ASIGNATURA : MICROBIOLOGÍA MÉDICA

CICLO : IV
SEMESTRE ACADEMICO : 2023
PRÁCTICA N°
1

BIOSEGURIDA
D
BIOSEGURIDA
D
La seguridad en el laboratorio
se puede definir como: "La
situación carente de riesgo o
con un riesgo limitado, que
resulta del cumplimiento de un
conjunto de normas y prácticas
para lograr este fin"
 MEDIDAS
Barreras primarias:
DE
PROTECCION
• Las localizadas en tomo al origen del
riesgo, como son:
• Contenedores, equipo e instrumental
correcto y "buena práctica” (la técnica de
trabajo ordenada y rigurosa es
probablemente la mejor protección que
existe)
• Uso de desinfectantes y cabinas de
seguridad.
Barreras secundarias:
Localizadas en el círculo del operador, incluirán:
• La higiene personal rigurosa, La vacunación
• Vestimenta: uso de ropa adecuada, guantes, gafas, pelo
recogido.
• No inhalar los aerosoles producidos durante la centrifugación,
la sedimentación o el derrame de cultivos líquidos.
• No sufrir inoculación percutánea, por ejemplo, al
pincharse con una aguja.
• No comer, beber, fumar o aplicarse cosméticos.
• Presuponer que todos los pacientes están potencialmente
infectados por HIV u otros patógenos transportados por la
sangre.
• Lavarse a conciencia las manos y otras superficies de la piel
tras quitarse los guantes e inmediatamente después de
cualquier contaminación.
Barreras terciarias:
Localizadas alrededor del laboratorio: Evitan
que los riesgos de laboratorio puedan repercutir
en la comunidad.

• Ningún material tóxico o infeccioso abandone

el laboratorio.
• Acceso restringido a determinadas áreas de
laboratorio.
• Contenedores especiares para material bio-
peligroso, autoclaves e incineradores para
desechos contaminados.
• Acceso al laboratorio únicamente al personal
capacitado
 DESINFECCIÓN, DESCONTAMINACIÓN Y
ESTERILIZACIÓN
• Existen muchos agentes químicos o físicos para
eliminar los microorganismos podemos distinguir
tres grupos:
• Agentes antisépticos: son germicidas químicos
para la utilización en la piel como por ejemplo;
alcohol, iodóforos, etc.
• Agentes desinfectantes: destruyen
microorganismos en superficies e instrumentos, como
por ejemplo: soluciones fenólicas al 3 o 5%,
hipocloritos.
• Agentes esterelizantes: destruyen toda forma de
vida incluidas las esporas. Por ejemplo: los sistemas de
autoclave, calor seco, óxido de etileno.
CUESTIONARIO
:
1. Definición de seguridad en el laboratorio.
2. Mencione cinco ejemplos (c/u) de barreras primarias,
secundarias y terciarias.
3. ¿Cuál es la diferencia entre desinfección,
descontaminación y esterilización? (ejemplo de c/u).
4. Mencione diferencias entre los 4 niveles de
bioseguridad
MICROSCOPÍA: ESTUDIO
Y MANEJO DEL
MICROSCOPIO
 MICROSCOPI
PARTE MECANICA O
• Tubo portalentes ,Condensador,Tornillos macro y
micrométrico,Brazo y Pie , Revolver
PARTE OPTICA
• Ocular ,Lentes de condensador, Objetivos ,
Diafragma,Espejo
SISTEMAS QUE COMPRENDE EL
MICROSCOPIO
1. Sistema de soporte: el brazo, el pie, el tubo
ocular, el revólver y la platina.
2. Sistema de Iluminación: el foco, condensador y
diafragma.
3. Sistema de Ajuste: el macrométrico,
micrométrico y cremallera
4. Sistema de Aumento: el ocular y los objetivos
METODOS DE
COLORACIONES:
COLORACIONES SIMPLES,
DIFERENCIALES Y
ESPECIALES
COLORACIONES
SIMPLES
 1. Preparar un frotis con la
mezcla bacteriana y fijar al
calor

FUNDAMENTO
-cuando las células están inmersas en el
azul de metileno este penetra dentro de 2. Cubrir el frotis con una gota
las células, se usa un único reactivo, que
preferentemente es de tipo básico y del colorante y dejar actuar
contiene un cromógeno (compuesto que por 3 – 5 minutos. Lavar con
da color al tinte) con carga positiva, ya
que la pared celular de las bacterias agua y dejar secar
posee componentes con carga negativa
que atraen y enlazan el cromógeno.

3. Observar al microscopio con

objetivo de inmersión y aceite de
cedro
IMAGEN DE S. aureus CON UNA COLORACION
SIMPLE
 1. Colocar una gota de 2. Agregar una gota
tinta china sobre la de la mezcla
lámina portaobjetos bacteriana

FUNDAMENTO:
No son una verdadera tinción. Se llaman así
porque lo que realmente se tiñe es el fondo
sobre el que están los microorganismos 3. Cubrir la preparación
apareciendo los microorganismos sin teñir.
Se emplea para ver la cápsula de S. con una laminilla
pneumoniae y Cryptococcus neoformans en cubreobjeto
LCR.

4. Observar con lente

de menor y mayor
aumento.
IMAGEN DE Cryptococcus CON TINTA
CHINA
 COLORACIÓN FUNDMENTO:
Está basada en la afinidad del colorante por componentes de las
AZUL DE células, en este caso por las estructuras fúngicas.

LACTOFENOL -El fenol destruye la flora acompañante que juntos a los hongos
pueden crecer colonias de bacterias)
-El ácido láctico conserva las estructuras fúngicas con una una
película que las protege provocado por un cambio de gradiente
osmótico entre el interior y el exterior de dicha estructura.

1.- Colocar una gota del colorante

sobre la lámina portaobjetos

2.- Colocar una muestra de

un cultivo de hongo sobre
el colorante

3.- Cubrir con una laminilla 4.- Observar con lente de menor
cubreobjetos y mayor aumento
IMAGEN DEL HONGO Aspergillus CON AZUL DE LACTOFENOL
 COLORACIONES
DIFERENCIALES Y
ESPECIALES
 Tinción de Gram
Tinción del frotis Un colorante básico que en
. Previamente fijado al calor, contacto con las células
Paso 1 . Tiñe con cristal violeta cargadas negativamente,
Durante 1 minuto. reacciona con ellas
. Todas las células se tiñen de coloreándolas.
color azul-violeta.
. Lavar con agua

. Añadir Lugol,
Paso 2 Fija las tinciones y aumenta
. dejar actuar 2 minutos
. Todas las células siguen la afinidad entre el
de color azul-violeta. colorante y las células.
. Lavar con agua

Gram +
. Decolorar con alcohol
acetona por 30 segundos
Paso 3 . Las células Gram +
siguen de color azul-violeta.
. Las Gram negativas
se decoloran..
. Se lava con agua
Las Bacterias Gram.
Tinción de contraste positivas posee una malla
Con safranina 2 minutos.
de peptidoglucano en su
Las células G+
parte mas externa.
se ven azul-violeta.
Mientras que las Gram.
negativas recubriendo una
Paso 4 Las G- rosas o rojas.
fina capa de peptidoglicano
y presentan una membrana
externa.
Gram -
IMAGEN DE BACILOS GRAM NEGATIVAS
IMAGEN DE COCOS GRAM POSITIVAS
COLORACIÓN
ESPECIAL
INTRODUCCIÓN
 Son coloraciones especiales aquellas que permiten colorear
algunas bacterias que no tienen afinidad con los colorantes
de anilina.
Por ejemplo:

 Las espiroquetas (Coloración de Vago)

 Permiten reconocer componentes intra y extras
celulares, como por ejemplo, esporas, cápsulas, flagelo

 Esporas (Coloración de Wirtz Conklin)

 Cápsulas (Coloración Hiss)
 Gránulos metacromáticos (Coloración de Albert)
 Las coloraciones especiales también permiten
reconocer microorganismos presentes en la sangre y tejidos
como.

Por ejemplo:

 Bartonella, hongos, rickettsias (Coloración de Leishman)

Bartonella sp.
1. COLORACIÓN DE
LEISHMAN
 Esuna coloración especial
utilizada para demostrar la presencia y
policromática
morfología de en sangre
microorganismos tejidos como: y
Bartonella, Hongos,
Rickettsias.
 MATERIALES
o Frotis de sangre con Bartonella sp. o
bacterias variadas
o Solución de colorante Leishman
o Agua destilada tamponada
o Microscopio con lentes de 100X
o Aceite de inmersión

Colorante de Agua
Leishman Destilada
 PROCEDIMIENTO
1.Cubrir el frotis con el colorante y
dejar actuar por 5 minutos.

2.Agregar agua destilada tamponada

mezclando bien y esperar 15
minutos

3. Lavar con agua de caño y dejar

secar

4. Observar con objetivo de inmersión

 RESULTADOS
Los microorganismos se tiñen de color rosado
oscuro

1000 X
2. COLORACIÓN DE
VAGÓ
 Es utilizado para la coloración de
gérmenes espirilares y espiroquetas, que no
se colorean por el método de Gram, ni por
el Ziehl- Neelsen y que se colorean muy
débilmente con el Leishman.
 MATERIALES
o Lámina portaobjetos
o Palito mondadientes
o Solución fisiológica al 0.85%
o Set de coloración de Vago: Mercurio cromo al 2% y Violeta de
genciana
o Asa de siembra en aro
o Microscopio con lentes de 100X
o Aceite de inmersión

Solución Mercurio
Fisiológica Cromo 2%
 PROCEDIMIENTO
1.En una lámina colocar una gota de suero
fisiológico
al o.85%
2. Con el palito mondadientes obtener una muestra
de sarro dentario y realizar un frotis en capa
extendiendo en sentido espiral de adentro
hacia fuera.
Mercurio
3.Fijar el frotis al calor suave Cromo 2%

4. Cubrir con Mercurio cromo durante 3 minutos

5. Lavar con agua corriente

6. Cubrir el frotis con Violeta de genciana por 3 minutos

7.Lavar con agua corriente

8.Secar y observar al microscopio con objetivo de

inmersión.
 RESULTADOS
Observar Treponema phagadeni, espiroqueta que se encuentra formando parte
de la flora normal de la boca, en forma de espiral y de color violeta- rosado.

1000 X
3. COLORACIÓN
HISS
 Es utilizado para reconocimiento
de CÁPSULA BACTERIANA
 MATERIALES
o Lámina portaobjetos
o Cultivo de Bacillus anthracis
o Fucsina básica
o Solución acuosa de Sulfato de cobre al
20%.
o Asa de siembra en aro
o Mechero Bunsen
o Microscopio con lentes de 100X
o Aceite de inmersión

Fucsina Sulfato de
Básica Cobre 20%
 PROCEDIMIENTO

1. Preparar un frotis de Bacillus

anthracis

2. Cubrir con Fucsina básica y calentar hasta el

desprendimiento de vapores por 30
Fucsina
Básica

segundos

3. Lavar con solución acuosa de

Sulfato de cobre al 20%. Sulfato de
Cobre

4. Lavar con agua corriente y secar

5. Observar al microscopio con lente de

inmersión
 RESULTADOS
El cuerpo bacteriano de Bacillus anthracis se observa de color púrpura y la
cápsula de color claro o incoloro.

1000 X
También…
Klebsiella sp. se observa de color púrpura y la cápsula de color claro o
incoloro.

1000 X
4. COLORACIÓN DE
WIRTZ CONKLIN

 Es utilizado para reconocimiento

de ESPORA BACTERIANA
 MATERIALES
o Lámina portaobjetos
o Cultivo de Bacillus sp.
o Verde de Malaquita
o Safranina al 0.5%
o Asa de siembra en aro
o Mechero Bunsen
o Microscopio con lentes de
100X
o Aceite de inmersión

Verde de Safranina al
Malaquita 0.5%
PROCEDIMIENTO
 RESULTADOS
El cuerpo bacteriano de Bacillus sp. se observa de color rosado y la espora de color
verde

1000 X
1000 X
5. COLORACIÓN DE
ALBERT
 Es utilizado para colorear
metacromáticos conocidos
gránulos también como de
volutina, son material de reserva de
polifosfato, se distribuyen en el citoplasma,
preferentemente en los extremos del bacilo,
se tiñen de color azul intenso y el soma
bacteriano se observa muy débilmente.
 MATERIALES
o Lámina portaobjetos
o Cultivo de Corynebacterium sp.
o Solución A de Albert (Azul de toluidina, verde de
metilo, ácido acético, alcohol etílico, agua
destilada)
o Solución B de Albert (yodo metálico, yoduro de
potasio, agua destilada)
o Asa de siembra en aro
o Mechero Bunsen
o Microscopio con lentes de 100X
o Aceite de inmersión

SOLUCIÓN SOLUCIÓN
A B
 PROCEDIMIENTO
1. Preparar un frotis de Corynebacterium
sp. y fijar al calor suave

2. Cubrir con la Solución A de Albert (Azul de

toluidina, verde de metilo, ácido acético,
alcohol etílico, agua destilada) por 3 a 5
minutos. SOLUCIÓN
A

3. Lavar con agua corriente, evitar el lavado

directo del frotis.
4. Cubrir con la Solución B de Albert SOLUCIÓN
B

metálico,
(yodo yoduro de potasio, destilada)
agua
por 1 minuto
5. Lavar con agua corriente y secar
6. Observar al microscopio con lente de
inmersión
 RESULTADOS
En la coloración Albert observar la bacteria Corynebacterium sp. color verde y
los gránulos de color azul oscuro

1000 X
 VIDEO: Coloración de Albert

https://www.youtube.com/watch?v=SRvsE9yRIAk&t=28s