INFORME MICROBIOLOGIA N°4: COLORACION DE GRAM

SEGURA B. RAFAEL*; RAMOS F. YANIS, ACEVEDO PAULA, MORALES V.

IVAN.
Rafaelsegura2000s@gmail.com*

Resumen. and techniques already endorsed and

Se llevó a cabo la observación,
identificación y definición de las
características morfológicas de dos
muestras bacterianas (staphylococcus
Aureus; E-Coli) distinguiéndolas entre si
respecto a sus diferencias microscópicas.
Consiguientemente se dispuso a realizar
la coloración o tinción de Gram A dos
cultivos bacterianos en diferentes medios
de cultivos (staphylococcus Aureus; E-
Coli) siguiendo los protocolos y técnicas
estándar ya respaldadas y estudiadas.
Pudiendo así interpretar y evaluar
correctamente los resultados obtenidos
por medio de la observación
microscópica. En las distintas
coloraciones obtenidas del proceso de
tinción.
Palabras claves: tinción de Gram,
morfología, medio de cultivo,
observación, coloraciones.
Abstract: The observation, identification
and definition of the morphological
characteristics of two bacterial samples
(staphylococcus Aureus; E-Coli) were
carried out, distinguishing them from
each other with respect to their
microscopic differences.
Consequently, two bacterial cultures in
different culture media (staphylococcus
Aureus; E-Coli) were stained or Gram A
stained following the standard protocols
studied. Thus being able to correctly
interpret and evaluate the results obtained
by microscopic observation. In the
different stains obtained from the staining
process.
Key words: Gram staining, morphology,
culture medium, observation, staining.
Introducción.
El método de tinción de Gram es una
técnica muy sencilla que se basa en el uso
de un colorante que permite observar las
bacterias mejor que bajo el microscopio
Un microorganismo Gram positivo debe
presentar una pared celular Sana. El
mismo microorganismo, si sufre daño de
la pared por una u otra causa, se vuelve
Gram negativo. Esto indica la
importancia de la pared para la retención
o el escape del colorante básico entra al
microorganismo, donde se forma con el
yodo una laca insoluble en agua. El
alcohol ola acetona empleados para
aclarar, deshidrata las pareces de los
microorganismos Gram positivos, trataos
con mordiente, y forma una barrera que la
laca no puede atravesar. En las células
gramnegativas, los lípidos de la pared
(más abundantes que en las células Gram
positivas) se disuelven por este
tratamiento, lo que permite el escape del
complejo cristal violeta con yodo.

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 La tinción de Gram o coloración Gram es
un tipo de tinción diferencial empleado en  Microscopios
microbiología para la visualización de  Asas
bacterias, Debe su nombre al bacteriólogo  Agua destilada
danés Christian Gram, que desarrolló la  Guantes
técnica en 1884. Se utiliza tanto para
Metodología
poder referirse a la morfología celular
bacteriana como para poder realizar una
primera aproximación a la diferenciación
bacteriana, considerándose Bacteria Gram
positiva a las bacterias que se visualizan
de color violeta y Bacteria Gram negativa
a las que se visualizan de color rosa.
Objetivos.
Que el estudiante:
 Adquiera destreza en la técnica de
la coloración Gram
 Aprenda a diferenciar las bacterias
Gram positivas de las Gram
negativas
 Interprete los resultados obtenidos
en la aplicación de esta técnica.
 Clasifique algunas especies
bacterianas en Gram negativas o
Gram positivas de acuerdo a la
tinción.

Materiales.
 Cultivos de bacterias Gram (+)
Gram (-)
 Portaobjetos
 Papel absorbente
 Puente de Coloración
 Mecheros
 Aceite de inmersión
 Cristal violeta
 lugol
 safranina
 alcohol acetona

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FIJACION DE LA se tomo una gota de seguidamente se


(staphylococcus Aureus;
E-Coli)
se mo la muestra de
(staphylococcus
Aureus; E-Coli) se
coloco sobre la gota
de agua destilada y
se realizo un
barrido
se colocaron las
TINCION GRAM
puente de tincion
pasados los 15 s se enjuago el
exceso con agua destilada y
se agrego safranina en el
extendido por 1 min
por ultimo se lavo con agua
destilada el exceso de
safranina, se dejo secar al
ambinete y se llevo al
microscopio
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aplico en el porta bacteriologica en e
objetos
mechero
seguidamnete se
flameo en el luego se llevo la muetra
mechero, evitando el al puente de coloracion
exceso de calor para realizar la tincion.
se cubrio el estendido pasado 1min, se lavo
con agua destilada el
(ya fijado) con cristal
muestras en el exceso de cristal
violeta y se dejo actuar
violeta
por 1 min.
pasado el minito, se lavo el seguido se agrego
exceso de lugol y se decoloro un
poco lamuestra agregando alchol
solucion yodal (lugol)
acetona por 15 segundos sobre el extendido y se
dejo actuar por 1 min
RESULTADOS
Cuadro N°1: ilustraciones microscópicas
Discusión
las bacterias pueden ser clasificadas por el
color que adquieren después de que se les
apliquen ciertos productos químicos
(tinciones). La tinción de Gram es un
proceso de tinción comúnmente utilizado.
Algunas bacterias se tiñen de azul, por lo
que se denominan Gram positivas. Otras
se tiñen de color rojo son las
gramnegativas. Las bacterias Gram
positivas y las Gram negativas se tiñen de
forma distinta porque sus paredes
celulares son diferentes. También causan
diferentes tipos de infecciones, y hay
distintos tipos de antibióticos eficaces
contra ellas.
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Muestra: E-coli
G.A: 100 X
Forma : Bacilos, gran
mayoría en
empalizada
Muestra: S.Aeuros
G.A: 100 X
Forma: cocos,
estafilococos
todas las bacterias se pueden clasificar en
una de las tres formas básicas: esferas
(cocos), bastones (bacilos) y espirales o
hélices (espiroquetas).
La tinción de Gram Es una técnica muy
sencilla que se basa en el uso de un
colorante (tinción) y que tiene una gran
utilidad en medicina. La tinción de Gram
es un tipo de tinción que se realiza sobre
las bacterias para observarlas mejor bajo
el microscopio Según la distribución del
peptidoglicano de la pared celular que las
envuelve, se tiñen de una forma u otra.
Así, las bacterias que no se tiñen
mediante esta técnica se denominan Gram
negativas. Están formadas por una pared
más fina
formada por menos capas de
peptidoglicano y una segunda membrana
rica en lípidos (que repele la tinción
Gram), al microscopio aparecen
incoloras. Las Gram positivas tienen una
pared celular mucho más gruesa, formada
por un gran número de capas de
peptidoglicanos entre las que se inserta la
tinción Gram, dando un color violeta
intenso al microscopio y se clasifican
como Gram +.
Preguntas complementarias.
 ¿Cuáles son las fuentes de error
más comunes en la tinción de
Gram?
RTA/ Impurezas en los reactivos de
Tinción. Concentración inadecuada de los
reactivos de tinción. pH inadecuado. El
colorante se fija a la célula por
mecanismos físico-químicos, que se
alteran si el Ph no es el apropiado.
 ¿Cuál es el fundamento de la
técnica de Gram?
RTA/ La tinción de Gram es un tipo de
tinción que se realiza sobre las bacterias
para observarlas mejor bajo el
microscopio. Según la distribución del
peptidoglicano de la pared celular que las
envuelve, se tiñen de una forma u otra.
Así, las bacterias que no se tiñen
mediante esta técnica se denominan Gram
negativas. Están formadas por una pared
más fina formada por menos capas de
peptidoglicano y una segunda membrana
rica en lípidos (que repele la tinción
Gram), al microscopio aparecen
incoloras.
Las Gram positivas tienen una pared
celular mucho más gruesa, formada por
un gran número de capas de
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peptidoglicanos entre las que se inserta la
tinción Gram, dando un color violeta
intenso al microscopio y se clasifican
como Gram +.
 ¿Porque las bacterias Gram
negativas se tiñen de rosado a
diferencia de las Gram positivas
(morado) siendo el
procedimiento de tinción el
mismo?
RTA/ Las bacterias Gram positivas son
un grupo de organismos procariotas que
se tiñen de azul oscuro o de violeta
cuando se emplea la tinción de Gram. Se
diferencian de las Gram negativas porque
estas últimas se tiñen de un color rojo o
rosado tenue. Tal diferencia se debe a la
composición de la envoltura celular de
ambos grupos de organismos.
 Investiga. Además del calor que
otros métodos de fijación
pueden ser usados para
tinciones diferenciales.
RTA/ Otro método para fijar un frotis es
cubrirlo con etanol o metanol al 70% y
dejarlo al menos por 5 minutos y seguir la
tinción hasta que se evapore por completo
y el frotis y quede completamente seco.
  ¿Cuál es la función del lugol en
la técnica anterior?
La función del yodo- lugol, funciona se destiñan las bacterias que ya se tiñeron
como fijación de la preparación, y y al agregar Safranina, las restantes
también actúa sobre la pared de las bacterias se teñirán, siendo estas últimas
bacterias Gram (+) de tal manera que al Gram (-).
agregar el decolorante (alcohol-cetona) no

Bibliografía
 Revista ciencia., Ma. de los
Ángeles Sánchez Contreras, Tania
González Flores, Teresa del
Rosario Ayora Talavera, Zahaed  ANEXOS.
Evangelista Martínez y Neith
Aracely Pacheco López.; ¿Qué
son los microbios?, abril-junio de
2017. URL Disponible en:
https://www.amc.edu.mx/revistaci
encia/images/revista/68_2/PDF/Q
ueSonMicrobios.pdf
.
 Lifeder.com., Bacillus cereus:
características, morfología,
hábitat., Por Beatriz López. URL
Disponible en:
https://www.lifeder.com/bacillus-
cereus/
 López L et al. Artículo de
revisión: Las tinciones básicas en
el laboratorio de microbiología
[edición online]. 2014; Vol 3, No.
1 [9 páginas].
 scobar de Rico M. Prácticas de
laboratorio: fundamentos de
microbiología. Santaféde Bogotá.
Centro Editorial Javeriano.
CEJA.1998.

pág. 6
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