PRACTICA AISLAMIENTO DE BACTERIAS ESPORULADAS DEL GÉNERO

BACILLUS Y COLORACIÓN DE LAS ESPORAS BACTERIANAS

SEGURA B. RAFAEL*; RAMOS F. YANIS, MORALES V. IVAN.
Facultad de Ciencias Básicas, Programa de Biología, Curso microbiología L1A.
Rafaelsegura2000s@gmail.com*

Resumen. machinery. The objective of this practice

was to perform a staining with the method
Las endosporas bacterianas son formas de
(Scheaffer-Fulton) for the observation of
perdurabilidad de ciertos grupos de
endospores from an isolated sample
bacterias frente al calor, la desecación, la
(cattle manure). To acquire skills in this
radiación y las influencias químicas.
staining technique and learn to
Contienen un genoma y toda la
differentiate sporulated from non-
maquinaria metabólica esencial. El
sporulated bacteria. These spore staining
objetivo de esta práctica fue realizar una
procedures present multiple aspects of
tinción con el método (Scheaffer- Fulton)
interest, firstly they represent an
para la observación de endosporas de una
important process of cell differentiation
muestra aislada (estiércol de vacuno).
or morphogenesis perfectly regulated and
Para adquirir destreza en esta técnica de
controlled by the bacteria, and from a
coloración y aprender a diferenciar las
more applied point of view, their interest
bacterias esporuladas de las no
in the field of food microbiology,
esporuladas. estos Procedimiento de la
industry.
tinción de espora presentan múltiples
aspectos de interés, en primer lugar, Keywords: endospores, staining,
representan un importante proceso de bacteria.
diferenciación celular o morfogénesis
Introducción.
perfectamente regulado y controlado por
la bacteria, y desde un punto de vista más Las endosporas bacterianas son formas de
aplicado, su interés en el campo de la perdurabilidad de ciertos grupos de
microbiología alimentaría, industria. bacterias frente al calor, la desecación, la
radiación y las influencias químicas.
Palabras Claves: endosporas, tinción,
Contienen un genoma y toda la
bacterias.
maquinaria metabólica esencial. La
Abstract termorresistencia de las endosporas es
una de sus principales características.
Bacterial endospores are forms of
Mientras que las bacterias o las formas
durability of certain groups of bacteria
vegetativas de las bacterias esporuladoras
against heat, desiccation, radiation and
sometidas a 80 ºC durante diez minutos
chemical influences. They contain a
(pasteurización) mueren, las endosporas
genome and all the essential metabolic
sobreviven e incluso soportan un
calentamiento superior. Para eliminarlas
son necesarias técnicas de esterilización.
Esta característica permite un fácil  Comprenda la importancia que
método de aislamiento de las bacterias tiene esta tinción para la
esporuladas, calentando el material donde caracterización e identificación de
se supone que existen esporas a 100 ºC bacterias.
durante 10 minutos mueren todas las Materiales.
bacterias y, seguidamente, las esporas  Probeta de 100 mL
sobrevivientes se hacen germinar y crecer  Beaker de 100 mL
en el medio de cultivo adecuado.  Plancha de calentamiento
Son formadoras de esporas las bacterias  Mecheros
bacilares Gram positivas, entre ellas, las  Portaobjetos
pertenecientes al género Bacillus. Debido  Asa microbiológica
a la dificultad que presentan la espora  Pinzas para tubos de ensayo
para ser coloreada por las técnicas  Frasco lavador con agua destilada
normales de coloración realizadas en las  Cultivo de Bacillus cereus y
prácticas anteriores, es necesario la Bacillus subtilis
aplicación de una técnica de coloración  Verde malaquita (solución acuosa
específica. Las tinciones selectivas nos al 5%)
permites observar estructuras  Tinta china
especializadas como las esporas de  Solución salina isotónica
Bacillus y Clostridium, bacterias en las
 Fenol al 2%
que su presencia, forma y localización
 Aceite de inmersión
son importantes criterios de clasificación
 Safranina (solución acuosa al 0.5
taxonómica. El objetivo de esta práctica
%)
es realizar una tinción con el método
(Scheaffer- Fulton) para la observación de  Baño de María
endosporas de una muestra aislada  Microscopio compuesto
(estiércol de vacuno). Para adquirir
destreza en esta técnica de coloración y
aprender a diferenciar las bacterias
esporuladas de las no esporuladas.
Objetivos
Que el estudiante:

 Adquiera destreza en esta técnica

de coloración.
 Aprenda a diferenciar las bacterias
esporuladas de las no esporuladas.
 Interprete los resultados obtenidos Metodología.
en la aplicación de esta técnica.
 La muestra usada para la práctica fue
previamente cultivada por el auxiliar de
laboratio, la muestra pertenece a Bacilus
Clostridium y se utilizó para la
observación de esporas.

Coloración de esporas de bacilos

Clostridium.
Resultados.

Discusión.
Teóricamente podemos decir que esta
tinción permite poner de manifiesto la
endospora bacteriana, una forma de
que evita la entrada de las tinciones
resistencia producida por algunos géneros
ordinarias es por ello necesario la
de bacterias Gram positivas. Las
utilización de tinciones especiales; estos
endosporas aseguran la supervivencia de
Procedimiento de la tinción de espora
estas bacterias en condiciones
presentan múltiples aspectos de interés,
desfavorables. A si de esta forma la
en primer lugar representan un importante
posición y la morfología de la endospora
proceso de diferenciación celular o
en el interior de la bacteria constituyen un
morfogénesis perfectamente regulado y
carácter taxonómico útil para diferenciar
controlado por la bacteria, y desde un
especies dentro de un mismo género. La
punto de vista más aplicado, su interés en
endosporas, debido a las características de
el campo de la microbiología alimentaría,
sus envueltas no se tiñe con
industria. Además, la existencia de
procedimientos habituales. El método
importantes patógenos dentro del género
más empleado es el de Schaeffer Fulton
Clostridium y a la abundancia en
donde la suspensión de microorganismos
cualquier entorno de especies de Bacillus.
se tiñe en caliente con la colorante verde
Como también algunos sistemas de
malaquita, un colorante soluble en agua
control de los procesos de esterilización
por cuya razón no se utiliza habitualmente
utilizan para su evaluación ampollas
en tinciones convencionales. El calor
cerradas con preparaciones o
modifica la permeabilidad de la
suspensiones de microorganismos que se
endosporas y permite la entrada del
exponen al proceso de esterilización.
colorante a través de las capas externas de
la endosporas. Además, el lavado con PREGUNTAS
abundante agua produce la decoloración
1. Explique el fundamento de la tinción
de las formas vegetativas, así como de los
de espora.
extremos de las bacterias esporuladas, que
se tiñen, y que son distinguidas de las R/ La envuelta de la endospora es más
demás células vegetativas por el contraste compleja e impermeable que la envuelta
que se hace posible gracias a la safranina, de las células vegetativas en las que se
que nos permite la observación de estas forman. Solo se puede teñir el contenido
células. de la espora alterando su envuelta. La
impermeabilidad de las cubiertas dificulta
Conclusión.
que las endosporas se decoloren una vez
Podemos mencionar que a pesar que la teñidas. Las endosporas poseen unas
bacteria es una estructura muy pequeña, cubiertas exclusivas que las hacen
por medio de la tinción con verde de resistentes a los factores ambientales
malaquita, el cual requirió del calor para adversos. Además, estas cubiertas hacen
la penetración; y posterior observación la que las esporas aparezcan en el
célula bacteriana particularmente es microscopio óptico como estructuras
difícilmente observable al microscopio refringentes y de difícil tinción. La
debido a la impermeabilidad de su pared
tinción específica de esporas requiere dos
colorantes:
1.- Verde malaquita: capaz de teñir las https://www.imbiomed.com.mx/arti
esporas en caliente. culo.php?id=92263
 Raisman, J. (2013). Endósporas y
2.- Safranina: colorante de contraste que
formas de persistencia. Obtenido de
tiñe las formas vegetativas. http://www.biologia.edu.ar/bacteria
Las endosporas, tras la primera tinción, s/micro7.htm
no perderán el colorante en el lavado con  Realpe, M., Hernández, C., &
agua, y sí lo harán las formas vegetativas, Agudelo, C. (2002). Especies del
que quedarán teñidas con el segundo género Bacillus: morfología
colorante (WOLIM, 1973). macroscópica y microscópica.
IMÁGENES EN BIOMEDICINA, 4.
2. Porque se debe calentar la  WOLIM, M. (1973). Tratado de
preparación. microbiología. 20 edición. Editorial
R/ El calor modifica la permeabilidad de Interamericana, México.
la endospora y permite la entrada del
colorante a través de las capas externas de
la endospora. Esta característica permite
un fácil método de aislamiento de las
bacterias esporuladas, calentando el
material donde se supone que existen
esporas a 100ºC durante 10 minutos
mueren todas las bacterias y,
seguidamente, las esporas sobrevivientes
se hacen germinar y crecer en el medio de
cultivo adecuado (WOLIM, 1973).
3. Que dificultades se tendrían si no se
adiciona safranina al final de la tinción.
R/ El colorante de contraste (la safranina)
solo puede teñir a las células vegetativas
(decoloradas por el agua), por lo cual si
no se adicionara este contrastante no
lográramos diferenciar las esporas de las
células vegetativas.
Bibliografía.
 Herrera, S. (2013). Técnica para teñir
bacilos esporulados de interés
médico. Imbiomed. Obtenido de