UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA DE HIGIENE Y SEGURIDAD
INDUSTRIAL

“SIEMBRA, AISLAMIENTO, TRASPLANTE Y OBTENCIÓN DE

CULTIVOS MIXTOS Y PUROS DE BACTERIAS.”

QUINTO LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGIA AMBIENTAL BO-122

MALPARTIDA SOTO JUAN CARLOS 20215015G

SAL Y ROSAS SANTOS BRYAN DAVID 20192705B

DOCENTE: Msc. Blgo. ALVARO MARTÍN MARTÍNEZ VILA

Lima, Perú
17 de octubre de 2021
 INDICE
I. RESUMEN.................................................................................................3

II. INTRODUCCIÓN.......................................................................................4

III. OBJETIVOS...............................................................................................6

3.1 OBEJTIVO GENERAL................................................................................6

3.2 OBJESTIVOS ESPECIFICOS.....................................................................6

IV. MARCO TEÓRICO....................................................................................7

4.1 SIEMBRA:...................................................................................................8

4.2 AISLAMIENTO............................................................................................8

4.2.1 TÉCNICA DE AISLAMIENTO POR AGOTAMIENTO POR ESTRÍA.....9

4.2.2 DIVERSAS TÉCNICAS PARA EL AISLAMIENTO POR ESTRÍAS:......9

4.3 TRASPLANTE...........................................................................................11

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL......................................................17

VI. RESULTADOS.........................................................................................21

VII. DISCUSION DE RESULTADOS..............................................................23

VIII. CONCLUSIONES....................................................................................24

IX. RECOMENDACIONES............................................................................24

X. CUESTIONARIO......................................................................................25

XI. FUENTES DE INFORMACIÓN................................................................26

XII. APENDICE...............................................................................................27

12.1 DIAGRAMA DE FLUJOS.........................................................................27

XIII. ANEXOS..................................................................................................29

13.1 TECNICA DE ESTRIAS EN NPLACA.....................................................29

2
I. RESUMEN

Después de haber hecho la práctica de recuento, reconocimiento de los

microorganismos y la caracterización de las colonias pasamos a sembrarlas
usando el método del estriado en placa a las colonias que hemos cultivado en
caldos BHI y Agar TSA, así como también los cultivos mixtos de boca y mano. La
escuela de Robert Koch introdujo los medios sólidos, complementados con agar,
y las placas de Petri en Bacteriología, permitiendo así la separación física de las
colonias sobre la superficie del medio de cultivo o en el interior del mismo.
El aspecto de las colonias sirve para diferenciar distintas especies microbianas.
Daremos uso de técnicas especiales que son las técnicas de aislamiento y de
cultivo para poder reconocer a los microorganismos, siempre trabajando en
condiciones de esterilidad. trabajaremos en base a un inóculo (conjunto o la
población de microorganismos que es transferida un medio nutritivo adecuado)
en la siembra, dependiendo de las características nutricionales que tenga ese
microorganismo para que pueda desarrollarse y crecer siempre a una
temperatura adecuada ya un tiempo de incubación. De esa manera nosotros
podremos aislarlo en forma pura o mixta, porque ellos se encuentran formando
una flora mixta de diferentes especies de microorganismos, pero al aislarlo
obtendremos un cultivo puro o misma especie.

Se aprenderá a usar los diferentes medios de cultivo como lo es el Agar

Nutritivo,

Agar ENDO, Agar EMB y Agar Manitol Salado su uso y el tipo de bacteria que
crecerá en estos tipos de medio de cultivo selectivo, determinando el tipo de
bacterias que crecieron después de la incubación, ya que el número de placas
Petri es limitado se tendrá que dividir a estas en 2 o 3 sectores para poder así
realizar la siembra de las 8 colonias de las diluciones, la muestra de la cavidad
bucal y el de las manos. Finalmente obtendremos los resultados los cuales serán
añadidos al informe.

3
II. INTRODUCCIÓN
En los ambientes naturales los microorganismos se encuentran usualmente
como poblaciones mixtas, pero si queremos estudiarlos, caracterizarlos e
identificarlos, necesitamos tenerlos como cultivos puros.

Los cultivos puros son aquellos que contienen un solo tipo de microorganismo. El
modo de obtener estos cultivos consiste en obtener colonias aisladas, que
provienen de una sola célula.

Características de los cultivos puros:

• Las colonias deben ser iguales en forma, tamaño y color.

• Que no existan formas inhibidas.

• Al microscopio deben tener un aspecto común.

• Deben tener iguales propiedades tintoriales.

• Deben ser bioquímica y fisiológicamente iguales.

• Una regla importante es no tomar nunca de la 1era colonia.

La obtención de un cultivo puro, a partir de una población mixta, se lleva a cabo

en dos etapas:

1. Aislamiento

La muestra debe diseminarse de manera tal que los diferentes

microorganismos queden lo suficientemente separados sobre la superficie
de un medio de cultivo sólido, de manera que luego de la incubación ellos
formen colonias visibles aisladas.

2. Trasplante

En esta placa tendremos diferentes tipos de colonias correspondientes a

los diferentes microorganismos presentes en la población original. Luego
de tener las colonias aisladas, éstas deben transferirse con el filamento a
un tubo que contenga agar nutritivo estéril para cultivar esa colonia aislada.

Para garantizar la pureza del cultivo obtenido, es conveniente, a partir de

cada tipo de colonia aislada, repetir el proceso de aislamiento antes
descrito. Se considerará que se ha obtenido un cultivo puro, cuando al
realizar este proceso, todas las colonias obtenidas presenten las mismas

4
 características. El medio de cultivo utilizado en el proceso de aislamiento
dependerá, entre otros factores, de los requerimientos nutricionales de los
microorganismos que se espera aislar y de la presencia de
microorganismos que, por sus características y/o por la cantidad en que se
encuentren en la muestra, dificulten la obtención del microorganismo
objeto del aislamiento. En este último caso, se deben utilizar medios de
enriquecimiento y medios selectivos que inhiban el desarrollo de gérmenes
contaminantes.

La temperatura y otras condiciones de incubación variarán según los

microorganismos, usualmente la temperatura óptima de los microorganismos
patógenos para el hombre oscila entre 30 y 40° C. Cuando el microorganismo
que se intenta aislar es anaeróbico, deben tomarse las precauciones necesarias
a fin de eliminar la presencia de oxígeno en el ambiente donde se desarrollará el
mismo. Basándose en el origen y naturaleza de la muestra se pueden inferir los
posibles microorganismos que se encuentran presentes en la misma, y ese
conocimiento ayudará en la selección del medio y las condiciones de cultivo
adecuadas.

3. Técnica de la siembra

• Para inoculación

Consiste en tomar una pequeña porción de la muestra y diluirla para

dispensarla y que crezca con mayor facilidad en el medio de cultivo. Se puede
inocular en medio sólido o líquido.

• Para aislamiento

Tiene como finalidad la obtención de cultivos puros. Se siembra en caja Petri

que contiene medios de cultivos sólidos. Existen varios tipos de siembras
para aislamiento: estría o en zig-zag, estría múltiple, cuatro cuadrantes.

4. Métodos para obtener los cultivos puros

• Siembra por aislamiento o en estría

Con el asa estéril tomamos la muestra y hacemos extensiones en la placa.

Volvemos a esterilizar el asa de siembra y extendemos parte de la extensión
anterior en otra dirección. Se repite la operación otras dos veces. Incubamos
a 37ºC por 24 horas.

5
 En la 1era zona habrá un amasijo de células, en la 2da una parte de la 1era
zona estará mejor extendida y en la 3era y 4ta aún mejor. Si se toma una
colonia y la colocamos sobre una caja Petri se tendrá un cultivo puro.

• Para aislamiento por diluciones sucesivas

Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas células que tras
inocularse en un medio de cultivo generen colonias aisladas. Se toma 0.1 ml
de la muestra y se deposita en una caja Petri como medio de cultivo, con un
asa de vidrio se extiende esa cantidad sobre la caja, se incuba a 37ºC por 24
horas.
En la 1era dilución había un amasijo de colonias, en la siguiente 10 veces
menos, y así sucesivamente hasta conseguir colonias aisladas.

• Medios de enriquecimiento

Consiste en ajustar las condiciones de cultivo para seleccionar el

microorganismo que nos interesa aislar. Ejemplo: nos interesa aislar bacterias
fotoautótrofas. Se toma un matraz con agua y sales y lo incubamos a la luz,
de manera que crezcan las bacterias fotoautótrofas. Ejemplo: queremos aislar
bacterias quimiolitótrofas del azufre; ponemos azufre, CO2 como fuente de
carbono (disuelto en agua) e incubamos en la oscuridad para eliminar
fotoautótrofos.

III. OBJETIVOS

3.1 OBEJTIVO GENERAL

Obtener e identificar de 1 o más grupos de microorganismos (cultivos mixtos
y puros) a partir de las siembras realizada en el laboratorio anterior.

3.2 OBJESTIVOS ESPECIFICOS

 Tener la capacidad de seleccionar una metodología específica, de
acuerdo con los criterios proporcionados.
 Comprender y estudiar la técnica de aislamiento en medios de cultivo
como el método del estriado, para la obtención de cultivos mixtos y puros
de bacterias.
 Realizar una siembra bacteriológica usando la técnica de siembra por
cuadrantes a cada una de las placas con agares selectivos.

6
  Cultivar microorganismos en agar manitol salado (AMS), agar Eosina azul
de metileno (EMB), agar Endo, agar Nutritivo.
 Reconocer la morfología celular bacteriana de cultivos mixtos aislados en
agares selectivos.
 Realización del trasplante para conocer la morfología, coloración, análisis
genéticos, identificación taxonómica, etc. de las bacterias.
 Realizar la técnica del estriado de microorganismos en cultivo puro y
obtener colonias de bacterias, separadas, a partir de cultivos
concentrados de células.
 Enseñar al alumno al reconocimiento de los materiales empleados en la
siembra de microorganismos.
 Realizar siembra por agotamiento en medios selectivos y diferenciales.
 Practicar la siembra en medios de cultivo, previamente esterilizados y
adecuados para el microorganismo que se deseamos aislar.
 Depositar microorganismos asépticamente los medios de cultivos que
usaremos.
 Obtener de colonias aisladas de bacterias.

IV. MARCO TEÓRICO

La manipulación de los microorganismos requiere de técnicas especiales, no

sólo por su tamaño microscópico, sino porque es necesario evitar la
contaminación de los cultivos por gérmenes indeseables e impedir el traslado de
gérmenes patógenos desde los cultivos al medio ambiente. Nuestro objetivo es
conocer cómo se aíslan las diferentes especies en cultivo puro partiendo de una
mezcla de varias especies. Para una correcta manipulación de los
microorganismos, en las técnicas de siembra, es necesario trabajar con
instrumentos estériles sobre medios de cultivo estériles y deben efectuarse
siguiendo las reglas de asepsia, para impedir que desarrollen al mismo tiempo
las bacterias en estudio y microorganismos del medio ambiente. Dichas prácticas
deben realizarse al abrigo de las corrientes de aire (las puertas y ventanas
cerradas) con movimientos pausados, sin brusquedad y a una distancia no
mayor de 15 cm de la llama del mechero de Bunsen.

7
CULTIVOS PUROS:

Se denomina así a una población formada por una única especie de bacterias.
Para obtener cultivos puros a partir de una población microbiana mixta, se
utilizan las denominadas técnicas de aislamiento, que fueron desarrolladas
durante el siglo XIX. El cultivo puro es en la mayoría de los casos un estado
artificial impuesto en el laboratorio.

CULTIVOS MIXTOS:

Es aquel que contiene más de un tipo de organismo que crece en un medio

estéril, como el agar. El cultivo mixto puede incluir múltiples especies de
microorganismos, que pueden o no vivir en armonía entre sí, compartiendo los
recursos disponibles. A menudo, no se conocen las identidades reales de los
organismos presentes en un cultivo mixto y es posible que las especies
individuales no se hayan caracterizado microbiológica o bioquímicamente.
Además, la proporción de diferentes organismos en un cultivo mixto puede no
ser constante. Las diferentes especies en un cultivo mixto pueden clasificarse
por tamaño, peso y otros factores o dividirse por especies y eliminarse en un
medio separado para crear cultivos puros de una sola especie.

4.1 SIEMBRA:
En términos microbiológicos es el proceso en el que se introduce
artificialmente la muestra de la población de microorganismos (inóculo) en
un medio nutritivo adecuado, elegido de acuerdo con las exigencias vitales
del microorganismo, a fin de iniciar un cultivo microbiano. Luego del
sembrado se incuba a una temperatura adecuada, y durante un tiempo
conveniente de tal manera que nos permita su desarrollo y manipulación. La
finalidad de la siembra es el aislamiento y el Trasplante.

4.2 AISLAMIENTO
Aislar es separar un tipo de microorganismo para su identificación a partir de
una población heterogénea de microorganismos, el objetivo de este
procedimiento es obtener colonias bien separadas, de las que se conseguirá
un cultivo puro. Una vez obtenidos los cultivos puros se podrán estudiar las
características macroscópicas, microscópicas, fisiológicas, entre otras
características. de un microorganismo en particular. Hay que tener en

8
cuenta que siempre el aislamiento se da en un medio sólido. El medio
líquido sirve para enriquecer, pero no para aislar.

4.2.1 TÉCNICA DE AISLAMIENTO POR AGOTAMIENTO POR

ESTRÍA
Es una de las técnicas de aislamiento más utilizadas, consiste en un
rápido agotamiento progresivo y continuo sobre la superficie de un
medio sólido, generalmente contenido en una placa Petri, en este
proceso se deposita con un asa bacteriológica una pequeña cantidad
de muestra bacteriana (inóculo) y se distribuye rayando, formando
estrías en la superficie, se van "extendiendo las bacterias" o
"diluyendo su concentración" sobre la superficie del agar. El objetivo
es obtener a partir de un elevado número de bacterias, un número
reducido de ellas distribuidas individualmente a lo largo de la superficie
de la placa. Al incubar esta, se obtienen colonias aisladas y se supone
que cada colonia está formada por la descendencia de una sola célula
y es por consiguiente un cultivo puro.

4.2.2 DIVERSAS TÉCNICAS PARA EL AISLAMIENTO POR ESTRÍAS:

Existen diversas formas para sembrar una población de

microorganismos por estría, entre la más utilizada se encuentra la
técnica por cuadrantes

9
 Estriado por cuadrantes:
Se divide la parte inferior de la caja Petri en cuatro partes
iguales con un marcador. Se esteriliza el asa y se estría el 1er
cuadrante con el procedimiento básico de S. Se trabaja en el
sentido de las agujas del reloj, estriando cuadrante por
cuadrante, esterilizando el asa antes de seguir a otro.

 Siembra por estrías en superficie (tubo de agar inclinado):

Se siembra el material en la superficie del agar inclinado en un
tubo de ensayo, allí se extiende por toda la superficie con el
asa bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el
material a sembrar, haciendo estrías no muy amplias, pero
tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte más profunda de
la superficie inclinada y se termina la estría en la parte más
cerca de la boca del tubo.

10
 4.3 TRASPLANTE

Luego del procedimiento de la técnica del aislamiento, ya teniendo las

colonias aisladas aislado (en cultivo puro), estas deben de transferirse en un
nuevo medio de cultivo estéril a fin de conservarlo a través del tiempo, lo que
permitirá realizar diferentes estudios, tales como pruebas bioquímicas,
morfología, coloración, análisis genéticos, identificación taxonómica, etc.

MEDIOS SELECTIVOS Y DIFERENCIALES:

 Selectivos:
Presentan algún componente que impide el desarrollo de microorganismos no
deseados. Esto hace que el microorganismo que se desea cultivar lo haga con
mayor facilidad. Por ejemplo, el agar MacConkey contiene cristal violeta, que
inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas y hongos, facilitando el
desarrollo de bacterias gramnegativas.
 Diferenciales:
Contienen sustancias que ponen de manifiesto alguna característica de la
especie o grupo de microorganismos. Por ejemplo, el agar MacConkey
contiene lactosa y rojo neutro (como indicador); las bacterias fermentadoras de
lactosa (lactosas positivas) aparecen de color rosa intenso, mientras que las no
fermentadoras de lactosa son incoloras.

Los medios de cultivo selectivos y diferenciales presentarán esas utilidades.

Entre ellos tenemos:

 AGAR ENDO:
Es un medio de cultivo diferencial y ligeramente selectivo utilizado para la
detección de coliformes y otros microorganismos entéricos. La selectividad del

11
agar Endo se debe a la combinación de sulfito de sodio y fucsina básica que
inhibe ligeramente el crecimiento de los microorganismos Gram positivos

Composición:

Preparación:
Suspender 41,5 g del polvo deshidratado en un litro de agua destilada. Mezclar
vigorosamente. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1
minuto para disolver completamente los ingredientes. Esterilizar a 121°C
durante 15 minutos. Dejar enfriar a 45-50°C y resuspender el precipitado por
agitación antes de su uso. Se recomienda preparar exactamente la cantidad de
Agar Endo que se va a utiliza

Colonias típicas:

Los coliformes fermentadores de lactosa producen colonias rosadas a rojas,

mientras que las colonias de los microorganismos que no pueden fermentar
este carbohidrato son incoloras o rosado pálido. Las colonias típicas de E. coli
en el Agar Endo son rosadas con un brillo verde metálico característico, debido
a la elevada producción de ácidos y aldehídos como producto de la
fermentación de la lactosa.

12
 AGAR MANITOL SALADO:
Se utiliza como medio selectivo y diferencial para el aislamiento e identificación
de Staphylococcus aureus a partir de muestras clínicas y no clínicas. Se
recomienda para la detección y el recuento de estafilococos coagulasa
positivos en leche, alimentos y otras muestras y estimula el crecimiento de un
grupo de ciertas bacterias mientras inhibe el crecimiento de otras.

Composición:
Contiene peptonas y extracto de carne de res, que suministran nitrógeno,
vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. La
concentración de cloruro de sodio al 7.5% da como resultado la inhibición
parcial o completa de organismos bacterianos distintos de los estafilococos. El
cloruro de sodio también proporción electrolitos esenciales para el transporte y
el equilibrio osmótico. El manitol es el carbohidrato fermentable, cuya
fermentación conduce a la producción de ácido, detectado por el indicador rojo
de fenol , ayuda en la diferenciación de especies estafilocócicas.

Preparación:
Suspender 111.025 g de medio MRS en 1000 ml de agua destilada. Hervir para
disolver el medio por completo, esterilizar en autoclave a 121 ° C durante 15-20
minutos. Enfriar a 45-50 ° C y verter en placas de Petri.

13
 Colonias:

 AGAR EMB:
El Agar con Eosina y Azul de Metileno es un medio ligeramente selectivo y de
diferenciación para el aislamiento y la diferenciación de bacilos negativos
entéricos (Enterobacteriaceae y diversos otros bacilos Gram negativos). Es una
combinación del medio de Levine y el de Holt-Harris y Teague, contiene una
mezcla de peptonas según Levine y presenta dos carbohidratos lactosa y
sacarosa.

Composición:
Contiene colorantes de azul de metileno y eosina , que inhiben las bacterias
gram-positivas en cierto grado. Los colorantes también actúan como
indicadores diferenciales en respuesta a la fermentación de la lactosa o la
sacarosa por parte de los microorganismos

14
 Colonias:
Los coliformes producen colonias de color negro azulado, mientras que las
colonias de Salmonella y Shigella son incoloras o de color ámbar transparente.
Las colonias de Escherichia coli pueden exhibir un brillo verde metálico
característico debido a la rápida fermentación de la lactosa. El conjunto de
medios de aislamiento de baja selectividad para Salmonella en muestras
fecales y de otros tipos incluye el EMB Agar (con y sin sacarosa) 4. Este medio
puede inhibir el crecimiento de las bacterias gram-positivas como los
estreptococos fecales, estafilococos y levaduras, o bien favorecer su
crecimiento con formación de colonias puntiformes.

 AGAR NUTRITIVO:
El agar nutritivo es un medio nutritivo de uso general que se utiliza para el
cultivo
de microbios que favorecen el crecimiento de una amplia gama de organismos
no fastidiosos. El agar nutritivo es popular porque puede cultivar una variedad
de
tipos de bacterias y hongos, y contiene muchos nutrientes necesarios para el
crecimiento bacteriano.

Composición:
Es una digestión enzimática de proteína animal. La peptona es la principal
fuente de nitrógeno orgánico para las bacterias en crecimiento.
Son las sustancias solubles en agua las que ayudan en el crecimiento
bacteriano, como vitaminas, carbohidratos, compuestos orgánicos nitrogenados
y sales. La presencia de cloruro de sodio en el agar nutritivo mantiene una
concentración de sal en el medio similar al citoplasma de los microorganismos.
El agua es esencial para el crecimiento y la reproducción de microorganismos y
también proporciona el medio a través del cual se pueden transportar diversos
nutrientes.

15
Preparación:
Suspender 28 g de agar nutritivo en polvo en 1 litro de agua destilada, calentar
esta mezcla mientras se revuelve para disolver completamente todos los
componentes. Colocar en la autoclave la mezcla disuelta a 121ºC durante 15
minutos. Una vez que el agar nutritivo se haya esterilizado en autoclave, déjelo
enfriar, pero no solidifique. Verter agar nutriente en cada placa y déjelas en la
superficie estéril hasta que el agar se haya solidificado. Volver a colocar la tapa
de cada placa de Petri y guarde las placas en un refrigerado

Usos del agar nutritivo:

Se utiliza con frecuencia para el aislamiento y purificación de cultivos.También
se puede utilizar como medio para producir el césped bacteriano necesario
para las pruebas de sensibilidad a los antibióticos. En realidad, las pruebas de
sensibilidad a los antibióticos se suelen realizar en medios especialmente
formulados para ese propósito.

16
V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Materiales
Tubo de ensayo: Estos utensilios sirven para hacer experimentos o ensayos lo
hay en varias medidas y pueden ser de vidrio o plástico.

Placas Petri: Se usan para contener los medios de cultivo donde posteriormente
se realiza la siembra.

Gradillas: Utensilio que sirve para colocar tubos de ensayo. Este utensilio facilita
el manejo de los tubos de ensayo.

Asa bacteriológica: Se emplea para transportar, arrastrar, trasvasar inóculos

(pequeño volumen que contiene microorganismos en suspensión) desde la
solución de trabajo también llamada “solución madre” al medio de cultivo (sólido
o líquido) o de un medio a otro (resiembra).

17
Mechero Bunsen: El mechero bunsen es un instrumento utilizado en laboratorios
para calentar muestras y sustancias químicas

El mechero bunsen está constituido por un tubo vertical que va enroscado a un

pie metálico con ingreso para el flujo de gas, el cual se regula a través de una
llave sobre la mesa de trabajo.

Incubadora: En biología, una incubadora es un dispositivo que sirve para

mantener y hacer crecer cultivos microbiológicos o cultivos celulares. La
incubadora mantiene la temperatura, la humedad y otras condiciones en grado
óptimo, tales como el contenido de dióxido de carbono (CO2) y de oxígeno en su
atmósfera interior.

Caldo infusión cerebro corazón (BHI): Es un medio líquido rico en nutrientes,

adecuado para el cultivo de una amplia variedad de bacterias exigentes, como
estreptococos, meningococos y neumococos, hongos y levaduras. El caldo BHI

18
se recomienda para métodos estándar para tests de agua y de susceptibilidad
antimicrobiana

Agar Sal y Manitol (MSA): Es un medio selectivo preparado según las

recomendaciones de Chapman para el aislamiento de presuntos estafilococos
patógenos. La mayoría de las otras bacterias están inhibidas por la alta
concentración de cloruro sódico.

Agar Eosina y Azul de Metileno (EMB): Es un medio diferencial similar al Agar

Levine EMB (Cat. 1050), utilizado para el aislamiento de Enterobacterias. El uso
de eosina Y y azul de metileno permite la diferenciación entre organismos
fermentadores de lactosa y no fermentadores.

Siembra por agotamiento en medios selectivos y diferenciales. A partir de los

aislamientos obtenidos de cultivo puro, realizados en la práctica anterior.
Realizar una siembra bacteriológica usando la técnica de siembra por

19
 cuadrantes a cada una de las placas con agares selectivos proporcionados por
el profesor.

1. Preparáramos el sitio de siembra en condiciones asépticas.

2. Prendemos el mechero.

3. Tomamos con una mano el tubo de ensayo conteniendo el cultivo puro y en la

otra mano el asa de siembra.

4. Esterilizamos (rojo incandescente) y enfría el asa de siembra.

5. Abrimos el tubo de ensayo y con un movimiento suave se toma un inóculo.

Debe quedar una película liquida en el extremo del aro (alambre de nicrom).

6. Cerramos el tubo de ensayo y se abre la placa con medio selectivo estéril

pasando el asa sobre el medio de cultivo, realizando un estriado sobre la primera
zona de siembra en un extremo de la placa.

7. Cerramos la placa, se esteriliza y enfría el asa nuevamente.

8. Esta vez sin tomar más muestra del tubo de ensayo se pasa el asa estéril
tocando una sola vez la zona demarcada anteriormente y se realiza un estriado
simple.

9. Repetimos el procedimiento hasta marcar cuatro zonas.

10. Finalmente se incuba a la temperatura de 35-37°C por 24 horas.

VI. RESULTADOS1

TABLA DE DATOS Y RESULTADOS:

# de Agar Agar Manitol

Agar nutritivo Agar EMB
colonia ENDO Salado

Crecimiento
Moderado
Crecimiento Destrucción del muy
1 No hubo
bueno, colonias medio, no se expandido,
crecimien
Boca muy pequeñas y observa colonias
to.
juntas. crecimiento. grandes y
muy juntas de
color rojo.
2 Crecimiento No hubo Agar muy Crecimiento
bueno, colonias crecimien destruido. moderado,

20
 colonias
pequeñas y
muy medianas y un poco
Boca to.
separadas. separadas,
con centro
circular, rojo.
Crecimiento
Crecimiento abundante,
Crecimiento
mediano, colonias colonias
bueno, colonias
No hubo pequeñas y pequeñas y
pequeñas y
3 Boca crecimien medianas, algunas
alejadas, se ve
to. consistencia puntiformes,
invadido por la
mucosa, superficie muy cercanas
colonia 1.
umbilicada. y de color
rojo.
Poco crecimiento, Buen
por un lado, crecimiento,
colonias circula y No hay colonias
No hubo
puntiformes, crecimiento, grandes y
4 Boca crecimien
superficie plana presencia de circulares,
to
con bordes hongo blanco. pupiladas,
redondeados y planas, olor
color opaco. terroso.
Crecimiento
No hubo regular,
Poco crecimiento No hubo
5 Boca crecimien colonias
en toda la placa crecimiento.
to circulares
planas.
Poco crecimiento,
No hubo colonias
No hubo No hubo
6 Boca crecimien puntiformes de
crecimiento crecimiento.
to consistencia seca y
color púrpura.
Crecimiento
Buen crecimiento,
abundante,
colonias grandes y No hubo
No hubo por un lado,
7 Boca pequeñas, de crecimien
crecimiento. convexa
forma especulada, to.
plana, olor
textura mucosa.
terroso.
8 Boca Crecimiento No hubo No hubo Excelente
abundante y muy crecimien crecimiento crecimiento,
juntas to muy juntos,
bordes
redondeados,

21
 plano
convexo,
circulares, olor
terroso.
Poco
crecimiento
pupiladas y
Crecimiento convexas,
No hubo
regular, colonias No hubo opacas, de
9 Boca crecimien
grandes y muy crecimiento. borde
to.
juntas. redondeado.
Presencia de
contaminación
(levadura).
Excelent
e
crecimien
Excelente
to, Buen
crecimiento,
colonias crecimiento,
colonias pequeñas
pequeña colonias del
10 No hubo y muy juntas,
s y muy tipo rizoide y
Boca crecimiento. redondeadas, de
juntas cerebroide
consistencia
redondea con superficie
mucosa y color
das y de pupilada.
fucsia.
consisten
cia
mucosa.
Buen
Excelente
crecimiento,
crecimiento,
Poco Buen crecimiento, colonias
colonias pequeñas
crecimien colonias amarillas y circulares de
11 y muy juntas,
to y de consistencia superficie
Mano redondeadas de
colonias mucosa, algunas convexa,
consistencia
regulares filamentosas. mucosa,
mucosa y color
algunas son
opaco
puntiformes.

1* Los siguientes resultados obtenidos de la práctica de laboratorio realizado el

26 de abril de 2019 por los estudiantes del curso Microbiología Ambiental de la
FIA, llevado a cabo en el ciclo presencial 19-1 con el docente a cargo Ms. Blgo.
Álvaro Martín Martínez Vila.

22
VII. DISCUSION DE RESULTADOS

•Para el agar Nutritivo se observó un buen crecimiento casi en todas las placas
en las cuales se pudo hacer la caracterización de las colonias con facilidad. En la
muestra 2 las colonias están separadas gracias a ello se pudo realizar una
caracterización en cada colonia donde sus tamaños de las colonias eran
mediana con igual forma, consistencia y aspecto. Se puede asumir que en la
muestra 1 se obtuvo un cultivo puro.

• En el caso del agar EMB se destruyó el medio en la muestra 2 lo cual

imposibilito las lecturas, mientras que en las muestras 4, 5, 7, 8, 9 donde no se
observó crecimiento alguno. En la muestra 4 a pesar de no haber crecimiento se
observó presencia de hongo blanco.

• En el agar Endo no se encontró crecimiento para la mayoría de las muestras,

excepto en la muestra 10 donde se vio un excelente crecimiento donde las
colonias en la placa son del mismo tamaño (pequeñas), forma (redondeadas) y
con la misma consistencia mucosa. Se puede asumir que en la muestra 10 se
obtuvo un cultivo puro.

• Para el agar Manitol Salado se realizó una buena caracterización ya que se

observó un buen crecimiento en la mayoría de las muestras. Pero en la muestra
6 no hubo crecimiento alguno, por otro lado, la muestra 9 tuvo poco crecimiento
y en las muestras 1, 2, 5 se observó un crecimiento moderado.

VIII. CONCLUSIONES

• En esta práctica de laboratorio obtuvimos conocimientos básicos importantes

acerca de la obtención de cultivos puros de microorganismos. Estos
conocimientos son muy empleados con propósitos cuantitativos y cualitativos. Ya
que a partir de estos obtienen cultivos puros de microorganismos para así luego
poder estudiarlos.

Se concluye que la siembra por estría permite aislar bacterias que dan lugar a
colonias separadas y posteriormente, transfiriendo una solo colonia a un medio
nuevo, esto permite el desarrollo de un cultivo puro bacteriano.

• Se concluye que ciertos microorganismos están dispuestos a crecer en ciertos

medios de cultivo y que degradan ciertas sustancias y esta es la manera de la
que se es capaz de identificar qué tipo de bacteria se este cultivo.

23
 • A pesar de la gran cantidad del estriado, este método debe ser elaborado con
precaución, ya que un mal estriado puede variar el crecimiento de colonias en el
agar.

• Se concluye que ciertas placas Petri fueron contaminadas.

• El desarrollo de colonias formadas presenta características que difieren en

forma, borde, elevación, superficie y estructura interna, esto es notablemente
influenciado por el medio.

IX. RECOMENDACIONES

• Esterilizar el área antes de iniciar el trabajo.

• No colocar materiales sobre el mesón de trabajo.

• No ingerir alimentos dentro del laboratorio.

• Debe asumirse que todas las superficies expuestas tales como las manos, las
mesas instrumentos y los exteriores de los utensilios están contaminados.

• Siempre se debe mantener cerca de la llama del mechero para evitar la

contaminación.

• En el momento de realizar la siembra la aguja y asa deben esterilizarse por

calentamiento hasta el rojo vivo.

• Se debe tener mucho cuidado al sembrar las muestras, ya que está expuesto a
contaminación.

• Al hacer la siembra se debe usar la aza de siembra con mucho cuidado al

pasar en forma zigzagueante por el agar.

• Al salir del laboratorio lavarse las manos con una solución de jabón carbólico.

• Verter los desechos en los contenedores dispuestos en el laboratorio.

X. CUESTIONARIO

1 ¿Por qué deben realizarse varios pases de una colonia antes de

su identificación?

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 Este proceso se realiza para que las colonias queden yuxtapuestas unas con
otras; luego esto se logra por la continua disminución de tamaño de la población
sobre el asa colocado.

2. ¿Por qué los microorganismos presentan diferencias morfológicas

al ser sembrados en diferentes medios, teniendo en cuenta los

medios que sembró cada grupo?

Presentan estas diferencias por los distintos bioquímicos que algunos poseen
mientras que otros no, un claro ejemplo sería el agar con eosina azul de metileno
que se usa para diferenciar dos tipos de bacterias como la enterobacter
aerogenes de Escherichia coli.

XI. FUENTES DE INFORMACIÓN

1. M.C. Fanny Peralta González (2015). MANUAL DE PRÁCTICAS DE LOS
LABORATORIOS DE ALIMENTOS.
2. Ingraham, John; Ingraham, Catherine (1997). INTRODUCCIÓNA LA
MICROBIOLOGÍA.
3. López Pérez, José Pedro (2009). Microbiología básica en la educación
secundaria obligatoria: el lavado de las manos.
4. Agar Sal y Manitol (MSA) (Medio Chapman) EP/USP/ISO
https://www.condalab.com/int/es/medios-de-cultivo
deshidratados/8111022-agar-sal-y-manitol-msa-medio-chapman-ep-usp-
iso.html
5. Caldo Infusión Cerebro Corazón (BHI)
https://www.condalab.com/int/es/medios-de-cultivo
deshidratados/113911037-caldo-infusion-cerebro-corazon-bhi.html
6. Agar Eosina y Azul de Metileno (EMB)
https://www.condalab.com/int/es/medios-de-cultivo-deshidratados/35-
10009-agar-eosina-y-azul-de-metileno-emb.html
7. Técnicas Básicas de Microbiología. Siembra y Aislamiento de Bacterias.
https://www.youtube.com/watch?v=-TnHCd4sY24&feature=emb_logo

8. Métodos de siembra
https://www.youtube.com/watch?v=lDVOlCiJtMI&feature=emb_logo

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 9. SIEMBRA POR ESTRIA EN PLACA
https://www.youtube.com/watch?v=W6xpPJZIb1E&feature=emb_logo

10. Siembra por agotamiento a partir de una muestra líquida

https://www.youtube.com/watch?v=7YZfuafATv0&ab_channel=Udearroba

XII. APENDICE

12.1 DIAGRAMA DE FLUJOS

Estriado por cuadrantes:

Se prepara el sitio de siembra

en condiciones asépticas, para
evitar contaminaciones.

Se toma el tubo de ensayo con

el cultivo puro y el asa de
siembra. Se lleva al mechero

Se esteriliza el asa de siembra,

abrimos el tubo de ensayo y
suavemente se toma un inóculo.

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 Se pasa el asa sobre el medio de
cultivo, realizando un estriado en
la primera zona de siembra.

Sin tomar más muestra del tubo de ensayo se pasa el asa

estéril tocando una sola vez la zona demarcada
anteriormente y se realiza un estriado en cuadrante o
cruzada. Se repite el procedimiento hasta marcar cuatro
zonas.

Una vez hechas las 4 estrías simples se incuba a la

temperatura de 35-37°C y se deja reposar durante 24 hrs.

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XIII. ANEXOS

13.1 TECNICA DE ESTRIAS EN NPLACA

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