Facultad de Ciencias Básicas

CONTENIDO DE LOS INFORMES DE LABORATORIO

Programa de Biología
Cada informe deberá ser entregado semanalmente y será realizado de forma grupal o individual, según
como lo defina el docente. El informe no deberá superar una extensión de 5 páginas en letra Arial 11, a
espacio y medio (1,5), impreso a doble faz y debe contener las siguientes partes, según las normas del
ICONTEC:

Resumen: Debe contener la información necesaria para darle al lector una idea precisa de la actividad
realizada, la metodología, los resultados obtenidos y las conclusiones (Máximo 250 caracteres).

Introducción: Debe responder al “porqué y para qué se realizó esta actividad”. Debe contener el
contexto teórico en el cual se ubica el tema, por ello requiere de una revisión bibliográfica previa sobre
la temática a tratar (Máximo 250 palabra). Finalmente debe poder identificar en la introducción el
objetivo del trabajo.

Metodología: Describe en forma organizada y precisa, el “cómo se alcanzó” cada uno de los objetivos
propuestos. Deben detallarse los materiales y equipos utilizados durante la práctica, así como los
procedimientos realizados, técnicas, actividades y demás estrategias metodológicas que se requirieron
(Máximo 250 palabra).

Resultados: Se detallan los logros obtenidos con los procedimientos realizados. Se puede recurrir a
esquemas, tablas, gráficos o dibujos para demostrar el conocimiento adquirido.

Discusiones: Permiten evidenciar, de modo concreto, claro y preciso el logro de los objetivos
señalados, y debe estar apoyadas y relacionadas con el conocimiento teórico.

Bibliografía: Anotar mínimo tres (3) máximo cinco (5) referencias principales en los cuales se apoyó.

Anexos: Debe contener las respuestas a las preguntas de la guía, los cálculos realizados, donde sea
necesario dejar evidencia de los mismos y demás información que no aparezca en el cuerpo del
informe.

1
 Facultad
TÉCNICAS DE COLORACIÓN BACTERIANA, TINCIÓN SIMPLE de Ciencias
Y TINCIÓN Básicas
DIFERENCIAL
Programa de Biología
Iván A. Mendoza , Bella A. Nieto & Jorge J. Comas1
1 1

1
Estudiantes del Programa de Biología, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad del Atlántico Km 7
Antigua vía Puerto Colombia
Ivanmendozap12@gmail.com

Resumen:
En condiciones de laboratorio Se realizaron técnicas de tinción bacteriana simple y diferencial, utilizando
colonias de bacterias Staphylococcus aureus y Escherichia colli, para la tinción simple el colorante
aplicado fue azul de metileno, mientras que para el desarrollo de la técnica de tinción diferencial se
utilizó cristal violeta, lugol, alcohol acetona y safranina. Las muestras fueron observadas al microscopio
óptico con un objetivo de inmersión de 100x. Los resultados fueron fotografiados y comparados con
literatura científica, siendo para las bacterias Gram - un color rojo o rosa y para las bacterias Gram + un
color violeta. Sin embargo, las Gram + quedaron teñidas de fucsia, entendiéndose de que pudieron
cometerse errores técnicos en la realización de la tinción.
Palabras claves: Diferenciación, frotis, microorganismos, tinción.

Introducción porque permite clasificar las bacterias en dos

Las bacterias se clasifican bajo diversos
criterios, Por su forma se divide en grupos
siendo: cocos en forma esférica, bacilos
pequeños bastones, espirilos forma de tirabuzón
y vibrios bastones ligeramente curvados. Por su
agrupamiento en diplococos, tétradas,
estreptococos, y estafilococos; diplobacilos,
estreptobacilos, en empalizada, además de su
forma también se pueden clasificar por su
afinidad tintorial[1]. Una tinción simple es una
solución acuosa o alcohólica de un colorante
básico único. Aunque los diferentes colorantes
se unen de forme específica a las distintas
partes de las células, el propósito principal de
una tinción simple es destacar el
microorganismo completo para que se ven las
formas y las estructuras celulares básicas.
A diferencia de las tinciones simples, las
tinciones diferenciales reaccionan de manera
diferente con las distintas clases de bacterias y
por lo tanto pueden ser empleadas para
establecer una distinción entre ellas. Las
tinciones diferenciales con más frecuencia para
las bacterias son la tinción Gram y la tinción
acido/alcohol resistencia.
La tinción Gram fue desarrollada por el
bacteriólogo Hans Christian en 1884 y es uno
de los procedimientos de tinción más utilizados
grandes grupos: Grampositivas y
Gramnegativas[2]. Con este ejercicio de
laboratorio se puso en práctica los
procedimientos propuestos por Gram, con el
propósito de observar a través del correcto uso
del microscopio y las técnicas de tinción antes
descritas, las diferentes formas bacterianas y
poder inferir aspectos de la anatomía celular.
Metodología
Se utilizaron dos cepas bacterianas, una Gram
positiva y una Gram negativa. En el centro de
un portaobjetos se colocó una pequeña gota de
agua evitando la formación de burbujas, con el
asa bacteriológica previamente flameada se
tomó una pequeña muestra del microorganismo
y se mezcló con la gota de agua hasta observar
una suspensión blanca y homogénea.
Seguidamente se dejó reposar al ambiente el
portaobjetos hasta que la muestra estuvo
totalmente seca.
Una vez preparado el frotis para cada
microorganismo se procedió a cubrirlo con azul
de metileno y dejar actuar el tiente durante 1 a 2
minutos, seguidamente se lava con agua para
remover el exceso de colorante, una vez seco el
frotis se realizaron las respectivas
observaciones.

1
El procedimiento de la técnica de tinción
diferencial requiere de más colorantes pero la
forma de la realización del frotis es el mismo
procedimiento que en la tinción simple, una vez
ya obtenido los dos frotis de cada una de las
bacterias gran positivas y gran negativas se
cubre el frotis con cristal violeta dejándolo
actuar durante un minuto, lavando el exceso de
colorante con agua, el frotis nuevamente se
cubrió con una solución yodada llamada Lugol
durante un minuto, lavando con agua, el cual
actuó como un mordiente, la muestra se
decolora entre 20 y 30segundos lavando con
agua el exceso, por último se cubrió el
extendido con safranina, durante un minuto,
lavando con agua, dejando secar y montando al
microscopio para su observación.
Resultados
Tinción simple
Los frotis fueron realizados con bacterias Gram
positivas (S. aureus) y Gram negativas (E. colli).
Imagen 1. Tinción simple de Bacterias. S.
aureus vistas al microscopio con un objetivo
de inmersión de 100 x
Tinción diferencial de Gram
Facultad de Ciencias Básicas
Programa de Biología
Análisis
El uso de colorantes permite cambiar el color de
las células de los microorganismos y poder
realizar las observaciones en el microscopio
Imagen 2. Tinción de Gram Bacterias. E. colli
(Gram negativas) vistas al microscopio con un
objetivo de inmersión de 100 x
óptico. Dado que las bacterias son casi
incoloras, no presentan contraste con el medio
en el cual se encuentran suspendidas y no
Imagen
pueden 3. Tinción
observarse de GramsinBacterias
claramente algún S.
aureus (Gram
tratamiento previo. positivas) vistas al microscopio
Lascon
tinciones nos ofrecen
un objetivo una orientación
de inmersión de 100 x sobre
la presencia, concentración, morfología y modo
de agrupación bacteriana, [3]
La tinción de Gram tiene una importancia en la
diferenciación y taxonomía bacteriana. Los
microorganismos no se decoloran fácilmente,
sino que retienen el color del colorante inicial
(básico), las células que retuvieron el colorante
básico inicial, fueron las que quedaron teñidas
de fucsia fuerte (imagen 3.), mientras que las
demás quedaron teñidas de color rojo.
Esto se debió a la diferencia en sus paredes
celulares, encontrándose dos causas, donde la
primera corresponde a la cantidad de
fosfolípidos que tienen las Gram – que es mayor
a la de las Gram +, y la segunda causa puede
1
ser debido a la cantidad de peptidoglucano que
es mayor en las Gram + que en las Gram –.
El alcohol en las Gram – extrae los lípidos de la
pared con lo que aumentan los poros de la
pared celular y el colorante cristal violeta sale.
En las Gram + que tienen menos lípidos su
pared celular se deshidrato y por lo tanto hubo
una disminución en los poros de la pared,
encontrándose retenido el colorante cristal
violeta.
La fucsina es un colorante de contraste, en las
Gram– quedaron teñidas de rojo o rojizo
mientras que en las Gram + quedaron con un
tono un poco más fuerte que el rojo, pero menos
que el violeta, un tono fucsia. [4]
Mas sin embargo en el laboratorio no se pudo
establecer una diferenciación exacta en cuanto
los colores que deben arrojar las bacterias
Gram – y las Gram +.
Las bacterias rosas corresponden al bacilo
Gram– E. colli y las bacterias fucsias que
debieron ser de color violeta corresponden a los
estafilococos S. aureus.
De esta manera los principales factores que
pueden afectar una tinción son:
Pureza del colorante, ya que a mor grado de
impureza, mayor error, y menos calidad de
tinción.
Concentración del colorante: a mayor o menor
concentración refleja un mayor error en la
tinción.
El pH del colorante: según el pH del colorante
hace que este se fije o no en determinadas
estructuras del microorganismo.
Técnica empleada, a la hora de realizar una
tinción se debe ser muy ordenado con la
manipulación de portaobjetos y cubreobjetos,
nunca mezclar unos colorantes, con otros. Entre
otras causas.
Durante la práctica de laboratorio los materiales
de tinción fueron compartidos, presumiendo que
Facultaden
la falta de exactitud de Ciencias Básicasse debió al
las tinciones
Programa de Biología
mal uso de la técnica ya que posiblemente se
revolvieron los goteros con que se extraían los
colorantes, aumentando las probabilidades de
que los resultados no fueran los esperados. [5].
Finalmente podemos decir que, mediante la
utilización de técnicas de coloración de
microorganismos se pudo demostrar la
diferencia e importancia entre una tinción simple
y una diferencial, de igual forma se logró
distinguir las diferencias estructurales entre
bacterias Gram– y Gram+. Aunque es
recomendable la repetición de la práctica debido
a que se presentaron errores en cuanto a la
tinción de las bacterias Gram+ ya que su color
después de la tinción no fue el violeta esperado,
sino un tono fucsia.
Bibliografía
[1] Romero Cabello Raúl. MICROBIOLOGIA Y
PARASITOLOGIA HUMANA, 3edicion, editorial
medica panamericana S.A, 2007. Pág. 637
[2] Funke Chistine. INTRODUCCION A LA
MICROBIOLOGIA, 9 edición, editorial médica
panamericana S.A, 2007. Pág. 68,69
[3] García Martos. MICROBIOLOGIA CLINICA
PRÁCTICA. 2 edición. Servicio de publicaciones
de la universidad de Cadiz. pág. 40,41
[4] Azahara Cabrero Ortega. MEDIOS DE
CULTIVO Y TINCION, guía práctica, 16 de
marzo del 2009.
[5] Raquel Granados Pérez. MICROBIOLOGIA
TOMO 1, parainfo, S.A. 2003, pág. 224,225.
1
ANEXOS Facultad de Ciencias Básicas
Programa de Biología