutos y
luego adicionar 1 mL de hidróxido de sodio 40%, dejar enfriar 40 minutos
más, adicionar 5 mL de α-naftol en solución etanólico y 3 gotas agua de
cloro. Realizar un blanco.

Resultado: formación de un color rosado o rojo (presencia de grupos

guanidino).

c. PRUEBA DE EHLRICH (Identifica anillos aromáticos fenólicos o

nitrogenados en la cadena lateral)

 Colocar en los tubos de ensayo los siguientes reactivos en este orden: 1

mL de ácido sulfanílico 0.5% y 1 mL de nitrito de sodio, mezclar y dejar
en reposo por 15 minutos, luego adicionar a cada tubo 1 mL de las
muestras (aminoácidos, tirosina, histidina, albúmina, otras muestras),
luego adiciones 0.5 mL de hidróxido de amonio 10%. Realizar un blanco.

Resultado: formación de una coloración intensa (formación de sales de

diazonio).
d. PRUEBA DE HOPKINS COLE O DE ALDEHÍDO (Identificación de
triptófano)

 A 2 mL de solución muestra (aminoácidos, albúmina, triptófano, otras

muestras) contenida en tubos de ensayo, adicionar 1 mL del Reactivo de
Hopkins Cole (2 gotas de formalina diluida + 4 gotas de sulfato de
mercurio 10%), mezclar bien el contenido y adicionar a cada tubo por las
paredes lenta y cuidadosamente 1 mL de ácido sulfúrico concentrado.
Realizar un blanco.

Resultado: formación de un anillo color rojo, violeta o purpura en la interface

(grupo indol).

e. PRUEBA DEL NITROPRUSIATO O DE MÖRNER (Identificación de

aminoácidos azufrados)

 A 2 mL de solución muestra (aminoácidos, albúmina, triptófano, otras

muestras) contenida en tubos de ensayo, adicionar 3 gotas de
nitroprusiato de sodio y 3 a 5 gotas de amoniaco en solución.

Resultado: formación de un color rojo-púrpura intenso.

CUESTIONARIO

1.Indique la clasificación de los aminoácidos, coloque 3 ejemplos de cada

uno.

Los aminoácidos se clasifican en tres grupos:

AMINOÁCIDOS ESENCIALES

Los aminoácidos esenciales no los puede producir el cuerpo. En consecuencia,

deben provenir de los alimentos.
Los 9 aminoácidos esenciales son: histidina, isoleucina, leucina, lisina,
metionina, fenilalanina, treonina, triptófano y valina.

AMINOÁCIDOS NO ESENCIALES

No esencial significa que nuestros cuerpos pueden producir el aminoácido, aun

cuando no lo obtengamos de los alimentos que consumimos. Los aminoácidos
no esenciales incluyen: alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína,
ácido glutámico, glutamina, glicina, prolina, serina y tirosina.

AMINOÁCIDOS CONDICIONALES

Los aminoácidos condicionales por lo regular no son esenciales, excepto en

momentos de enfermedad y estrés.

Los aminoácidos condicionales incluyen: arginina, cisteína, glutamina, tirosina,

glicina, ornitina, prolina y serina.

Otra forma de clasificar los aminoácidos se basa en la polaridad de la cadena

lateral. Así, se tienen aminoácidos no polares y polares, dentro primer grupo se
pueden subdividir en aminoácidos alifáticos y aromáticos y dentro de los
segundos en sin carga, ácidos y básicos.

2. Mencione las reacciones de cada prueba.

Prueba de la Ninhidrina
Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno
carboxilo libre, reaccionan con la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la
aparición de un color violáceo o amarillo. Debido a que las proteínas y los
aminoácidos poseen esta característica, la reacción sirve para identificarlos.
Algunas soluciones de amonio y aminas, dan la coloración característica,
aparentemente debido a una oxidación y reducción intermolecular de la
ninhidrina en presencia de amoníaco. Los aminoácidos porina e hidroxiprolina,
que no poseen grupo amino sino imino (-NH-), dan un color rojo que pasa
rápidamente a amarillo /10/.

Prueba de Biuret

Es una prueba general para polipéptidos y proteínas, ya que sirve para

reconocer las uniones peptídicas. La positividad se manifiesta por la aparición
de una coloración violeta, debido a la formación de un complejo de
coordinación entre los cationes cúpricos en medio alcalino con las uniones
peptídicas.

Prueba de coagulación

Es una prueba para identificar albúminas, globulinas y protaminas. La

positividad se manifiesta por la formación de un coágulo. No se conoce
exactamente el mecanismo de reacción, se cree que ocurre cierta
deshidratación de la molécula proteica.

Prueba de Sulfato de amonio

Las proteínas, como otros coloides, son precipitadas por soluciones

concentradas de sales de amonio [NaCl. (NH4)2SO4 y NaSO4].
Aparentemente, la precipitación se debe a la neutralización y deshidratación de
la molécula, seguida de agregación y precipitación.

Prueba Xantoproteica

Es una reacción que reconoce los aminoácidos que poseen el grupo bencénico
(tirosina, fenilalanina, triptófano). Las proteínas que tienen en su composición
estos aminoácidos también darán la reacción. La positividad se reconoce por la
aparición de un color amarillo o verde debido a la formación de
nitrocompuestos.
Prueba de los grupos azufrados SH

Es una prueba para identificar aminoácidos azufrados y las proteínas que los
contienen, se reconocen por la formación de una coloración negra o gris.
Revista Cubana de Química, págs. 66-74 70 Vol. XXVI, Nº 1, enero-abril, 2014

Prueba de Sakaguchi

Es una prueba para identificar arginina y se usa para identificar proteínas ya

que casi todas las proteínas poseen ese aminoácido. El desarrollo de un color
rojo marca la reacción positiva y se debe a la presencia del grupo guanidina,
que caracteriza la arginina.

Prueba de Hopkins-Cole

Es para identificar el triptófano y las proteínas que lo contienen. La positividad

se reconoce por la aparición de un anillo color violeta rojizo.

Prueba de Millon

La reacción es debida a la presencia del grupo hidroxifenílico (C6H4OH) en la

molécula proteica. Cualquier compuesto fenólico no sustituido en la posición
3,5 como la tirosina, fenol y timol, dan positiva la reacción. El mecanismo de la
reacción es poco conocido, posiblemente por la formación del complejo óxido
de mercurio y fenol.

3. Mencione que pruebas mas se pueden utilizar para identificar

aminoácidos.

Los métodos de cromatografía en capa fina y de electroforesis son adecuados

para determinar la cantidad absoluta y relativa de los diferentes aminoácidos en
una muestra (análisis cualitativo); sin embargo, para los análisis cuantitativos
es necesaria la cromatografía de líquidos de alta presión (HPLC).

También se pueden usar las pruebas de:

- Prueba de ninhidrina
- Prueba de xantoproteica
- Prueba de biuret
 - Prueba de sulfato de amonio

4. Averiguar el Rf de los aminoácidos estudiados.