"Año del Bicentenario del Perú: 200 años de Independencia”

535UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO

VILLARREAL
FACULTAD DE OCEANOGRAFIA, PESQUERIA, CIENCIAS ALIMENTARIAS Y
ACUICULTURA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA ALIMENTARIA

INFORME DE LABORATORIO
PRÁCTICA IV
TEMA: OBSERVACION MICROSCOPICA DE BACTERIAS
DOCENTE: Dra. NILDA QUISPE ALVARADO

CURSO: MICROBIOLOGIA (PRÁCTICA)

ALUMNOS: CHAVEZ ROMERO, EMANUEL

DIAZ SUAREZ, LUIS MIGUEL

TELLO QUINTO, MELANIE NAOMI

VEGA ALAVE, ANA SOFIA

CICLO: 5TO

2023
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Objetivos

Objetivos Generales

 Aprender a usar las técnicas microscópicas para diferenciar bacterias

morfológicas y tintorialmente.

Objetivos Específicos

 Aprender el manejo y la técnica de la gota pendiente

 Aprender el manejo y la técnica de la tinción negativa

 Conocer la variación de las bacterias según su morfología y su tinción

Fundamento

La morfología de los microorganismos puede examinarse usando un microscopio

óptico. Los microorganismos se pueden observar directamente al microscopio (en

fresco). Sin embargo, dado que las bacterias son casi incoloras y su tamaño es muy

pequeño, existe muy poco contraste entre la célula y el medio que la rodea, lo que

dificulta su visualización usando un microscopio óptico normal. Para aumentar el

contraste y distinguir mejor las células se pueden utilizar colorantes. 

Algunos colorantes sirven también para distinguir distintos tipos de bacterias o revelar

la presencia de determinados constituyentes celulares; tales como flagelos, esporas,

cápsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. En la mayoría de los

casos, la tinción mata a las bacterias, por lo que observará células muertas teñidas con

colorantes. Los métodos de tinción son de gran utilidad, pero deben emplearse siempre

con cautela, ya que pueden conducir a errores.

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Marco teórico

El microscopio es una herramienta de gran importancia para la observación e

identificación de los microorganismos. Debemos distinguir entre las técnicas para

observación de microorganismos vivos y las preparaciones para tinción. Las tinciones

ofrecen una información adicional a la simple observación de la morfología, ya que

ponen de manifiesto características de la pared celular o la existencia de estructuras

especiales, como las esporas bacterianas.

Para observar bacterias al microscopio se utiliza el objetivo de inmersión (máximo

aumento). Para ello se coloca sobre la preparación una gota de aceite de inmersión. Para

enfocar con este objetivo, colocar la preparación con el aceite en la platina del

microscopio, aproximarla con el tornillo macrométrico mirando desde fuera, hasta que

el objetivo toque el aceite.

 Preparación húmeda o fresca. En esta se observan los microorganismos vivos.

Es típica de los microscopios de campo oscuro y de contraste de fases. Se usa en

caso de que la morfología se altere al usar alguna tinción. Sirve para determinar la

movilidad u observar cambios citológicos o algunas inclusiones.

 Preparación teñida. Permite ver a los microorganismos en función de su

capacidad para retener o no determinados colorantes. La principal ventaja es que

aumenta el contraste, acentuando las características morfológicas pero

conservandolas. Los colorantes se usan para formar las tinciones.

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Parte descriptiva (coloracion gram)

Materiales Equipos

Cristal Caldo

violeta nutritivo en

Lugol tubos de

Cetona ensayo.

safranina

Azas y Bandeja y
Microscopio
agujas de soporte

kolle.

Mechero Aceite de

Bunsen. inmersión

Escherichia Marcador y

coli (cepa) en agua

agar y caldo. destilada .

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Procedimiento
Preparación de frotis

Para la preparación de frotis utilizaremos una aza de kole la cual se deberá esterilizar

con el mechero para eliminar posible contaminación en seguida , se sacara un gota de

caldo estéril para que nos sirva como base en la coloración , después de ello no debemos

olvidar volver a esterilizar el aza de kole , finalmente utilizaremos la aza aguja para

recoger la cepa de E.coli y pasarlo al porta objetos con la gota y expandimos

uniformemente combinando la gota con la cepa esto nos dará una mescla de color turbio

que al secar nos dará un color plomo o blanquecino ,para el secado nos podemos ayudar

con el mechero ,un ligero flameado.

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Coloración

A continuación después de haber dejado secar al aire y con un flameo ligero , para

empezar con la coloración Gram debemos tener antes agua corriente lista en un

balón ,empezaremos con la solución cristal violeta agregándole y teniendo en cuenta

que cubra todo , dejándolo 1 minuto, después del minuto enjuagar con el agua

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totalmente , enseguida le añadiremos lugol de igual forma dejarlo por 1 minuto este hará
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que se fije el colorante primerio si es una Gram positiva si es una Gram negativa no le

hará nada , después del minuto de igual forma con el agua corriente , luego le

agregaremos el alcohol acetona por 30 segundos , enjuagar y colocar como paso final la

safranina por 30 segundos también ,después de los 30 segundos hacemos nuevamente

el enjuague con agua corriente , esto nos dio un color rojo quiere decir que será un

Gram positiva , finalmente procedemos a secar con el mechero (flameado ligero ).

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Gram positiva y Gram negativa

Las bacterias Gram positivas tienen una capa gruesa de peptidoglicano y no tienen una

membrana lipídica externa, mientras que las bacterias Gram negativas tienen una capa

delgada de peptidoglicano y tienen una membrana lipídica externa.

Las bacterias gramnegativas están encerradas en una cápsula protectora. Esta cápsula

ayuda a evitar que los glóbulos blancos (que combaten las infecciones) ingieran las

bacterias. Bajo la cápsula, las bacterias gramnegativas tienen una membrana externa que

las protege contra ciertos antibióticos, como la penicilina.

RESULTADOS DE LA COLORACIÓN GRAM

Al realizar el proceso de coloración para poder diferenciar e identificar el grupo

al que pertenece la bacteria Escherichia coli, se obtuvo en el portaobjeto la tinción del

color rojo suave asemejándose al color rosa el cual nos indicaba que el grupo al que

pertenece la bacteria Escherichia coli es de las Gram negativas. Las bacterias Gram

negativas pierden un colorante (el cristal violeta) con mayor facilidad que las Gram

positivas. La razón es la menor cantidad de mucopéptido de las paredes de las bacterias

Gram negativas
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Al observarlas en el microscopio se pudo apreciar la forma de unos pequeños

bastones de color rojo claro semejante al rosa, que se encontraban distantes unos de

otros.

DISCUSIONES

En la técnica de Gram de tejido se usa el cristal violeta junto a un mordiente con

yodo; el cristal violeta es un colorante básico con una fuerte afinidad por la cromatina y

por otros grupos aniónicos fuertes. Posteriormente, se utiliza alcohol o acetona

(decolorantes) para eliminar el cristal violeta de las bacterias que no lo retienen; no

obstante, si el tiempo de exposición es prolongado, todas las bacterias se decoloran. Las

bacterias que retienen el cristal violeta tiñen de color azul o negro y se definen como

Gram positivas, y las que no lo retienen se denominan Gram negativas. Para visualizar

las bacterias Gram negativas se añade una contratinción, que en muestras de tejido se

logra con reactivos tales como la fushina básica, la pironina Y o el rojo neutro. Con

estas contratinciones, las bacterias Gram negativas toman un color rojo a rosado

(Jiménez, G y Vélez, A ; 2012).

El género Escherichia, está constituido por bacterias Gram negativas, aerobias y

anaerobias facultativas, con morfología bacilar, aunque las formas jóvenes son de tipo

coco bacilar, móviles. Los microorganismos Gram negativos se observarán de color

rojo-rosa. (Cortés, M. et al. ; 2020)

Según Gonzales, María (2013). La bacteria Escherichia coli pertenece a la

familia Enterobacteriácea, el grupo más grande y heterogéneo de bacilos Gram

negativos.

Conclusiones
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 Se logró observar el color de la bacteria E.coli un color rojizo, donde se vio que

tenía una forma de bacilos y diplomacillas y es una bacteria Gram negativa.

 Aprendimos y logramos el objetivo en la coloración de bacterias, ya que

aplicamos conocimientos en manejo del microscopio y sus diferentes

componentes de esta.

 Sabemos que Las bacterias grampositivas se clasifican por el color que adquieren

después de aplicarles un proceso químico denominado tinción de Gram. Las bacterias

grampositivas se tiñen de azul cuando se les aplica dicha tinción. (Otras bacterias se

tiñen de rojo, son las gramnegativas).

Parte descriptiva (gota pendiente)

MATERIALES EQUIPOS
Cubre objetos Tubos de ensayo Microoscopio
vaselina Mechero Bunsen
Medio esteril Tubos de ensayo
Lamina porta Mechero Bunsen
objetos escabada
Palito de fosforo Aceite de
inmersión
Algodón Aguja de koll
Encendedor
Marcador

Procedimiento
1.- ponga un poco de vaselina en las 4 esquinas de una lámina cubreobjetos. Con

ayuda de un palito de fósforo.

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2.- deposite una pequeña gota de medio líquido estéril en el cubreobjetos

3.- emulsione en el agua una pequeña porción de masa

microbiana.

4.- adherir una lámina portaobjetos

excavada, previamente rotulada, haciendo coincidir

al centro de la gota con la parte más profunda de la

depresión.
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5.- voltear la preparación, llevarla al microscopio y observarla con el objetivo de

x100 con la una gota de aceite de inmersión.

Resultados

Figura
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Observación microscópica de la Escherichia coli al estado fresco a través del objetivo

100x y una gota de aceite de inmersión

Lo observado en el microscopio fue un pequeña cantidad de bacterias de

Escherichia coli, la cual mostraba movimientos aleatorios y sin ningún motivo. 

Discusiones

Según el Departamento de Microbiología de la Facultad de Ciencias de la

Universidad de Granada (2006), se sabe que el movimiento en bacterias peritricas como

Escherichia coli se puede describir de dos formas:

 En ausencia de estímulos o en un medio ambiente uniforme: Se puede

observar un movimiento tridimensional aleatorio, formado por períodos de

unos pocos segundos de natación en línea recta o ligeramente curvada

(carreras o corridas), interrumpidos por breves episodios (décimas de

segundo) de un movimiento angular caótico de la bacteria (viraje o cabeceo),

tras de lo cual la célula entra en una nueva fase de natación en línea aunque

con una nueva dirección.

 En un gradiente espacial de un estímulo ambiental: La bacteria responde

modificando el anterior patrón. Se alteran las probabilidades relativas de

carreras y de virajes, de modo que la bacteria prolonga estadísticamente los

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periodos de natación hacia la dirección favorable (es decir, acercándose

hacia un estímulo positivo y alejándose de uno negativo), y disminuye la

frecuencia de cabeceo. De esta manera se obtiene una locomoción aleatoria

pero estadísticamente sesgada, que propicia el avance neto en la dirección

favorable. Este movimiento se denomina taxia.

Por otra parte, Jair Koller (1999) afirma que para un micro nadador la inercia no

tiene sentido. En un punto muerto (es decir, si deja de mover sus flagelos) una bacteria

como la Escherichia coli recorrería una distancia menor que el diámetro de un átomo de

hidrógeno. En realidad, la Escherichia coli nunca podría pararse, debido al movimiento

browniano del líquido, tal como un barco en un mar agitado. Ella sería sacudida

aleatoriamente, en la media de un largo corporal por segundo. Así, la Escherichia coli

no puede perseguir sus nutrientes; puede apenas esperar que la difusión del medio los

traiga hasta ella.

De los resultados, se pudo observar que la  Escherichia coli presenta una

movilidad negativa; es decir, un comportamiento browniano. Esto debido a que dicha

bacteria se encontraba en un medio ambiente uniforme; es decir, en ausencia de

estímulos. Este movimiento al azar, o más bien browniano, puede ser producido por el

movimiento constante de partículas, principalmente de agua, al interior de la célula (en

su citoplasma) o fuera de ella, lo que influye en el movimiento de los organismos

unicelulares.

Conclusiones
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 Se cumplieron nuestros objetivos generales y específicos como Aprender a usar

las técnicas microscópicas para diferenciar bacterias morfológicas y coloración,

tanto como el manejo de este.

 Las ventajas de esta preparación son puede ser observada por más tiempo, pero

igual que la anterior su desventaja está en que no deja aumentar el contraste. Por

eso solo es óptimo para observar el movimiento de las bacterias.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Universidad de Granada. (15 de febrero de 2006). Microbiología General: Apéndices

filamentosos procariotas.

https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/08flagelos.htm

Jair Koiller. (1999). Movimiento de microorganismos. Gaceta de la Real Sociedad

Matemática Española, 2(3), 423-445. https://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?

codigo=2015637&orden=414408&info=link

Cortés, M; et al. (2020).Las tinciones básicas en el Laboratorio de

Microbiología: Un enfoque gráfico. Universidad Nacional Autónoma De México
Facultad De Estudios Superiores Zaragoza.
https://www.zaragoza.unam.mx/wpcontent/Portal2015/publicaciones/libros/
cbiologicas/libros/Tinciones.pdf
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Jiménez, G. y Vélez, A. (2012). Tinción de Gram de tejido: alcances y

limitaciones. Medicina & laboratorio. Volumen 18, Números 11-12.
https://www.medigraphic.com/pdfs/medlab/myl-2012/myl1211-12d.pdf
Gonzales, M. (2013). Caracterización fenotípica de cepas de Escherichia coli
uropatógena (UPEC) en pacientes pediátricos y sus perfiles de resistencia a
aminoglucósidos, quinolonas y betalactámicos. Licenciatura en Ciencias Biológicas:
Microbiología Facultad de Ciencias, UdelaR.
https://www.colibri.udelar.edu.uy/jspui/bitstream/20.500.12008/1546/1/uy24-
16734.pdf