INMUNOBIOLOGÍA. Universidad del Valle de México.

Práctica número 4: Tinción de Gram

Hernández Colín, Ingrid Natasha; Castro Torres, Sofia; López Dávila, María Montserrat; Aguilar
Jasso, Lisset; Ramírez Muñoz, Raquel.
Asignatura: Inmunobiología en ciencias médico-odontológicas
Licenciatura Medicina
Periodo 2023 – 2029
Fecha de entrega: 27 de octubre del 2023
Docente: Erika Toledo Trejo

RESUMEN
Se realizo una investigación previa acerca de la tinción de Gram, así como, la clasificación que tiene.
Sin embargo, para la elaboración de nuestra práctica tuvimos que observar nuestra muestra con
diferentes químicos para poder saber que estructura tenia cada una, así mismo, elaboramos diversas
actividades para poder reforzar nuestros conocimientos acerca de las tinciones de Gram

Palabras clave: Microscopio, Bacterias, Tinciones, Gram, Objetivo

INTRODUCCIÓN

SEQC (2022) define a la tinción de Gram
como una prueba de laboratorio la cual es
utilizada para poder detectar si hay alguna
presencia de microorganismos, ya sean
bacterias o hongos.
Una vez hecho esto, es necesario calentar el
portaobjetos con nuestra muestra para poderlo
fijar, posteriormente tenemos que cubrir
nuestra muestra con un cristal violeta para que
después lavar nuestra muestra con un agente
de contraste llamado solución de Lugol, el cual
tiene como función unir el cristal violeta a la
bacteria y poder observarlo correctamente.

Luego volvemos a lavar nuestra muestra con

alcohol, donde las bacterias Gram positivas
empiezan a retener el cristal violeta y se
empieza a teñir de un color púrpura.

En cambio, las tinciones Gram negativas

empiezan a perder el cristal violeta y estás se
Figura 1. Tinción de Gram empiezan a quedar sin color.

Para poder utilizar la tinción de Gram es

necesario preparar la muestra de la bacteria
que queramos observar en un portaobjetos.

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Gram Negativas
Así como las tinciones Gram Positivas, las
tinciones Gram Negativas se pueden distinguir
porque al colocar una gota de la tinción
especial, estás se empiezan a teñir de un color
rosado. Un ejemplo de las tinciones Gram
Negativas es la Escherichia coli.

Figura 2. Muestras de tinciones Gram

negativas y positivas

Luego se aplicará un segundo tinte la cual va a

teñir las bacterias Gram negativas. Finalmente
podremos observar nuestra muestra en un
microscopio para así poder visualizarlas y
distinguir si son Gram positivas o negativas.

Es importante mencionar que para que las

bacterias puedan visualizarse en el Figura 4. Escherichia coli
microscopio es necesario conocer su
clasificación, es decir, su color y su forma. A pesar de que podemos distinguir a las
bacterias con las tinciones, también las
podemos distinguir a las bacterias por su
Como se mencionó anteriormente es necesario forma, es decir, las bacterias pueden tener
saber la clasificación de las bacterias las cuales forma de cocos o de bacilos.
son:
Gram Positivas
En las tinciones Gram Positivas las bacterias
se pueden distinguir fácilmente ya que estas al
poner una gota de la tinción especial estás se
empiezan a teñir de un color púrpura. Un
ejemplo de las tinciones Gram Positivas son
los Staphylococcus aureus.

Figura 5. Cocos y Bacilos

Figura 3. Staphylococcus aureus

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PLANTAMIENTO DEL PROBLEMA
¿Cómo podremos reconocer las diferencias
estructurales que tienen las bacterias Gram
negativas con las Gram positivas si aplicamos
la tinción simple con cristal violeta?
OBJETIVO
Que los alumnos sean capaces de llevar a cabo
la tinción de Gram, así como, en diferenciar
ambos grupos bacterianos. Así mismo, que los
alumnos puedan reconocer las diferencias
estructurales entre las bacterias Gram
negativas y las Gram positivas.
HIPÓTESIS
Si realizamos la tinción simple, así como, en
teñir correctamente nuestra muestra con cristal
violeta entonces podremos observar e
identificar correctamente las diferencias
estructurales que tienen las bacterias Gram
positivas y Gram negativas.
METODOLOGÍA
Estación 1. Diferencias estructurales entre
Gram (+) y Gram (-)
1. Por equipos deberán elaborar una
infografía en la plataforma de Canva
donde deberán representar
gráficamente las diferencias
estructurales de las bacterias Gram (+)
y Gram (-).
2. Una vez hecho lo anterior, tuvimos
que relacionar las diferencias
estructurales con los resultados que
obtuvimos en la tinción de Gram.
3. Al finalizar nuestra infografía la
tuvimos que exponer.
Estación 2. Simulador de la tinción de
Gram
1. Tuvimos que abrir el siguiente link.
https://learn.chm.msu.edu/vibl/vibl/Gram
Stain/gram_stain_HTML5Canvas.html
2. Una vez que abrimos el link, tuvimos
que leer con atención los pasos de la
tinción en la sección de “Steps”
3. Llevamos a cabo la tinción en nuestro
simulador, donde si el procedimiento
fue el correcto esté se deberá
visualizar de forma correcta.
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4. En caso de que no fuera correcto el
procedimiento deberemos hacerlo
nuevamente.
5. Tomamos captura de pantalla de
nuestro resultado.
6. Observamos cada uno de los ejemplos
mostrados en la sección “Examples”
7. Tuvimos que investigar las especies
bacterianas patógenas del ser humano
que posean dichas morfologías y su
tipo de Gram, estos resultados los
tenemos que poner en una tabla.
Estación 3. Tinción de Gram
Tuvimos que trabajar con las siguientes
muestras:
A) Muestra de bacterias Gram positivas
B) Muestras de bacterias Gran negativas
1. Tomamos nuestra muestra con el asa
bacteriológica y la disolvimos en una
gota de agua encima de un
portaobjetos
2. Dejamos secar nuestra muestra al aire
por 5 minutos
3. Colocamos una gota de cristal violeta
y dejamos reposarlo por 1 minuto
4. Enjuagamos cuidadosamente la
muestra con agua destilada, pero sin
tocar directamente nuestra muestra
5. Colocamos una gota de Lugol y
dejamos reposarlo por 1 minuto
6. Enjuagamos con agua destilada, pero
sin tocar directamente nuestra muestra
7. Decoloramos con alcohol – acetona
1:1 por 10 segundos
8. Enjuagamos cuidadosamente con
agua destilada, sin tocar nuestra
muestra
9. Colocamos una gota de safranina de
Gram y la dejamos reposar por 1
minuto
10. La enjuagamos cuidadosamente con
agua destilada
11. Colocamos el cubreobjetos en nuestra
muestra y lo observamos con el
objetivo 100X
12. Repetimos los pasos 1 al 11 para la
muestra B
13. Tomamos evidencias fotográficas y
las adjuntamos a nuestro reporte
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¿Cuáles son las principales diferencias
observadas entre ambas muestras? ¿Qué
morfología poseen ambas muestras
bacterianas? ¿Qué aplicaciones posee la
tinción de Gram en las ciencias biomédicas?
RESULTADOS
Estación 1. Diferencias estructurales entre
Gram (+) y Gram (-)
De acuerdo con las instrucciones de la estación
1 de nuestra práctica, tuvimos que elaborar una
infografía en Canva cuyo propósito era
identificar las diferencias estructurales entre
las bacterias Gram (+) y las bacterias Gram (-
) las cuales son:
Figura 6. Diferencia entre bacterias Gram (+)
y (-)
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Para mayor visualización de la infografía
deberás ingresar al siguiente link:
https://www.canva.com/design/DAFxG8F4kp
o/jnlNqNdhlcRsKujpldktEg/edit?utm_content
=DAFxG8F4kpo&utm_campaign=designshar
e&utm_medium=link2&utm_source=sharebu
tton
Estación 2. Simulador de tinción
De acuerdo con las instrucciones de la estación
2 de nuestra práctica realizamos un simulador
de la tinción de Gram. Una vez que realizamos
nuestro simulador de la tinción de Gram
tuvimos que observar algunos de los ejemplos
que nos proporcionó el simulador los cuales
son:
Muestras de bacterias Gram positivas
Figura 7. Muestra de Gram (+)
Staphylococcus aureus
Figura 8. Muestra de Gram (+) Streptococcus
pyogenes
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Muestras de bacterias Gram negativas

Figura 9. Muestra de Gram (+) Streptococcus

pneuminiae
Figura 12. Muestra de Gram (-) Pseudomas
aeruginosa

Figura 10. Muestra de Gram (+)

Corynebacterium diphtheriae Figura 13. Muestra de Gram (-) Neisseria
gonorrhoeae

Figura 11. Muestra de Gram (+) Bacilus Figura 14. Muestra de Gram (-) Haemophilus
anthracis influenzae

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Para finalizar la estación 2 de nuestra práctica

elaboramos una tabla comparativa donde
investigamos las especies bacterianas
patógenas que posean dichas morfologías y un
ejemplo, los cuales son:

Morfología Ejemplos
Estafilococos Staphylococcus aureu,
Gram (+) Staphylococcus epidermidis, Figura 15. Colocación de la gota de cristal
Staphylococcus saprophy&cus violeta en nuestra muestra
Estreptococos Streptococcus pneumoniae
Gram (-) Luego de dejar reposar nuestra muestra la
enjugamos cuidadosamente con agua destilada
para después poderle colocar una gota de
Diplococos Gram Enterococcus faecalis,
Lugol y ponerla a reposar por 1 minuto
(+) Streptococcus agalactiae

Bacilos Gram (+) Bacillus, sub&lis, Clostridium

botulinum, Mycobacterium
tuberculosis
Bacilos Gram (-) Escherichia colil, Salmonella,
Klebsiella pneumoniae,
Helicobacter pylori
Diplococos Gram Neisserian meningi&dis,
(-) Moraxella catarrhalis,
Figura 11. Colocación de la gota de Lugol
Hemophilus influenzae
Una vez más enjuagamos nuestra muestra y le
Estación 3. Tinción de Gram volvemos agregar una gota de safranina de
En la estación número 3 tomamos nuestra asa Gram, otra vez lo dejamos reposar por 1
bacteriológica la cual la utilizamos para poder minuto y lo volvemos a enjuagar con agua
tomar nuestra muestra y poderla colocarla en destilada.
nuestro portaobjetos. Una vez hecho esto
dejamos secar nuestra muestra por
aproximadamente 5 minutos.

Luego colocamos una gota de cristal violeta en

nuestra muestra la cual la dejamos reposar por
1 minuto.

Figura 12. Colocación de la gota de safranina

de Gram

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Una vez que hicimos los procedimientos

anteriores, tomamos nuestra muestra y lo
colocamos encima el cubreobjetos para que
después lo tengamos que colocar en nuestro
microscopio y podamos observar nuestras
muestras en nuestro microscopio en diferentes
objetivos, tales como, el objetivo 4X, 10X y
40X.

A la primera muestra le colocamos una gota de

cristal violeta en nuestra muestra la cual la
dejamos reposar por 1 minuto, donde una vez
hecho esto obtuvimos los siguientes Figura 15. Muestra con el
resultados: objetivo 40X

Para nuestra segunda muestra colocamos una

gota de Lugol y la dejamos reposar por 1
minuto, donde una vez hecho esto obtuvimos
los siguientes resultados:

Figura 13. Muestra con el objetivo 4X

Figura 16. Muestra con gota

de Lugol a un objetivo de 4X

Figura 14. Muestra con el objetivo 10X

Figura 17. Muestra con gota

de Lugol a un objetivo de 10X

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Figura 17. Muestra con gota de Lugol a un
objetivo de 10X
Para nuestra tercera muestra colocamos una
gota de safranina de Gram y la dejamos
reposar por 1 minuto, donde una vez hecho
esto obtuvimos los siguientes resultados:
Figura 18. Muestra con una gota de safranina
de Gram a un objetivo de 4X
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Figura 19. Muestra con una gota de safranina
de Gram a un objetivo de 40X
ANÁLISIS DE RESULTADOS
De acuerdo a los resultados anteriores
logramos aprender más sobre las tinciones, ya
que gracias a ellas podemos identificar a las
bacterias y también para identificar si hay
alguna sospecha de infección en ellas.
Sin embargo, al realizar nuestra práctica
tuvimos algunas complicaciones debido a que
se nos dificultó enfocarlos en el microscopio
debido a que nuestras muestras estaban muy
dispersas, pero a través de la práctica logramos
observar las estructuras de las bacterias, tales
como, los cocos o bacilos.
CONCLUSIÓN
De acuerdo con todo lo expuesto en la práctica,
podemos concluir que las tinciones de Gram
son de gran utilidad para el área de salud ya
que gracias a ellas podemos saber si hay
alguna sospecha de infección, así como, la
morfología de las bacterias Gram (+) y Gram
(-) y su clasificación.
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BIBLIOGRAFÍA

SEQC (2022) Tinción de Gram. SEQC.

Recuperado de:
https://www.labtestsonline.es/tests/tin
cion-de-gram

COPISA (2023) La tinción de Gram: pasos y

bacterias frecuentes halladas en las
pruebas. COPISA. Recuperado de:
https://copisa.com.mx/la-tincion-
gram-pasos-para-realizar-la-prueba/

ULPGC (2023) Tinción de Gram. ULPGC.

Recuperado de:
https://www2.ulpgc.es/hege/almacen/
download/35/35696/tincion_de_gram
.pdf