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AUTORIZACIÓN ANMAT
PM -1292 - 22
Dir. Técnico: Bioq. Alejandro Rossi
SÍMBOLOS UTILIZADOS
SÍMBOLOS UTILIZADOS
SIM Medio
USO Enfriar y solidificar en posición vertical.
Medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de
indol y de sulfuro de hidrógeno por los microorganismos. CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae. Medio de cultivo deshidratado: color beige, homogéneo, libre des-
lizamiento.
FUNDAMENTO Medio de cultivo preparado: color ámbar.
Medio de cultivo en el cual la tripteína y la peptona aportan nutrien-
tes para el desarrollo microbiano. El triptófano es un aminoácido ALMACENAMIENTO
constituyente de muchas peptonas y particularmente de la tripteína Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
y puede ser metabolizado por algunas bacterias para formar indol. Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.
En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas tripto-
fanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo PROCEDIMIENTO
de Ehrlich (Indol Reactivo REF B1550361) o de Kovac´s, para Siembra
originar un compuesto de color rojo. Por punción profunda utilizando aguja de inoculación recta.
A partir del tiosulfato de sodio los microorganismos pueden gene- Inocular el centro del tubo, y la punción debe abarcar 2 tercios de
rar ácido sulfhídrico que reacciona con el hierro presente formán- profundidad del medio de cultivo desde la superficie.
dose un compuesto de color negro.
El agar es el agente solidificante y a esta concentración le otorga Incubación
al medio la propiedad de ser semisólido, condición necesaria para En aerobiosis. a 33-37 °C, durante 18-24 horas.
detectar movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del me-
dio o por crecimiento que difunde mas allá de la línea de siembra INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
del microorganismo en estudio. Observar la movilidad y el color del medio de cultivo. Luego realizar
la prueba de indol.
CONTENIDO Y COMPOSICIÓN
Código B0213105: envase x 100 g. Movilidad:
Código B0213106: envase x 500 g. Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas allá de
la línea de siembra.
FÓRMULA (en gramos por litro) Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.
TRIPTEÍNA ..................................................................................................................................20.0
PEPTONA ....................................................................................................................................... 6.1 Producción de SH2:
SULFATO DE HIERRO Y AMONIO ......................................................................... 0.2 Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo a lo largo
TIOSULFATO DE SODIO ................................................................................................... 0.2 de la línea de siembra o en todo el medio.
AGAR .................................................................................................................................................. 3.5 Resultado negativo: el medio permanece sin cambio de color.
pH FINAL: 7.3 ± 0.2
Prueba del indol:
INSTRUCCIONES Agregar al medio de cultivo 3 a 5 gotas de Indol Reactivo (REF
Suspender 30 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5 B1550361).
minutos. Calentar con agitación frecuente y hervir durante un minu- Resultado positivo: color rojo.
to para disolución total. Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece in-
a 121°C durante 15 minutos. coloro-amarillento.
calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según requeri-
CONTROL DE CALIDAD miento.
REFERENCIAS
CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO - Ewing. 1986. Edwards and Ewing’s identification of Enterobacte-
Medio sin inocular Sin cambios riaceae, 4th ed. Elsevier Science Publishing Co., New York, N.Y.
- Holt, Krieg, Sneath, Staley and Williams (ed.). 1994. Bergey’s
LIMITACIONES Manual of determinative bacteriology, 9th ed. Williams & Wilkins,
- Para un correcto ensayo, agregar el Indol Reactivo luego que se Baltimore, Md.
interpretó el resultado de la movilidad y la producción de ácido sul- - Murray P.R., Baron, Pfaller, Tenover and Yolken. 1999. Manual of
fhídrico. clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology,
- La movilidad puede ser difícil de observar en las bacterias ae- Washington, D.C.
robias estrictas ya que sólo crecen en la superficie del medio de - MacFaddin. 2000. Biochemical tests for identification of medical
cultivo. bacteria, 3rd ed. Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, Md.
- Algunas bacterias productoras de melanina como M. morganii,
pueden generar un color parduzco en el medio de cultivo. Este color INDICACIONES AL CONSUMIDOR
no debe confundirse con el ennegrecimiento debido a la produc- Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento.
ción de ácido sulfhídrico. Conservar el producto según las indicaciones del rótulo.
SÍMBOLOS UTILIZADOS
SÍMBOLOS UTILIZADOS
MR-VP Medio
USO CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
Medio utilizado para la realización del ensayo de Rojo de Metilo y Medio de cultivo deshidratado: color beige claro, homogéneo, libre
Voges Proskauer. deslizamiento.
Es particularmente útil para la clasificación de enterobacterias. Medio de cultivo preparado: color ámbar claro, transparente sin pre-
cipitado.
FUNDAMENTO
En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes nece- ALMACENAMIENTO
sarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
carbono fermentable. Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a
través de distintas vías metabólicas. Según la vía utilizada, se origi- PROCEDIMIENTO
narán productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido Siembra
fórmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol). Por inoculación directa a partir del cultivo en estudio.
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podría ser reconoci-
da por la adición de un indicador como rojo de metilo, para revelar Incubación
la presencia de productos ácidos, y por la adición de alfa naftol En aerobiosis, a 33-37°C durante 48 a 72 horas.
e hidróxido de potasio para evidenciar la presencia de productos
finales neutros. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Voges y Proskauer, describieron una coloración rojiza que aparecía Examinar los tubos y revelar las pruebas bioquímicas
después de adicionar hidróxido de potasio a los cultivos de ciertos Prueba del rojo de metilo: añadir unas gotas de una solución de rojo
microorganismos en medio con glucosa. Esta coloración se debe a de metilo al 0.04%, observar el color del medio.
la oxidación del acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona con Prueba del Voges Proskauer: añadir 0,6 ml de alfa naftol al 5% en
la peptona del medio para dar un color rojo. alcohol etílico absoluto y 0.2 ml de hidróxido de potasio al 40% a
2.5 ml de cultivo. Agitar vigorosamente el tubo, y dejar a tempe-
CONTENIDO Y COMPOSICIÓN ratura ambiente durante 10-15 minutos. Observar el color de la
Código B0213905: envase x 100 g. superficie del medio.
Código B0213906: envase x 500 g.
Interpretación:
FÓRMULA (en gramos por litro)
PLURIPEPTONA .....................................................................................................................7.0 Prueba del rojo de metilo:
GLUCOSA..................................................................................................................................... 5.0 Resultado positivo: color rojo.
FOSFATO DIPOTÁSICO.................................................................................................... 5.0 Resultado negativo: color amarillo.
pH FINAL: 6.9 ± 0.2
Prueba de Voges Proskauer:
INSTRUCCIONES Resultado positivo: desarrollo de un color rojo en pocos minutos
Suspender 17 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5 después de una completa agitación del tubo.
minutos. Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición para Resultado negativo: ausencia de color rojo.
disolución total. Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a 118-
121°C durante 15 minutos.
sivo.
CONTROL DE CALIDAD - No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o da-
ñado.
MICROORGANISMOS CRECIMIENTO PRUEBA DEL PRUEBA DE - No utilizar el producto si existen signos de contaminación o dete-
ROJO DE METILO VOGES rioro, así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
PROSKAUER
Escherichia coli Satisfactorio + - - Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el produc-
ATCC 25922 to.
Klebsiella pneumoniae Satisfactorio - + - Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y ma-
ATCC 700603 nipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
Proteus mirabilis Satisfactorio + - establecidadas por el laboratorio.
ATCC 43071 - Las características del producto pueden alterarse si no se conser-
Salmonella typhimurium Satisfactorio + - va apropiadamente.
ATCC 14028 - Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
Enterobacter cloacae Satisfactorio - + mismo según reglamentaciones vigentes.
ATCC 13047
REFERENCIAS
CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO - Voges and Proskauer. 1898. Z. Hyg. 28:20.
Medio sin inocular Sin cambios - Clark W.M., and Lubs H.A. 1915. The differentiation of bacteria
of the colon-aerogenes family by use of indicators. J. Infect. Dis.
LIMITACIONES 17:160-173.
- Examinar los tubos y realizar la prueba de Rojo de Metilo y Voges - MacFaddin. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-
Proskauer luego de la incubación durante 48 a 72 horas. No reali- maintenance of medical bacteria, vol. 1. Williams & Wilkins, Balti-
zar las pruebas a las 24 horas debido a la presencia de resultados more, Md.
falsos positivos y falsos negativos respectivamente. - Ewing. 1986. Edwards and Ewing’s identification of Enterobac-
- En algunas cepas positivas para la prueba VP, puede no desarro- teriaceae, 4th ed. Elsevier Science Publishing Co., Inc., New York,
llar el color rojo en la superficie mediante el revelado por la meto- N.Y.
dología descripta anteriormente. En estos casos, se recomienda ca- - Isenberg (ed.). 1992. Clinical microbiology procedures handbook,
lentar el medio de cultivo para favorecer el desarrollo de color rojo. vol. 1 American Society for Microbiology, Washington, D.C.
- Murray P.R., Baron, Pfaller, Tenover and Yolken. 1999. Manual of
MATERIALES NECESARIOS NO PROVISTOS clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology,
Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de Washington, D.C.
calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según requeri-
miento. INDICACIONES AL CONSUMIDOR
Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento.
PRECAUCIONES Conservar el producto según las indicaciones del rótulo.
- Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclu-
AUTORIZACIÓN ANMAT
PM -1292 - 22
Dir. Técnico: Bioq. Alejandro Rossi
03/2021 - REV .02
SÍMBOLOS UTILIZADOS
EXPLICACIÓN
Recomendado por la Asociación Americana de Salud Pública (APHA) para la cuenta de bacterias de interés
sanitario, que son indicadores de contaminación o biocarga en alimentos, agua, agua residual y productos lácteos.
También se conoce como Agar para Cuenta en Placa.
En este medio la peptona de caseína proporciona los aminoácidos, el nitrógeno y otras sustancias necesarias para
el crecimiento de los microorganismos. La vitamina B es proporcionada por el extracto de levadura. La dextrosa
provee la fuente de carbohidratos. El Agar es el agente solidificante.
PREPARACIÓN
Método
Suspender 23.5 gramos del medio en un litro de agua purificada. Mezclar, calentar con agitación suave
hasta su completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras de
presión) durante 15 minutos. Enfriar a una temperatura entre 45-50 °C y vaciar en placas de Petri estériles.
Procedimiento
1. Consultar las referencias apropiadas respecto a los procedimientos para procesar y sembrar
muestras de alimentos, agua y otros materiales.
2. Colocar alícuotas de la muestra en las placas de Petri estéril y vaciar el medio enfriado a 45-50°C.
Mezclar, dejar solidificar e incubar. Este medio también pueden utilizarse para hacer la siembra por
filtración de membrana.
3. Incubar a 35 + 2°C de 24 a 48 horas.
CARACTERÍSTICAS
La morfología colonial típica y recuperación se describe en la siguiente tabla:
PRESENTACIÓN Y ALMACENAMIENTO
CAT. No PRESENTACIÓN ALMACENAMIENTO
7121 Medio deshidratado Frasco con 450g 2-30°C
7122 Medio deshidratado Frasco con 500g 2-30°C
7123 Medio deshidratado Sobres 2-30°C
7123C Medio deshidratado Sobres (Caja/20 sobres) 2-30°C
7127 Medio deshidratado Cubeta con 5 Kg 2-30°C
7127A Medio deshidratado Cubeta con 10Kg 2-30°C
7127D Medio deshidratado Cuñete con 25 Kg 2-30°C
7127B Medio deshidratado Cuñete con 50 Kg 2-30°C
7124 Medio preparado en Placa (Pqte/10 Placas) 2-8°C
7126 Medio preparado en Frasco (Caja/12 Frascos 140 mL) 2-8°C
BIBLIOGRAFÍA
1. American Public Health Asociation, Estándar. Methods for the examination of Dairy Products, 13th De APHA 1972.
2. Koneman E. Allen S. 2008 Koneman diagnostic microbiológico: texto y atlas en color. Ed. Médica Panamericana. Pág. 210.
3. Ujat 2007 Memorias de la Semana de Divulgación y Video científico. Ed.Univ. J. Autónoma de Tabasco Pág 249.
4. Recommended Methods for the Microbiological Examination of Foods. APHA Inc. New York, 1958. Standard Methods for the Examination of Water
and Wastewater. APHA Inc. New York. 1960
5. Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos: Suplemento para Dispositivos Médicos. 3a. Ed. -- México: Secretaría de Salud, Comisión Permanente
de la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 2014.
B0217405 B0217406
SÍMBOLOS UTILIZADOS
E. C. Medio
USO Medio de cultivo preparado: color ámbar claro.
Medio utilizado para el recuento de coliformes totales, coliformes
fecales y Escherichia coli en agua, alimentos y otros materiales. ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
FUNDAMENTO Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.
Medio recomendado por Hajna y Perry y por el Standard Methods
for the Examination of Water and Wastewater para el recuento de PROCEDIMIENTO
coliformes en alimentos. Siembra
En el medio de cultivo la tripteína es la fuente de péptidos, aminoá- Para recuento de coliformes totales, técnica del Número Mas Pro-
cidos y nitrógeno. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable bable:
y favorece el desarrollo de bacterias coliformes, las sales biliares a.- Para el análisis de muestras fluidas como el agua, sembrar por
inhiben el crecimiento de la flora acompañante Gram positiva, las triplicado: 10 ml en caldo doble concentración y 1ml y 0,1 ml en
sales fosfato constituyen un sistema buffer que impide que los pro- caldo simple concentración.
ductos ácidos originados por la fermentación de lactosa afecten el
crecimiento microbiano y el cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico. NÚMERO VOLUMEN DE VOLUMEN DE CONCENTRACIÓN
DE TUBOS LA MUESTRA MEDIO DEL MEDIO
CONTENIDO Y COMPOSICIÓN 3 10 ml 10 ml Doble
Código B0216805: envase x 100 g. 3 1 ml 10 ml Simple
Código B0216806: envase x 500 g. 3 0.1 ml 10 ml Simple
FÓRMULA (en gramos por litro) b - Para muestras sólidas (alimentos, cosméticos, fármacos), efec-
TRIPTEÍNA ..................................................................................................................................20.0 tuar diluciones seriadas 10-1, 10-2 y 10-3 y sembrar cada dilución
LACTOSA ........................................................................................................................................ 5.0 por triplicado en medio de cultivo simple concentración.
SALES BILIARES N° 3........................................................................................................1.5
FOSFATO DIPOTÁSICO .................................................................................................... 4.0 NÚMERO DILUCIÓN DE VOLUMEN DE VOLUMEN DE CONCENTRACIÓN
FOSFATO MONOPOTÁSICO ........................................................................................ 1.5 DE TUBOS LA MUESTRA LA MUESTRA MEDIO DEL MEDIO
CLORURO DE SODIO ....................................................................................................... 5.0 3 10-1 1 ml 10 ml Simple
pH FINAL: 6.9 ± 0.2 3 10 -2
1 ml 10 ml Simple
3 10 -3
1 ml 10 ml Simple
INSTRUCCIONES
Suspender 37 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar Incubación
reposar 5 minutos. Calentar con agitación frecuente y llevar a ebu- Para el recuento de coliformes totales: en aerobiosis, a 33-37 °C
llición para su total disolución. Distribuir en tubos de ensayo que durante 24 - 48 horas.
contengan campanitas de Durham. Esterilizar en autoclave a 121°C Para el análisis de coliformes fecales y Escherichia coli: en aerobio-
durante 15 minutos. sis, a 44,5 - 45,5 °C durante 24 horas.
REFERENCIAS
CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO - Hajna and Perry. 1943. Am. J. Public Health 33:550.
Medio sin inocular Sin cambios - Marshall (ed.). 1993. Standard methods for the examination of
dairy products, 16th ed. American Public Health Association, Was-
Expresión de Resultados: Para muestras fluidas expresar el NMP hington, D.C.
por 100 ml de muestra, y para muestras sólidas expresarlo por gra- - Clesceri, L.S., Greenberg A.E., Eaton A.D. 1998. Part 9000, Micro-
mo de producto. biological Examination., Standard Methods for the Examination of
Water and Wastewater 20th Edition, APHA.
MATERIALES NECESARIOS NO PROVISTOS - Downes and Ito (ed.). 2001. Compendium of methods for the mi-
Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de crobiological examination of foods, 4th ed. American Public Health
calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según requeri- Association, Washington, D.C.
miento.
INDICACIONES AL CONSUMIDOR
PRECAUCIONES Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento.
- Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclu- Conservar el producto según las indicaciones del rótulo.
AUTORIZACIÓN ANMAT
PM -1292 - 22
Dir. Técnico: Bioq. Alejandro Rossi
04/2021 - REV .03
SÍMBOLOS UTILIZADOS