Alumna: Ccorimanya Suca Lisbeth Marlene Horario: Lunes 13.

00 a 17:00

RESUMEN DE HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY HPLC- UV-VIS DETECTOR

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cromatografía líquida de alta resolución es una técnica y química analítica utilizado para separar
identificar y cuantificar cada componente en una mezcla, así como otras formas de
cromatografía en HPLC.

cromatografía líquida de alta resolución es una técnica y química analítica utilizado para separar
identificar y cuantificar cada componente en una mezcla, así como otras formas de
cromatografía en HPLC hay una fase móvil que forzada por una bomba para pasar por el sistema
y hay una fase estacionaria llamada columna que se encuentra en un horno donde la
temperatura se puede controlar la muestra se puede inyectar automáticamente en un sistema
de HPLC.

También hay un detector adjunto al Sistema de HPLC que mide los analitos después de su
separación en la columna la bomba fuerza la fase móvil a través la columna y luego el detector
debajo altas presiones en el sistema de HPLC una bomba de vacío, utilizado para eliminar los
gases disueltos de los disolventes a los que la bomba impulsa cada disolvente

la cámara de mezcla donde se lleva a cabo la mezcla colocar bajo presiones más altas HPLC. El
análisis comúnmente usa isocrático o gradiente de elución un modo isocrático

la composición de la fase móvil permanece constante durante todo el procedimiento mientras

que en el modo degradado el móvil La composición de la fase cambia durante el proceso de
separación.

la introducción de la muestra se puede lograr de varias formas, el método más simple es utilizar
una válvula de inyección en la carga de alta presión. El solvente fluye a la columna directamente
el bucle se carga en la atmósfera.

después de cargar la muestra la válvula se cambia a la posición de inyección, el flujo entregado

por la bomba fluye a través del bucle forzando la muestra delante de él fluyendo hacia la
columna, luego la válvula vuelve a la carga posición y la fase móvil mueve la muestra a través de
la columna.

la separación se basa en diferencial particionamiento de los componentes de la muestra entre

las fases móvil y estacionaria, el componente que tiene más afinidad con la fase móvil en
consecuencia menos la afinidad con la fase estacionaria viaja más rápido y eludido primero y el
componente que tiene más afinidad con la fase estacionaria consecuentemente más la
interacción viaja más lenta y diluida

Posteriormente esta separación se puede realizar según el tipo de HPLC utilizado hay dos tipos
principales de HPLC inversa fase y fase normal. fase inversa tiene una fase estacionaria no polar
y fase móvil moderadamente polar común, La fase estacionaria es una sílice que tiene ha sido
modificado adjuntando una recta grupo alquilo de cadena a su superficie como el ITAT como
grupo c18 o el octal grupo c8
estar en la fase estacionaria cuanto más polares son, más preferirán la fase móvil luego la
cromatografía de fase normal la fase estacionaria es polar y la móvil, la fase es no polar este
método separa analitos basados en su afinidad por una superficie polar estacionaria como la
sílice en este caso, cuanto más polares son los analitos son los más retenidos estarán en la fase
estacionaria más hidrofóbicos son cuanto más lo harán.

se pueden utilizar diferentes tipos de detectores como el UV este detector quemostrando un

de absorción en el región ultravioleta o visible para UV, detección de una lámpara de descarga
de deuterio como se utiliza una fuente de luz y cuatro detecciones de componentes y región
visible

se utiliza una lámpara de tungsteno y luego UV este detector también podemos encontrar la
rendija de entrada prisma de lente o salida de rejilla de difracción

celda de flujo de hendidura y detector para medidas de absorción. La luz de la lámpara se

muestra en el prisma y dispersos según longitud de onda cuando la medida es realizada con una
longitud de onda específica

El ángulo del prisma se ajusta de modo que la luz de esta ola puede brillar en la celda de flujo
como el fanático compuesto de la columna entran en la celda de flujo. los electrones de estos
compuestos pueden absorber energía en forma de ultravioleta o luz visible

el número de picos presentes puede indicar cuántos componentes hay en la mezcla

generalmente el eje x de la HPLC. El cromatograma muestra la cantidad de tiempo tomado para
que los analitos pasen la columna y llegar al detector, típicamente el eje y es un reflejo de la
cantidad de un analito específico que está presente.