MÓDULO: TINCIÓN DE GRAM

Procedimiento - haga clic en "iniciar laboratorio" (START LAB)

Tome un inóculo de bacterias (ansada) de un cultivo líquido y emulsiónela en una pequeña
gota de agua o solución salina en el portaobjetos. Debe ser una suspensión delgada, no
lechosa (gruesa) o no se teñirá correctamente. Seque al aire el portaobjetos. Esto se hace
automáticamente en el módulo virtual.

Para empezar (recuerde en cada paso respetar los tiempos, tiene un temporizador automático
(o reloj) para ayudarse)
1. Fije el portaobjetos con calor: haga clic en el mechero Bunsen, pase el portaobjetos
suavemente dos o tres veces (1-2 segundos) a través de la llama. No sobrecaliente,
esto causará una distorsión de las células.
2. Cubra el portaobjetos con cristal violeta durante 1 minuto.
3. Enjuague con agua.
4. Cubra el portaobjetos con yodo durante 1 minuto.
5. Enjuague con agua.
6. Decolore con alcohol por 5-10 segundos.
7. Enjuague con agua.
8. Cubra el portaobjetos con safranina durante 1 minuto.
9. Enjuague con agua.
10. Vea el preparado bajo el microscopio.
El portaobjetos contiene una muestra con Escherichia coli (bacilo gramnegativo) y
Staphylococcus aureus (coco grampositivo)… ¿es eso lo que ve?
Si no está viendo… piense en lo que podría haber hecho incorrectamente y repita el ejercicio.
Cuando haya terminado con el ejercicio, haga clic en "Examinar ejemplos" (EXAMINE
EXAMPLES) para ver micrografías de varias bacterias que han sido teñidas con Gram.
Reconocerá el nombre de muchas de las bacterias.

Algunas cuestiones a tener en cuenta:

1. Si el portaobjetos no está fijado al calor: la mancha se lavará → ¿qué esperaría

ver?
2. Si el portaobjetos estuvo mucho tiempo fijándose a la llama: la morfología celular
puede estar distorsionada.
3. Si el portaobjetos estuvo mucho tiempo decolorándose: las bacterias
grampositivas aparecerán gramnegativas.
4. Si el portaobjetos estuvo poco tiempo decolorándose: las bacterias
gramnegativas aparecerán como grampositivas.
5. Un Frotis demasiado grueso: las células en áreas muy gruesas no se decolorarán
adecuadamente y las bacterias gramnegativas aparecerán como grampositivas.
6. Si el tiempo fue insuficiente durante la contratinción con safranina: las bacterias
gramnegativas pueden estar muy poco teñidas y será difícil visualizarlas.

Referencia bibliográfica:
http://learn.chm.msu.edu/vibl/content/gramstain/module_instructions.pdf [Último acceso:
19/08/2020]