Docente: Wilberto Effio Q.

CULTIVOS MICROBIANOS
INTRODUCCION

• El estudio de los microorganismos lleva consigo la utilización de una amplia

gama de medios de cultivo tanto líquidos como sólidos pero previamente es
necesario obtener cultivos puros de aquellos.

• Cualquier inoculo primario contendrá probablemente varios tipos distintos

de microorganismos que darán lugar a un cultivo mixto. Efectuando una
cuidadosa inoculación en un medio sólido en placa de cultivo se obtienen
colonias separadas de cada microorganismo presente, cada una de las
cuales procede en la mayoría de los casos de la multiplicación de un solo
microorganismo.

• Una sola célula da origen a una población genéticamente homogénea y es

denominada clon, colonia o cultivo puro.
MEDIO DE CULTIVO

• Conjunto de componentes que crean condiciones necesarias para

el desarrollo de los microorganismos

• Sustrato natural o artificial o una solución de ciertos nutrientes que

permiten cultivar los microorganismos de una manera más eficiente
para su posterior uso en el laboratorio.

COMPOSICION

•Macro nutrientes.
•Micronutrientes o elementos traza.
•Factores de crecimiento
MACRONUTRIENTES
MICRONUTRIENTES
FACTORES DE CRECIMIENTO
CONSTITUYENTES HABITUALES

• Agentes gelificantes: Agar

• Extractos: Levadura, carne, hígado, semilla

• Peptonas: Soja, carne, gelatina, caseína.

• Sistemas Amortiguadores: Fosfatos.

• Indicadores de pH: Rojo neutro, cristal violeta, rojo de fenol.

• Agentes Reductores: Microaerofilia o anerofilia.

• Agentes Selectivos: Sales biliares, antibióticos.

CONDICIONES GENERALES

• Disponibilidad de nutrientes adecuados:

• Consistencia adecuada de los medios
• Presencia o ausencia de oxigeno y otros gases.
• Condiciones adecuadas de humedad
• Luz ambiental.
• pH
• Temperatura
• Esterilidad del medio
CLASIFICACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO:

• DE ACUERDO A LA CONSISTENCIA O ESTADO FISICO:

• Medios Líquidos: Carecen de Agar, al crecer en un medio líquido un

microorganismo utiliza los compuestos del mismo así como excreta los
productos metabólicos bacterianos en él. Permite que crezcan bacterias que se
encuentran en poca cantidad.

• Medio Sólido: Los microorganismos se multiplican localmente en el punto de la

inoculación y forman colonias cuya apariencia frecuentemente es típica de cada
especie determinada. Para conseguir medios sólidos se agrega a un medio
líquido agar en una proporción del 1.5% al 2%. permite detectar los diferentes
tipos de bacterias que puedan encontrarse en una sola muestra.
• DE ACUERDO A LOS NUTRIENTES:
• Medios Simples: Poseen los nutrientes mínimos para permitir el desarrollo de
microorganismos menos exigentes.

• Medio Enriquecido: A estos medios se les incorpora sustancias que

proporcionan características nutritivas complementarias para que el medio
pueda servir como sustrato para los microorganismos más exigentes.

• Medios Selectivos: Se les incorpora sustancias para inhibir el crecimiento de

la mayor parte de los microorganismos con excepción de aquellos para los que
son ideados.

• Medios Diferenciales: Estos medios contienen sustancias o indicadores que

permiten la diferenciación de un microorganismo a otro.
 MEDIOS DE CULTIVO COMUNES

• Agar nutritivo:
• El Agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina
para todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece solido incluso
a relativas altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en
este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las
colonias pequeñas.

• En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece

como una sustancia espesa, con colonias difícilmente observables. El
agar nutritivo contiene normalmente (w/v).
• 0.5 % Peptona
• 0.3 % extracto de carne/extracto de levadura
• 1.5 % agar
• 0.5% NaCl
• Agua destilada
• pH casi neutro (6.8) a 25 °C.
• Agar S.S. (Salmonella - Shiguella)
• Usado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de
Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los
cuales se sospeche su presencia. Medio de cultivo selectivo y
diferencial. La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde
brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la
mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Es
diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de
ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio.
• Pluripeptona 5.0
• Extracto de carne 5.0
• Lactosa 10.0
• Mezcla de sales biliares 8.5
• Citrato de sodio 8.5
• Tiosulfato de sodio 8.5
• Citrato férrico 1.0
• Agar 13.5
• Verde brillante 0.00033
• Rojo neutro 0.025
• pH final: 7.0 ± 0.2
• Agar Baird – Parker:

• Permite el crecimiento de Staphylococcus coagulasa positivos, a la vez que los

diferencia del resto.

• Agar Lowenstein – Jensen:

• Los nutrientes de este medio basal, más los aportados por el agregado de la

mezcla de huevos, constituyen un rico soporte para el crecimiento de una gran

variedad de micobacterias.
 PREPARACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO

• Erlenmeyers de 100 ml

• Placas de petri

• Tubos de ensayo

• Pipeta de 10 ml

• Probeta de 100 ml

• Espátula

• Balanza

• Autoclave, estufa y horno

• Agares
PROCEDIMIENTO:

• Teniendo en cuenta el volumen de agua a utilizar, haga la relación de polvo de agar

que debe pesar de acuerdo a lo especificado en la etiqueta del medio.

• Pesar la cantidad del medio necesario de acuerdo a los cálculos.

• Mezcle el polvo con la mitad del volumen de agua medida anteriormente, agite y
adicione el restante de agua.

• Lleve a hervir si es necesario (en caso de los Agares)

• Esterilizar en el autoclave a 15 lb de presión a 121ºC por 15 minutos.

• Sirva 15-18 ml aproximadamente de agar en cada caja cuando la temperatura este a

50-55ºC, tápelas y deje solidificar. Lo mismo con los caldos sirva 7-10 ml en cada
tubo y tápelos.

• - Dejar enfriar y guárdelos en la nevera hasta su utilización

GRACIAS