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TINCION DE GRAM

CARLOS CAMILO VARGAS BAYONA 1.065.903.985; KENY CAROLINA


HERNANDEZ PACHECO 1.065.900.016; HAROLD RODRIGUEZ
1.065.876.218
Resumen
Las bacterias son incoloras y se observan con dificultad al microscopio ptico. Los cocos
y los bacilos se pueden identificar por su forma, agrupacin y por la afinidad a los
colorantes utilizados en la tincin de Gram. Las bacterias Gram positivas retienen el color
azul violeta y las bacterias Gram negativas el color rojo plido. En general la tincin de
Gram no es aplicable a otros microorganismos como protozoos y hongos, exceptuando a
las levaduras que se tien como Gram positivas.

Palabras claves: bacterias, Gram positivas, negativas, tincin, cocos,


bacilos.
ABSTRACT
He bacteria are colorless and be seen with difficulty to the optical microscope. The cocci
and bacilli can be identified by its form, grouping and by affinity to the dyes used in the
Gram stain. Gram-positive bacteria retain the blue violet and pale red colour negative
Gram bacteria. In general the Gram stain is not applicable to other organisms such as
protozoa and fungi, with the exception of the yeasts that stain as Gram positive.

Key words: bacteria, Gram positive, negative, staining, cocci and bacilli.

1. MARCO TERICO.
2. Tincin: Es el proceso por el
cual las molculas de un
colorante se adsorben a una
superficie. El uso de colorantes
permite cambiar el color de las
clulas
de
los
microorganismos
y
poder
realizar la observacin en
microscopio ptico. Dado que
las
bacterias
son
casi
incoloras,
no
presentan
contraste con el medio en el
cual
se
encuentran
suspendidas y no pueden
observarse claramente sin
algn tratamiento previo.

3. Esta tincin se denominada as


por el bacterilogo dans
Christian Gram, quien la
desarroll en 1844. Sobre la
base de su reaccin a la
tincin de Gram, las bacterias
pueden dividirse en dos
grupos, Gram positivas y
gramnegativos (en este caso,
los trminos positivo y negativo
no tiene nada que ver con
carga
elctrico,
sino
simplemente designan dos
grupos morfolgicos distintos
de bacterias). Descripta en
forma breve, la secuencia de la
tincin es la siguiente: el Frotis

fijado con calor se tie 1 min


con Violeta Cristal, se lava con
agua, se cubre con solucin
Yodada durante 1 - 2 min. y se
lava de nuevo con agua,
decolorar con mezcla alcohol
etlico/acetona.
Escurrir
y
cubrir con Safranina (color de
contraste) durante 1 2 min.
Lavar y secar. Las bacterias
Gram-positivas
y
Gramnegativas tien de forma
distinta
debido
a
las
diferencias constitutivas en la
estructura de sus paredes
celulares. La pared de la clula
bacteriana sirve para dar su
tamao y forma al organismo
as como para prevenir la lisis
osmtica. El material de la
pared celular bacteriana que
confiere
rigidez
es
el
peptidoglicano. La pared de la
clula Gram-positiva es gruesa
y consiste en varias capas
interconectadas
de
peptidoglicano as como algo
de
cido
teicoico.
Generalmente, 80%-90% de la
pared de la clula Grampositiva es peptidoglicano. La
pared de la clula Gramnegativa,
por
otro
lado,
contiene una capa mucho ms
delgada,
nicamente
de
peptidoglicano y est rodeada
por una membrana exterior
compuesta de fosfolpidos,
lipopolisacridos,
y
lipoprotenas. Slo 10% - 20%

de la pared de la clula Gramnegativa es peptidoglicano.


4.

5.
6. OBJETIVOS.
Objetivo general.
7.
Mostrar
la
importancia de una
tincin
para
la
diferenciacin
de
bacterias basndose en
las
propiedades
estructurales de la pared
celular,
aplicando
el
mecanismo de la coloracin
de Gram.
8.
Objetivos especficos.
a. Diferenciar entre dos
principales
grupos
de bacterias: Gram +
y Gram -.
b. Utilizar
correctamente
los
materiales en esta
tcnica de tincin.
9.

10.
11.
12.
13.
14. MATERIALES Y EQUIPOS.
15.
Asa redonda
Porta objeto
Pinza
Cinta de enmascarar
Papel arroz
Cristal violeta
Lugol
Alcohol cetona
Safranina
Aceite de inmersin
Microscopia
Mechero
16.
17. MUESTRA.
18. 02-10-2015, Proporcionada por
la
profesora
(en el laboratorio de la UPC seccional Aguachica.)
19. Colonia de bacterias.
20.
21. METODOLOGA.
Previa limpieza y organizacin
del lugar de trabajo de tal
manera que slo se tenga el
material necesario para realizar
la actividad.

Agregamos una gota de


agua en un porta objeto.
Esterilizamos
el
aza
redonda.
Procedimos a tomar una
pequea parte de la colonia
previamente seleccionada.
Agregamos lo recogido con
el aza ala gota de agua

esterilizada en el porta
objetos.
Realizamos un frotis.
Secamos la muestra en el
mechero.
Procedemos a realizar la
tincin de Gram.
22. TINCIN DE GRAM
25. 2
mi
24. rystal violeta
nut
os
29. enjuagar con H2O destilada
32. 1
30.
mi
31. ugol
L
nut
o
36. enjuagar con H2O destilada
39. 30
seg
37.
38. lcohol
un
A
cetona
do
s
43. enjuagar con H2O destilada
46. 1
44.
mi
45. afranina
S
nut
o
50. enjuagar con H2O destilada
51. Ver anexo 1, 2, 3,4.
52.
53. RESULTADOS.
54. Observamos
en
esta
experiencia una bacteria Gram
negativa (bacillus) de color rojo
mediante el objetivo (100x),
con un poco de aceite de
inmersin.
55. Ver anexo 5.
56.
57. ANLISIS DE RESULTADOS.
23.
C

58. Se denominan bacterias Gram


negativas a aquellas bacterias
que no se tien de azul oscuro
o violeta por la tincin de
Gram: de ah el nombre de
"Gram-negativas" o tambin
"gramnegativas".
Esta
caracterstica est ntimamente
ligada a la estructura de la
envoltura celular, por lo que
refleja un tipo natural de
organizacin bacteriana. Son
uno de los principales grupos
de bacterias y cuando se
tratan como taxn se utiliza
tambin
el
nombre
de
Negibacteria.
Las bacterias Gram-negativas
presentan dos membranas
lipdicas entre las que se
localiza una fina pared celular
de peptidoglicano, mientras
que las bacterias Grampositivas presentan slo una
membrana lipdica y la pared
de peptiglicano es mucho ms
gruesa. Al ser la pared fina, no
retiene el colorante durante la
tincin
de
Gram.
Muchas especies de bacterias
Gram-negativas
causan
enfermedades.
Los
cocos
Gram-negativos causan la
gonorrea
(Neisseria
gonorrhoeae),
meningitis
(Neisseria
meningitidis)
y
sntomas
respiratorios
(Moraxella catarrhalis), entre
otros.

59.
60. CONCLUSIONES.
61. Las bacterias que se
observaron salieron de color
rojo y eso quiere decir que
salieron gramnegativas y
supimos cmo manejar la
tincin de Gram. Aunque hubo
uno que otro error en la tincin,
en nuestro ltimo intento
logramos el objetivo.
62.
63.
64.
65.
66. REFERENCIAS
BIBLIOGRFICAS.
https://www.nlm.nih.g
ov/medlineplus/spanis
h/ency/article/003760.h
tm.
http://tareasmedicina.
blogspot.com.co/2010/
08/procedimiento-yanalisis-deresultados_1110.html.
http://fuffupapachon.bl
ogspot.com.co/2009/1
1/gram-y-gram.html.
67.
68. ANEXOS.
69. Anexo 1: muestra con cristal
violeta.

70.

71. Fuente: los autores


72.
73.
74.
75. Anexo 2: muestra con lugol

76.

77. Fuente: los autores


78.
79. Anexo 3: muestra con alcohol
cetona.
80.

81. Fuente: los autores.


82.
83.
84. Anexo 4 : muestra con
safranina
85.

89.

90. Fuente: los autores.


91.
92.
93.
86. Fuente: los autores.
87.
88. Anexo 5: bacilos gran
negativos con objetivo 100x y
aceite de inmersin.

94.
95.