UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTIN DE AREQUIPA

INGENIERÍA DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

DOCENTE: Dra Sonia Zanabria, Ing. Biotecnología de los Alimentos
Nombre y Ap.: Liz Marion Rivas Barrionuevo

BIOPROCESSING PART 3: PURIFICATION

En este video describe el proceso mediante el cual un producto biológico, en este caso,
una solución pura y concentrada de proteína verde fluorescente (GFP), se deriva del lisado
clarificado. Esto se logra mediante múltiples variaciones de dos procedimientos básicos:
cromatografía y filtración.
para esto se utiliza varios tipos de cromatografía en columna (cilindro lleno de perlas de
vidrio, cerámica entre otros) para interactuar con las moléculas en función, la
cromatografía utiliza la separación de proteínas de otras, la cromatografía es el
intercambio ionico o interacción hidrofoobica o HIC.
El equipo de cromatografía esta equipado con perlas de resina además de bombas para
mover el lisado clarificado através del proceso con puertos de salida y entrada. En el
proceso tenemos sensores de control como un medidor de flujo, velocidad de movimiento
entre otros.
TFF filtración de flujo tangencial esta es una esencia de proceso simple, se bombea un
fluido de un tipo de filtro conocido como membrana de ultrafiltración, El tamaño de los
poros en el material del filtro determina que pasa y que se retiene. Este tiene 2 usos
Diafiltracion y filtración
El proceso de purificación comienza cuando el tanque de transferencia a la bomba de
entrada en la plataforma de cromatografía. El primer paso de cromatografía en nuestra
proteína verde fluorescente. El proceso de purificación es un intercambio de iones en este
punto del proceso, el pH del lisado clarificado es de aproximadamente 8.0, lo que significa
que la proteína está cargada negativamente porque está cargada negativamente. fade from
The Vessel tiene el primer sensor de conductividad y sensor de presión y a través del
prefiltro de 0.45 micrones el prefiltro elimina cualquier residuo celular u otras partículas
que puedan haber contaminado la solución si un prefiltro comienza a obstruir el sensor
de presión en el lado de entrada del filtro registrará un aumento de presión y el controlador
señalará el necesidad de un cambio de filtro después del prefiltrado y antes de la columna,
los piojos ocho pasan a través de un medidor de flujo y tienen las luces ocho pasan sobre
las perlas de resina la proteína cargada negativamente se une a las tarifas cargadas
positivamente la solución que sale de la columna pasa un Ubee óptico sensor de densidad
un sensor de conductividad y un sensor de pH los sensores de densidad óptica lecturas
bajas confirman que el gfp no está en la solución a la válvula de salida envía la solución
al desperdicio cuando todas las luces Tate ha entrado en la columna o cuando la capacidad
de las perlas para encontrar la proteína ha sido alcanzada su momento para la ilusión
ilusión es la liberación de, en este caso, proteína verde fluorescente de las abejas mediante
el uso de una nueva solución en este caso el tampón que incluye solución de cloruro de
sodio nac ¿cómo es que el nuevo Fifer se bombea a través de las abejas en algún momento
el gfp ya no encuentra a los latidos y se libera en NaCl? las abejas y se libera en el tampón,
la corriente de producto resultante generalmente se conoce como eluato el sensor de
densidad óptica UV que mide la concentración de proteína indica qué producto comienza
a saludar desde la columna en este punto Salida válvulas o interruptor para permitir el
flujo de la corriente de producto a un recipiente de recolección cuando el sensor UV indica
que todo el gfp se ha desprendido de la resina de cromatografía las válvulas de salida se
cambian a desperdicio con todo el eluato se ha recogido y extraído un paso de
cromatografía de intercambio iónico ha finalizado y es hora de cromatografía de
interacción hidrofóbica HIC Kohl's en la superficie de la resina se unirá a parches
hidrofóbicos en la proteína gfp para que esto suceda, la resina y la proteína eluato deben
estar en un ambiente con alto contenido de sal para eliminar el agua que protege la sal
que usamos es sulfato de amonio para eliminar la proteína gfp adherida de la columna
HIC, simplemente bajamos la concentración de sal durante la ilusión, lo que hace que la
protección contra el agua se vuelva a formar y la proteína GFP se separe de la resina en
el flujo de ilusión rico en proteínas. eluato se recoge en la piscina, el producto ahora está
listo para el último paso importante tff, en este punto del proceso, se puede utilizar una
filtración de flujo suave para concentrar trate y filtre el flujo de productos de GFP el
eluato es proteína rica y fluorescente verde, pero aún está demasiado diluida y se tira a
través de una bomba, pase un sensor de presión y luego a través de la membrana del filtro
se conoce todo lo que pasa a través de la membrana, incluida la solución tampón como
permeado y para este proceso se envía al desperdicio la proteína GFP es más grande que
los poros de la membrana y por lo tanto se retiene el material retenido llamado escrito se
recircula al tanque de suministro la recirculación de la alimentación continúa hasta que
se alcanza la concentración deseada de gfp siguiendo concentración y mientras la solución
de proteína está recirculando una nueva solución, se agrega un tampón de
almacenamiento a la alimentación de entrada afecta la proteína se está lavando por el flujo
de una nueva solución tampón hacia adentro y la vieja solución tampón hacia afuera, ya
que este paso de diafiltración recibe la solución adecuada que está siendo un gran filtro
final y luego se recolectan los contenedores apropiados, generalmente botellas o bolsas,
el proceso de purificación es completar el concentrado de proteína verde fluorescente
ahora puede moverse hacia abajo hasta el acabado de la factura final para ser liofilizado
y empaquetado.