UNIVERSIDAD SIMÓN BOLIVAR

SEDE BARRANQUILLA

OBSERVACIÓN DE
CELULAS PROCARIOTAS
TINCIÓN DE GRAM
Miguel Fernando Felizzola Correa Biología Celular
código: 202021628043 Medicina - primer semestre C

Ginaris Brigette Tous Salas

código: 202211638323 20-ABRIL-2022
Identificación de
proteínas

Objetivos Identificar las células procariotas a partir de la coloración teñida por el método Gram

1. Se esterilizó el asa de siembra colocándola en el mechero hasta que se tornara color rojo vivo y se esterilizara por completo
2. Se colocó el asa de siembra en la caja de petri de tal forma que su temperatura disminuyera para no matar las bacterias a recolectar y se procedió a

tomar el medio de cultivo y frotar suavemente por las zonas donde se encontraban las bacterias.
3. Se aplicaron unas gotas de agua destilada al portaobjetos y luego se depositó el cultivo bacteriano frotando el asa de siembra con las bacterias en

ella, una vez depositadas las bacterias el asa de siembra fué esterilizado de manera inmediata para evitar accidentes.
4. Se pasó el portaobjetos por el mechero de manera breve con el fin de fijar la muestra y no matar los organismos.
5. Este proceso se llevó a cabo otra vez con otro cultivo bacteriano.
Metodología 6. Se colocaron los 2 portaobjetos sobre un soporte en donde se llevaría a cabo el proceso de tinción de Gram.
7. Se aplicó el reactivo cristal violeta y se dejó actuar por 1 minuto en donde luego se aplicó agua destilada para retirar el exceso de reactivo.
8. Se aplicó el Lugol y se dejó actuar por otro minuto en donde luego se aplicó agua destilada para retirar el exceso de reactivo.
9. Se aplicó alcohol y se dejó actuar por 15 segundos en donde luego se aplicó agua destilada para retirar el exceso de alcohol.
10. Se aplicó la Safranina y se dejó actuar por 1 minuto en donde luego se aplicó agua destilada para retirar el exceso de reactivo.
11. Se dejó secar el portaobjetos y se llevó al microscopio en donde se le aplicó aceite de inmersión para observar la muestra por el objetivo 100X.
12. Al finalizar se desmontó la muestra que fué eliminada en el guardián y el lente del microscopio se limpió con papel absorbente.

Asa de siembra Cristal violeta Safranina Tincion de gram Medio de cultivo

Se emplea para transportar,
El violeta de
Es un colorante biológico
La tinción de Gram es una prueba que detecta bacterias en el lugar donde se
Los medios de cultivo se denominan como

arrastrar, trasvasar inóculos

metilo,
también conocido como
sospecha una infección, como la garganta, los pulmones, los genitales o las
un conjunto de componentes o sustancias

(pequeño volumen que contiene

comúnmente
dimetil safranina y rojo básico
lesiones en la piel. Las tinciones de Gram clasifica a las bacterias en Gram
sintéticas y/o naturales empleados para

microorganismos en suspensión)
denominado
2. Al ser una molécula
positivas y Gram negativas dependiendo de la cantidad de mureina presente en la
permitir la multiplicación, mantenimiento,

desde la solución de trabajo también

cristal violeta o
cargada positivamente
pared celular. Los reactivos usados son Cristal violeta, Lugol, alcohol y Safranina. recuperación, crecimiento, detección,

llamada “solución madre” al medio de

violeta de
(catión) es capaz de
transporte y/o enumerar diferentes

Marco teórico cultivo (sólido o líquido) o de un

genciana, es el
combinarse con elementos
microorganismos como bacterias, hongos y

medio a otro (resiembra). También

nombre dado a un
celulares de cargas
algunos parásitos.
sirve para la realización de frotis. grupo de
negativas. La tinción de

compuestos
safranina O es de contraste,

químicos
ya que se usa para diferenciar

empleados como
una estructura celular

indicadores de pH
previamente teñida con otro

y colorantes. colorante.
 Cultivo 1 observada en el objetivo 100x Cultivo 2 observada en el objetivo 100x
Bacilos gram

Estrepto
positivos Diplobacilos
cocos
Cocos gram

negativos
Resultados

Cocos gram

positivos
Bacilos
Estafilococos gram negativos

Como se pudo apreciar las tinción de gram clasifica a una gran cantidad de bacterias en gram positivas y gram negativas que a simple vista su principal diferencia es la coloración violeta para gram positivas y

fucsia para gram negativas. Para los cultivos se observó bajo el microscopio que las bacterias presentes eran cocos y bacilos agrupados de diferentes maneras: Cocos, Estreptococos y Estafilococos para el

primer cultivo mientras que para el segundo cultivo eran Bacilos, Diplobacilos y Cocobacilos. Además se observó que estaban presente cocos y bacilos tanto gram positivos como gram negativos, esto se le

atribuyó a la diferencia de pared celular, ya que en las gram negativas la pared era más delgada y se decoloró facilmente con el alcohol, cosa que no sucedió con la gram positiva por lo gruesa que era su pared

para que finalmente la safranina le diera la tonalidad rosada a las parcialmente incoloras gram negativas.
Análisis de Finalmente, teniendo esto claro se pudo determinar la morfología de algunas de las bacterias observadas bajo el microscopio. Gram positivas: Streptococcus pneumoniae o neumococo la cuál es capaz de

resultados causar neumonía, meningitis o una infección del torrente sanguíneo (bacteremia); Staphylococcus Son un grupo de bacterias. Hay más de 30 tipos. Un tipo llamado Staphylococcus aureus causa la mayoría de

las infecciones por estafilococo como en la piel o en los huesos hasta la neumonía. Gram negativas: Escherichia coli algunos causan enfermedades que a veces son graves, como diarrea, infecciones urinarias,

enfermedades respiratorias e infecciones del torrente sanguíneo; Neisseria meningitidis puede causar meningitis y otras formas de enfermedad meningocócica, por ejemplo meningococemia, un tipo de

sepsis potencialmente mortal; Streptobacillus moniliformis Se encuentra en roedores salvajes y de laboratorio, así como es excretado por la orina, lo que hace que el contacto con ellos o animales que se

alimentan de ellos de forma accidental u ocupacional puede hacer que se transmita la infección.

Se pudo concluir que la tinción de Gram es un método de identificación muy eficaz al momento de revelar la morfología que presente una bacteria en específico. Esto a su vez permite a los profesionales de la

Conclusión salud estudiar las características generales, epidemiología, manifestaciones clínicas para posteriormente realizar un diagnóstico y un tratamiento eficaz que permita eliminar la bacteria contribuyendo al

bienestar óptimo del paciente.

https://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-clinica-28-articulo-mecanismos-accion-antimicrobianos-S0213005X08000177
https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iii/pb-iii-3-esporas.htm
https://www.msdmanuals.com/es-co/hogar/infecciones/infecciones-bacterianas-introducci%C3%B3n/introducci%C3%B3n-a-las-

bacterias#:~:text=Formas%3A%20todas%20las%20bacterias%20se,o%20no%20les%20es%20necesario.
https://www.istockphoto.com/es/vector/bacterias-gram-positivas-y-gram-negativas-gm1214639783-353468560
Referencias http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Tema_2_morfologia.pdf
https://labtestsonline.es/glossary/cepa-bacteriana
https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/tincion-de-gram/
https://www.ins.gov.co/Direcciones/Produccion/Paginas/planta-de-sueros-hiperinmunes.aspx
https://es.m.wikipedia.org/wiki/Asa_bacteriológica
https://biblat.unam.mx/es/revista/investigacion-en-discapacidad/articulo/colorante-safranina-o
 REALIZA UN MAPA CONCEPTUAL DONDE SE MUESTRE EL MECANISMO

PREGUNTAS DE ACCIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS SEGÚN LA ESTRUCTURA

BACTERIANA. CITA EJEMPLOS DE ANTIBIÓTICOS PARA CADA CASO.

TINCIÓN DE ENDOSPORAS:
La envuelta de la endospora es mas compleja e impermeable que la envuelta de las células vegetativas en las que se forma. Solo se puede teñir el contenido de la
espora alterando su envuelta. La impermeabilidad de las cubiertas dificulta que las endosporas se decoloren una vez teñidas. El verde de malaquita es un
colorante débilmente básico (tiene una carga positiva débil) y por tanto, se une débilmente a la bacteria. Penetra en las células vegetativa . Cuando se calienta la
preparación también penetra las endosporas. Luego se adiciona agua y durante el lavado con agua, el verde de malaquita se elimina de las células vegetativas,
pero no de la endospora. El colorante de contraste (la safranina) solo puede teñir a las células vegetativas (decoloradas por el agua)
Procedimiento:
Cubrir la extensión con papel de filtro (dificulta la precipitación del colorante sobre las bacterias)
Depositar la preparación sobre una platina de Koch. Añadir verde de malaquita. Esperar un minuto
Seguir la tinción con calor : en emisión de vapores durante 5-10 minutos. Dejar enfriar.
Lavar con agua abundante. Secar
Teñir con safranina (dos minutos). Lavar con agua. Secar. Observar con objetivo de inmersión.
Finalmente las esporas serán teñidas de verde y las células vegetativas teñidas de rosa. Se observar la forma, tamaño relativo y posición de la espora en la
célula vegetativa

TINCIÓN BACTERIAS ENCAPSULADAS:

1. Material necesario. • Cultivo de 24 horas de una bacteria capsulada • Portaobjetos, asa de platino, frasco lavador, microscopio • Colorantes • Solución acuosa
de Nigrosina: o Nigrosina 10 g o Agua destilada 100 ml • Fuchsina básica fenicada de Zielhl.
2. Técnica
• Preparar una extensión seca y fijada por calor.
• Teñir con Fuchsina diluida (cubrir el porta con agua y añadir 3-4 gotas del colorante)
• Lavar con agua y secar
• Colocar una gota de Nigrosina en el extremo del porta y con la ayuda de un portaobjetos con bordes biselados, extender una capa muy fina de Nigrosina sobre la
extensión.
• Secar al aire (la Nigrosina se cuartea con el calor) .
Las bacterias aparecerán teñidas de rosa, las cápsulas sin teñir (transparentes) resaltarán en el fondo oscuro del portaobjetos.

FORMULA PARA EL CULTIVO DE EOSINA AZUL DE METILENO:

FÓRMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA: Agar 13.5, Lactosa 5.0, Azul de metileno 0.065, Peptona especial 10.0, Eosina Y 0.4, Fosfato dipotásico 2.0, Sacarosa 5.0 (pH 7.2 ± 0.2).