MICROSCOPIA EN HONGOS, BACTERIAS Y
LEVADURAS
Avendaño Montoya María José - Nuñez Tapias Estefany Yulieth – Quintero Landaeta Stiven -
Peña Contreras Josue Alejandro
Laboratorio de Microbiología, Grupo A, Departamento de
Microbiología, Universidad de Pamplona
RESUMEN: En el presente informe
se evidenció el proceso realizado en
el laboratorio, empezando por
identificar las partes del microscopio
con sus respectivas funciones y
practicar el manejo adecuado del
mismo. Después se realizó una
práctica donde se aprendió a montar
muestras adecuadamente con las
láminas ubicadas de manera correcta,
cada vez enfocando en los diferentes
objetivos, por último, nos
concentramos en la observación de
organismos unicelulares como lo son
las bacterias los hongos y las
levaduras, cabe aclarar que al ver
este tipo de microorganismos se
evidencio el lugar en el cual
permanecen.
PALABRAS CLAVES: Microscopia,
Análisis, Identificación,
Microorganismos.
INTRODUCCIÓN
Una de las características más
importantes de las bacterias es su
morfología, definida por el tamaño, la
forma, el arreglo y la estructura.
Existen bacterias en forma redondeada
denominadas cocos, en forma
cilíndrica, denominada bacilos y una
tercera morfología como son las que
tienen forma de espirales denominadas
espirilos. A su vez cada categoría
puede subclasificarse con base a
diferentes arreglos.
Estas características pueden
determinarse examinando muestras al
microscopio. Las células no teñidas
son prácticamente transparentes, pero
pueden observar al microscopio de
luz haciendo preparaciones entre
lámina y laminilla o con microscopio
especiales.
Si se tiñe una muestra del cultivo
extendida y fijada en una lámina porta
objeto con un colorante dado, las
células adquirían el color del
colorante añadido y podrá observarse
la forma tamaño y el arreglo de las
mismas. Este tipo de coloración se
conoce como tensión simple.
MATERIALES
 Azas de
inoculación: Son
dispositivos
portátiles para
la inoculación de
microorganismos (como
bacterias o levaduras), en
medios de crecimiento que
pueden estar en placa o en
 tubo antes de la incubación,
multiplicación y almidón
crecimiento.
 Mechero de bunsen: es un
instrumento utilizado en
laboratorios para calentar
muestras y
sustancias químicas. Está
constituido por un tubo
vertical que va enroscado a un
pie metálico con ingreso para
el flujo de gas, el cual se
regula a través de una llave
sobre la mesa de trabajo.
 Microscopio: Es una
herramienta que permite
observar
elementos que no pueden
observarse o son invisibles a
simple vista, a través de lentes,
visores y rayos de luz, que
acercan o agrandan la imagen
en escalas convenientes para su
examinación y análisis.
 Papel para limpiar lentes:
Papel de seda, utilizado para
limpiar los lentes del
microscopio sin rayarlos
Laminas o porta objetos
REACTIVOS
 Azul de metileno: Reactivo
químico usado principalmente
en los laboratorios para tinción
de levaduras, vino y mostos
 cristal violeta: es usado en
química como un
indicador de pH para
probar los intervalos de pH
de 0 a 1,0. En el extremo
ácido de su
intervalo de medición, toma un
color amarillo.
 Lugol: Reactivo
utilizado para
reconocer la
presencia de
 Safranina: Es un colorante
biológico, de contraste que se
utiliza en la Tinción de Gram
para proporcionar un color
violeta más intenso a las
bacterias Gram+ y tiñe de rosa
a las bacterias G- ; en
histología y en citología.
 Azul de lactofenol:
preserva e identifica a los
componentes
estructurales de los
hongos
MÉTODOS PREPARACIÓN DE
FROTIS PARA LA TINCIÓN
 Limpiar bien las láminas (
con agua jabón, papel,
luego desengrasar con
alcohol, dejando evaporar,
es esencial para ya que la
grasa o aceite de los dedos
no permiten una buena
elaboración de frotis)
 Identificar la lámina con
nombre o numeración
de la muestra.
 Colocar una gota de
solución salina estéril al
(0.85%) sobre la lámina
o portaobjetos.
 Transferir una pequeña
cantidad de células desde
el cultivo a la lámina con
el asa de inoculación
estéril, colocando una
gota de solución salina en
forma circular y
homogenizar.
 Dejar secar al aire.
 Realizar la fijación
pasando el
portaobjeto 2 o 3
 veces sobre la llama
del mechero.

PROCEDIMIENTO PARA
TINCIONES SIMPLE
 Se sacaron 4 muestra
de proteus sp los
cuales se les agregó E-coli, (verde malaquita) vista 10x
las siguientes
tinciones: azul de
metileno, cristal
violeta, safranina.
 A la bacteria
saccharumyces sp
se le agregó la tinción
de Lugol.
Bacillus, (verde malaquita) vista 40X
 Con el gotero se les
adiciona a las muestras
mencionadas
anteriormente su reactivo
correspondiente, con un
gotero y dejar por 1
minuto.
 Cuando ya haya una
coloración se remueve el
exceso con agua en Entercoccus, (azul de metileno) vista
manera de goteo. 10X
 A continuación, se deja
secar y se lleva al
microscopio.

RESULTADOS

Klepsiella, (azul de metileno) vista 40X

Salmonella, (Azul de metileno) vista

10X

METODOS DE TINCIONES
COMPUESTAS

1. Realice el frotis con la técnica

adecuada y fíjelos al calor.
2. Vierta sobre el frotis Cristal Violeta y
déjelo actuar por 1 minuto.
3. Lave con agua de la llave a baja
presión y escurra.
4. Cubra ahora el frotis con Lugol y
deje actuar por 1 minuto.
5. Lave con agua de la llave a baja
presión y escurra.
6. Cubra ahora con solución decolorante
por 30 segundos.
7. Lave con agua de la llave a baja
presión y escurra.
8. Cubra ahora con colorante de
contraste (Safranina) y deje actuar por 1
minuto.
9. Lave con agua de la llave a baja
presión y escurra.
10. Permita que se seque al aire dejando
la lámina en posición inclinada.
11. Observe al microscopio con los
siguientes objetivos: 10X – 40X – 100X
utilizando este
último con aceite de inmersión.
Interpretación: Microorganismos Gram
positivos : Violeta
Microorganismos Gram negativos: Rojo
o rosado
ANALISIS DE DATOS
Klepsiella compuesta, (cristal violeta,
lugol, safranina) vista 40X
Bacillus compuesta
Al analizar tinciones simples, de las
colonias sembradas que posteriormente,
fijamos en el portaobjetos, al aplicarle los
colorantes cristal violeta y safranina entre
otros por el tiempo especificado, solo
debíamos observar su forma o morfología
celular identificando, su estructura como:
cocos, bacilos, espirilos, o lo que fueran, y
debimos identificar si los microorganismos
fueran Gram positivos y demás. Al realizar
la tinción compuesta se lograría observar
aparte de su morfología celular, también
identificar si eran Gram positivas y para
poder lograr apreciar esto tuvimos que
aplicar los colorantes con el tiempo
indicado a cada uno de las muestras fijadas.
Aplicamos azul de metilo por 1 minuto,
luego por un minuto, quitando el sobrante
del colorante en cada paso con agua a baja
presión, posteriormente después de teñidas
la llevamos al microscopio y en el objetivo
de 10x, 40x y 100x con aceite de inmersión,
se lograría identificar si eran gran positivas
o gran negativas, pero no pudimos por
posibles problemas con el frotis o el
microscopio o alguna falla con las
muestras. Conclusiones
Al terminar la práctica de laboratorio
pudimos concluir que cada tinción tiene su
método a realizar, en el caso dela tinción
simple es las rápido de hacer entre 1
a 2 minutos dependiendo del colorante
usado, la tinción compuesta lleva más
tiempo y por ende mucho más cuidado se
debe tener al momento de realizar la tinción
se usa más de un colorante para dicha
tinción.