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OBJETIVOS
Para poder estudiar los microorganismos, se necesita como requisito previo poder
cultivarlos en condiciones de laboratorio y, por tanto inicialmente deben ser aislados.
Para ello, se dispone de muestras, que muchas veces suelen presentar los siguientes
problemas:
- Que no existe la cantidad suficiente de microorganismos que se busca.
- Que las muestras contengan varios tipos de microorganismos, pacte de los cuales son
contaminantes, haciéndose necesario su aislamiento inicial para obtener cultivos
puros.
2.1. SIEMBRA
Procedimiento que consiste en inocular a los microorganismos en medios de
cultivo adecuados para que se desarrollen y multipliquen, de acuerdo a sus
exigencias vitales, para que en condiciones óptimas de temperatura y tiempo de
inoculación, puedan desarrollarse y multiplicarse IN VITRO. Se siembra con dos
finalidades:
a. Para hacer un aislamiento.
b. Para hacer un trasplante.
AISLAMIENTO
Permite la separación de los microorganismos al estado de pureza a partir de una
muestra problema. Se requiere un medio sólido con gran superficie para que los
microorganismos al ser diseminados sobre el medio, generen su progenie (cepa)
por formación de colonias separadas. Si se aíslan especies distintas, cada colonia
tendrá características especiales, la morfología bacteriana será también distintiva.
TRANSPLANTE
Significa la separación previa de la cepa a un medio de cultivo apropiado en
tubo, que puede ser líquido o sólido.
ASAS DE SIEMBRA
El asa de siembra consiste de un alambre de Nichrome o platino, con una punta
en asa o recta y en el otro extremo insertado con un mango cilíndrico para un uso
sencillo.
ASAS DE DIGRASKY
Son asas de vidrio en forma de triángulo más o menos abierto. Se utiliza para
extender el inóculo líquido previamente adicionado en la placa, a través de una
pipeta pasteur. Se esteriliza en autoclave, aunque generalmente se puede hacer
empapando en alcohol y prendiendo la llama hasta agotar el alcohol del asa.
HISOPOS
Se utiliza para la toma de muestras, para transportar muestras sin que esta sufra
desecación, deterioro o contaminación. Sirve para extender la muestra a través
del hisopo en el medio de cultivo. Se suele comercializar ya estéril listo para
utilizar y desechables.
PIPETAS
Se pueden disponer de forma individual o en paquetes. Pueden ser de vidrio,
reutilizables por esterilización o de plástico, generalmente desechables. Pueden
ser graduadas (contienen volúmenes específicos), en cuyo caso su aspiración se
realizará con aspiradores para pipeta tipo pera o pipeta. La pipeta pasteur no
contiene volúmenes graduados son muy utilizados en bacteriología y cuya
aspiración se realiza con chupetes de goma. También nos encontramos con
micropipetas utilizadas para la siembra de microlitros y mililitros en un
determinado medio de cultivo.
Los medios líquidos pueden ser agua destilada estéril, solución salina estéril o
caldo de cultivo base.
- ESTRIA MÚLTIPLE
Se tomará la muestra problema con el asa de siembra previamente estéril y dicho
inóculo se depositará en el extremo superior de la placa, extendiéndose de un
extremo a otro de ésta solo en la parte superior. Flameado el esa de platino y
girando ligeramente dicha placa repetiremos el proceso anterior que nos
permitirá arrastrar la muestra desde uno de los bordes donde quedó la muestra
hasta el otro extremo superior de la placa. Se vuelve de nuevo a flamear el asas
de platino sin coger muestra como en el caso anterior y siguiendo la misma
dirección se repite la operación hasta un total de cuatro o cinco veces, que son
los que tienen cabida aproximadamente en una placa, teniendo en cuenta que el
último tramo se efectuará hacia el interior de la misma.
El resultado son colonias cada vez más separadas como consecuencia de que
cada vez que se va arrastrando y separando más la muestra. Es importante que
para separar estas colonias se realice en cada estría un flameado previo del asa de
siembra.
Una vez, constituida la muestra, se vierte ésta en la placa Petri estéril y se dejará
solidificar, la mezcla también se podría realizar en la misma placa Petri, aunque
la homogenización en este caso es más difícil. Esta técnica es utilizada, por
ejemplo, para la determinación de CMI (concentración mínima inhibitoria) de un
antibiótico frente a determinados microorganismos.
Es necesario emplear una técnica aséptica para transferir los cultivos puros y
para mantener la esterilidad a los medios y soluciones. Trabajando
asépticamente, el biotecnólogo tome prudentemente las precauciones necesarias
para prevenir la contaminación o de las soluciones con microorganismos no
deseados.
Equipos
- Estufa 37ºC
- Autoclave
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V. CUESTIONARIO
VI. OBSERVACIONES
VII. CONCLUSIONES