UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA DE HIGIENE Y SEGURIDAD
INDUSTRIAL

“Recuento total de bacterias en placas de Petri. Expresión de

resultados. Caracterización de las colonias. Siembra de
microorganismos de medio solido a líquido. Comportamiento de
bacterias en caldo nutritivo y caldo BHI”

CUARTO LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGIA AMBIENTAL BO-122

MALPARTIDA SOTO JUAN CARLOS 20215015G

SAL Y ROSAS SANTOS BRYAN DAVID 20192705B

DOCENTE: Msc. Blgo. ALVARO MARTÍN MARTÍNEZ VILA

Lima, Perú
09 de octubre de 2021
Tabla de contenido
I. RESUMEN............................................................................................................. 3
II. INTRODUCCIÓN.................................................................................................... 4
III. OBJETIVOS........................................................................................................... 7
IV. MARCO TEÓRICO.................................................................................................8
1. Caracterización del crecimiento en placas de agar sólido..........................8

2. Recuento total de bacteria en placa Petri...................................................9

3. Técnica de siembre en medios contenidos en tubos................................10

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL...................................................................12
5.1 MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS................................................12

5.2 METODOLOGIA:..................................................................................16

5.2.1 Caracterización del crecimiento en placas de Agar sólido..................16

5.2.2 Caracterización del crecimiento en Caldo Líquido..............................16

5.2.3. Recuento total de bacterias en placa Petri.........................................17

VI. RESULTADOS..................................................................................................... 19
6.1 Caracterización de crecimiento en placas de agar sólido.....................19

6.2 Caracterización de crecimiento de caldo liquido...................................20

6.3 Recuento total de bacterias en placas Petri..........................................21

6.4 Siembra y caracterización en caldo BHI (muestras de sarro dental y

manos)............................................................................................................ 22

VII. DISCUSION DE RESULTADOS..........................................................................22

VIII. CONCLUSIONES................................................................................................. 22
IX. RECOMENDACIONES........................................................................................ 23
X. CUESTIONARIO.................................................................................................. 23
XI. FUENTES DE INFORMACIÓN............................................................................25
XII. APENDICE........................................................................................................... 26
4. Diagrama de flujo.....................................................................................26

2
I. RESUMEN

Los resultados del informe se realizó en el laboratorio de la facultad de

Ingeniería Ambiental (FIA ), revisamos la guía ,y luego teniendo todos los
materiales listos para proceder con la parte práctica , comenzamos a realizar la
técnica de siembra de microorganismos , por inmersión y en superficie
respectivamente. Se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el
mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza
para microorganismos aerobios.

Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión. Una
vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para
cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza para
microorganismos anaerobios facultativos y microaerofílicos. Se vierte sobre una
placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la
superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende el
inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se
recomienda para microorganismos aerobios estrictos. Siembra en estría: se
vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se deja solidificar.

Existen distintas técnicas para la siembra en estrías, el objeto es obtener

colonias aisladas. Después de realizar las diluciones y luego obtener un
crecimiento microbiano en las placas, pasamos a realizar el conteo de colonias
visibles. Luego escogemos 7 colonias y pasamos sembrarlos en el caldo nutritivo
ya preparado y esterilizado. A esto llamaremos cultivo puro. Para realizar el
cultivo mixto tomamos muestras del sarro dental o saliva de la lengua y de las
manos de un compañero de laboratorio con un hisopo estéril. Este debe estar
embebido con agua peptonada, luego de pasarlo por el sarro dental colocarlo en
el caldo BHI. De igual forma con otro algodón estéril y embebido con agua
peptonada pasarlo por los pliegues, uñas y palma de la mano; luego colocar este
en el caldo BHI. Rotular. Incubar a 35 -37 °C por 48 horas.

3
II. INTRODUCCIÓN

Las bacterias en condiciones normales se desarrollan con formas definidas, las

cuales son proporcionadas por la rigidez de la pared celular; estas formas son
esféricas, ovaladas, en forma de bastón o como espirales. De acuerdo a lo
anterior, es importante realizar una correcta observación de estas
características, dado que, dicha forma se convierte en uno de los principales
marcadores para la identificación inicial de géneros bacterianos, encontrándose
registrado en el Manual de Bacteriología Sistemática de Bergey; adicionalmente,
es importante subrayar que, cada género posee unas características particulares
que permiten diferenciarlo de otros, esto teniendo en cuenta que, la
caracterización de un aislamiento debe incluir otro tipo de marcadores, como los
bioquímicos, serológicos y moleculares, para poder concluir al respecto de un
género y una especie.

Del mismo modo, los rasgos de las colonias y la disposición o agrupación

bacteriana son criterios taxonómicos que deben ser descritos correctamente
para aislamientos no identificados, como parte de la identificación primaria.

Caracterización del crecimiento en placas de Agar sólido

Cuando una célula bacteriana es inoculada sobre la superficie de un medio

nutritivo sólido, ésta comienza a reproducirse exponencialmente; después de
formarse algunos miles o millones de células, se hace visible esa masa celular, a
la cual llamamos colonia. Una vez que se obtienen colonias de microorganismos,
se analiza la morfología colonial bajo los siguientes criterios generales, Forma,
tamaño, color, bordes, superficie, elevación, opacidad, consistencia y aspecto,
destacando cualquier otra característica que ayude a la identificación del
microorganismo

• Forma: puntiforme, circular, irregular, alargada, fusiforme, filamentosa, rizoide,

etc.

• Tamaño: estimar el diámetro en mm.

• Superficie: lisa, rugosa, cerebriforme, en anillos concéntricos, etc.

• Elevación: aplanada, elevada, pulvinada, convexa, umbonada, umbilicada

• Borde: liso, ondulado, lobulado, rizado , festoneado, filamentoso

• Color: blanco, amarillo, rojo ladrillo, anaranjado, etc.

4
• Opacidad: transparente, opaca, translúcida

• Consistencia: dura, viscosa, membranosa, gelatinosa, mucosa

• Aspecto: húmedo, seco

• Luz reflejada: mate o brillante

• Luz transmitida: transparente, translúcida, opaca

Caracterización del crecimiento en Caldo Liquido.

Son evaluados según la distribución y apariencia del crecimiento como sigue

• Turbidez fina uniforme: Crecimiento fino y totalmente disperso.

• Floculante: Crecimiento en agregados escamosos totalmente dispersos.

• Película: Crecimiento en la superficie como plataforma, grueso.

• Sedimento: Concentración del crecimiento en el fondo del caldo; puede ser

granular, escamoso o floculante.

Recuento total de bacterias en placa Petri

Con este método se puede distinguir entre células viables y no viables; esto se
logra sembrando diluciones de las muestras que contienen los microorganismos
en medios de cultivos sólidos dispensados en cajas Petri, incubando y
posteriormente realizando el conteo de las colonias visibles (la metodología
puede ser aplicada en la superficie del agar o dentro del agar). Estas colonias a
su vez, son multiplicadas por el factor inverso de la dilución (o diluciones),
utilizado. Con esta metodología y con el objetivo de reducir el error estadístico,
se recomienda realizar suficientes réplicas de las mismas diluciones, así como,
de las diferentes diluciones a utilizar. Adicionalmente, el conteo y cálculo de la
población de viables, se debe realizar en cajas que contengan entre 30 y 300
colonias.

En este tipo de conteo de viables, las colonias no siempre han de proceder de

una sola célula, dado que algunas bacterias pueden formar agrupaciones y estas
serán las que darán origen a la colonia; por lo anterior, los reportes de esta
metodología se refieren a “unidades formadoras de colonia” o UFC; unidad que,
corresponde como mínimo a una bacteria formando una colonia, así como,
también a un grupo de estas que han sido las formadoras de esta.

5
Siembra en medios contenidos en tubos

La siembra de medios contenidos en tubos requiere mayor cuidado, puesto que

un solo organismo contaminante del aire puede superar en crecimiento al
microorganismo de interés, por lo tanto se deben tener las siguientes
precauciones:

Mantener inclinado el tubo que contiene el cultivo que se va a transferir, de modo

que los microorganismos del aire caigan en las paredes externas del tubo y no
en la boca de este.

• Los tapones se deben mantener en la mano contraría a aquella que contiene el

tubo, sosteniéndolos entre el dedo meñique, el anular y el dedo del corazón.

• Nunca deben colocarse sobre la mesa de trabajo o algún otro lugar.

• Flamear la boca del tubo antes de cerrarlo después de la siembra o

inoculación.

• Esterilizar el asa adecuadamente (toda la porción que entra en contacto con el

medio de cultivo).

• Sumergir el asa en el medio de cultivo, sin tocar las paredes del tubo.

• Enfriar el asa en una parte del medio, sin deteriorar el mismo.

• Después de realizar la siembra, esterilizar el asa y flamear nuevamente la boca

del tubo.

• Siembre trabaje con material abierto, en cámara de flujo laminar o en su

defecto con mecheros Bunsen.

• En las siembras por picadura y mixtas, evite romper el medio de cultivo, así
como, utilice asas totalmente rectas.

Siembra en tubos por estría simple.

Se realiza en un tubo con medio sólido inclinado (en bisel o pico de flauta), y
deslizando el asa sobre la superficie expuesta del agar de manera que se
marquen surcos o estrías

Siembra mixta en tubos.

Se realiza sobre medios inclinados o en bisel, haciendo una picadura hasta el

fondo del tubo con asa recta y luego haciendo una siembra en estría sobre la
superficie expuesta del agar, deslizando el asa por la superficie en bisel

6
 marcando las estrías; de tal manera que, con el asa cargada se realizan los dos
tipos de siembra y sin retirarla del tubo.

Siembra en tubos por picadura.

Se designa con este nombre a la siembra que se realiza con asa recta en tubos
con medios sólidos y semisólidos generalmente sin inclinar. Se realiza
introduciendo el asa cargada con el microorganismo al medio de cultivo por el
centro de la superficie y llegando con el extremo del asa al fondo del tubo

Siembra en tubo en medio líquido.

Para transferir material a partir de un medio líquido o sólido a otro líquido, puede
usarse el asa bacteriológica (de argolla), o en algunos casos, pipetas estériles o
hisopos. Si Usted utiliza asas bacteriológicas, inocule el microorganismo en el
medio líquido haciéndola rotar del mango

III. OBJETIVOS

Objetivo general

El objetivo es conocer las técnicas variadas de recuento de células de

microorganismos, al igual que medir la efectividad de estos métodos de conteo
de microorganismos.

Objetivos específicos

 Reconocer la morfología celular bacteriana, así como las diferentes

agrupaciones y otros aspectos morfológicos de la bacteria.
 El resultado que se obtiene se comparará con la norma, el límite máximo
permisible.
 Siembre de microorganismos de medio sólido a líquido
 Destacaremos la importancia de las técnicas de aislamiento y del cultivo
puro y cuál es el procedimiento para identificar bacterias.

7
IV. MARCO TEÓRICO

Las bacterias en condiciones normales se desarrollan con formas definidas, las

cuales son proporcionadas por la rigidez de la pared celular, estas pueden tener
muchas formas como por ejemplo esféricas, ovaladas, en forma de bastón o
espirales. De acuerdo a lo anterior, es importante realizar una correcta
observación de estas características, dado que, dicha forma se convierte en uno
de los principales marcadores para la identificación inicial de géneros
bacterianos, encontrándose en el Manual de Bacteriología Sistemática de
Bergey, adicionalmente, es importante subrayar que, cada género posee unas
características particulares que permiten diferenciarlo de otros, esto teniendo en
cuenta que, la caracterización de un aislamiento debe incluir otro tipo de
marcadores, como los bioquímicos, serológicos y moleculares, para poder
concluir al respecto de un género y una especie.

1. Caracterización del crecimiento en placas de agar sólido

Cuando una célula bacteriana es inoculada sobre la superficie de un medio
nutritivo sólido, esta comienza a reproducirse exponencialmente; después de
formarse algunos miles o millones de células, se hace visible esa masa celular, a
la cual llamamos colonias. Una vez que se obtienen colonias de
microorganismos, se analiza la morfología colonial bajo los siguientes criterios
generales. Forma, tamaño, color, bordes, superficie, elevación, opacidad,
consistencia y aspecto.

8
 2. Recuento total de bacteria en placa Petri
Con este método se puede distinguir entre células viables y no viables; esto se
logra sembrando diluciones de las muestras que contienen los microorganismos
en medios de cultivos sólidos dispensados en cajas Petri, incubando y
posteriormente realizando el conteo de las colonias visibles. Estas colonias a su
vez son multiplicadas por el factor inverso de la dilución.

9
Con esta metodología y con el objetivo de reducir el error estadístico, se
recomienda realizar suficientes réplicas de las mismas diluciones, así como, de
las diferentes diluciones al utilizar. Adicionalmente, el conteo y cálculo de la
población de viables, se debe realizar en cajas que contengan entre 30 y 300
colonias.

En este tipo de conteo de viables, las colonias no siempre han de proceder de

una sola célula, dado que algunas bacterias pueden formar agrupaciones y estas
serán las que darán origen a la colonia, los reportes de esta metodología se
refieren a “unidades formadoras de colonias” o UFC; unidad que corresponde
como mínimo a una bacteria formando una colonia, así como, también un grupo
de estas que han sido las formadoras de las mismas.

3. Técnica de siembre en medios contenidos en tubos

Se tiene siembra en medios de cultivo contenidos en tubos, ya sea caldo, caldo
nutritivo, agar inclinado, otros. Así se observará en las colonias su intensidad de
enturbiamiento, aparición de película o sedimento en el tubo, también poder
determinar un crecimiento móvil o no. En esta siembra se debe tener mayor
cuidado, puesto que un contaminante del aire puede superar en crecimiento al
microorganismo de estudio, por lo tanto, se debe tomar las siguientes
precauciones:

• Mantener inclinado el tubo que contiene el cultivo que se va a

transferir, de modo que los microorganismos del aire caigan en las paredes
externas del tubo y no en la bica de este.

• Los tapones se deben mantener en la mano contraria a aquella que

contiene el tubo, sosteniéndolos entre el dedo meñique, el anular y el dedo
del corazón. Nunca deben colocarse sobre la mesa de trabajo o algún otro
lugar.

• Flamear la boca de tubo antes de cerrarlo después de la siembra o

inoculación.

• Esterilizar el aza en el medio, sin tocar las paredes del tubo.

• Sumergir el asa en el medio de cultivo, sin tocar las paredes del tubo.

• Enfriar el asa en una parte del medio, sin deteriorar el mismo.

10
 • Después de realizar la siembra, esterilizar el asa y flamear
nuevamente la boca del tubo.

• Al sembrar trabajar en cámara de flujo laminar o en su defecto con

mechero Bunsen.

• En las siembras por picadura y mixtas, evite romper el medio de

cultivo, así como, utilice asas totalmente rectas.

A. Siembra en tubos por estrías simples

Se realiza en un tubo con medio solido inclinado (en bisel o pico de flauta), y
deslizando el asa sobre la superficie expuesta del agar de manera que se
marque con movimiento en zigzag o surcos en la superficie. El proceso se inicia
en el fondo y se va avanzando hacia arriba por el área inclinada. Luego
incubar en estufa durante 28-48 horas a temperatura más adecuada a 37 °C.

B. Siembra mixta en tubos

Se realiza sobre medios declinados o en bisel, haciendo una picadura hasta el

fondo del tubo con asa recta y luego haciendo una siembra por estría sobre la
superficie expuesta del agar, deslizando el asa por la superficie en bisel
marcando las estrías; de tal manera que, con el asa cargada se realizan los dos
tipos de siembra y sin retirarla del tubo.

C. Siembra en tubos por picadura

Se realiza con asa recta en punta en tubos de medios sólidos y semisólidos

generalmente sin inclinar. Se realiza introduciendo el asa cargada con el
microorganismo al medio de cultivo por el centro de superficie, llegando con el
extremo del asa al fondo del tubo y retirándolo posteriormente por la misma
trayectoria utilizada al realizar la picadura.

Una siembra con asa o con cierto movimiento de vaivén podría originar un patrón
de crecimiento que se interpretaría erróneamente como movilidad bacteriana.
Por último, incubar durante 24-48 horas a temperatura optima de crecimiento.

D. Siembra en tubo en medio liquido

Transferir asépticamente con el asa bacteriológica, o en algunos casos, pipetas

estériles o hisopos. Si se usa asas bacteriológicas, de una pequeña muestra de
microorganismos, se transfiere desde el tubo que contiene el material problema
al tubo con medio de cultivo estéril, se inocula el microorganismo en el medio

11
 líquido, sumergiendo el asa en el líquido y rotar el mango para desprender la
muestra.

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

5.1 MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

MATERIALES
1 Asa de siembra:
Se emplea para transportar, arrastrar, trasvasar
inóculos (pequeño volumen que contiene
microorganismos en suspensión) desde la
solución de trabajo también llamada “solución
madre” al medio de cultivo (sólido o líquido) o de
un medio a otro (resiembra).
2 Mechero Bunsen:
El mechero bunsen es usado para la
esterilización del ambiente en la siembra de los
microorganismos. El mechero bunsen está
constituido por un tubo vertical que va
enroscado a un pie metálico con ingreso para el
flujo de gas, el cual se regula a través de una
llave sobre la mesa de trabajo.
3 Encendedor:
Se usa para iniciar la llama en el mechero
Bunsen.

12
4 Alcohol 70º:
Se utiliza como desinfectante, de esa manera se
tiene los materiales y equipos de manera
aséptica.

5 Algodón:
Medio en el cual se usa el alcohol 70º para
desinfectar los quipos y materiales.

6 Plumón marcador:
Se usa para el recuento de las colinas de
microorganismos que se van a trabajar

7 Tubos de ensayo:
Son ideales para su uso en aplicaciones de
cultivo microbiológico.
8 Gradillas:
Utensilio que sirve para colocar tubos de
ensayo. Este utensilio facilita el manejo de los
tubos de ensayo.

9 Hisopos estériles:
Sirve para tomar muestras de nuestras manos y
boca para realizar las experiencias
correspondientes.

1 Papel Kraft:
0
Se usa para cubrir los tubos que contiene el
agar TSA con los cultivos para guardarlos en la
refrigeradora.

EQUIPOS

13
1 Contador de colonias:
Un contador de colonias es un instrumento
utilizado para contar colonias de bacterias o de
otros microorganismos que crecen en una placa
de agar.

2 Incubadora:
Es un dispositivo que sirve para mantener y
hacer crecer cultivos microbiológicos o cultivos
celulares. La incubadora mantiene la
temperatura, la humedad y otras condiciones en
grado óptimo, tales como el contenido de dióxido
de carbono (CO2) y de oxígeno en su atmósfera
interior.

REACTIVOS
1 AGAR TSA:
Se emplea como medio de uso
general para el cultivo de todo tipo
de microorganismo. Por el
contenido de peptona de soja y
peptona de caseína resulta una
aportación nutritiva que permite el
desarrollo óptimo de un gran
número de microorganismos, tanto
exigentes como no exigente
2 CALDO NUTRITIVO
Medio de cultivo no selectivo para el
desarrollo de microorganismos con
escasos requerimientos
nutricionales. Contiene pluripeptona
(una mezcla de partes iguales de
peptona de carne y caseína) y
extracto de carne que constituyen la
fuente de carbono y nitrógeno
necesarias para el adecuado
desarrollo bacteriano
3 CALDO BHI:
Medio líquido altamente nutritivo Polvo fino
que permite el desarrollo de
Aspecto:
Polvo finoSolubilidad: total.
Color: beige claro.
pH: 7,3±0,2
Fórmula (en gramos por litro)
Digerido Papaínico de Soja: 5,0 g
Digerido Pancreático de Caseína:
15 g Sodio Cloruro: 5,0 g
Agar: 15,0 g
Aspecto:
Medio de cultivo deshidratado: color
beige claro, homogéneo
M. cultivo preparado: color ámbar
Fórmula (en gramos por litro)
PLURIPETONA....................5.0
EXTRACTO DE CARNE.........3.0
pH FINAL 6.9±0,2
Aspecto:

14
microorganismos con escasos Color M. deshidratado: tostado claro
requerimientos nutricionales y
nutricionalmente exigentes, Color medio preparado: ámbar
aerobios y anaerobios. pH final: 7.4 ±0,2

5.2 METODOLOGIA:

5.2.1 Caracterización del crecimiento en placas de Agar sólido

Se procede a contar con el marcador indeleble a las colonias que
han crecido en las cajas Petri del laboratorio anterior, luego se
selecciona e identifica de acuerdo con sus características.
 Forma: puntiforme, circular, irregular, alargada, fusiforme,
filamentosa, rizoide, etc.
 Tamaño: estimar el diámetro en mm.
 Superficie: lisa, rugosa, cerebriforme, en anillos concéntricos, etc.
 Elevación: aplanada, elevada, pulvinada, convexa, umbonada,
umbilicada
 Borde: liso, ondulado, lobulado, rizado, festoneado, filamentoso
 Color: blanco, amarillo, rojo ladrillo, anaranjado, etc.
 Opacidad: transparente, opaca, translúcida
 Consistencia: dura, viscosa, membranosa, gelatinosa, mucosa
 Aspecto: húmedo, seco
 Luz reflejada: mate o brillante
 Luz transmitida: transparente, translúcida, opaca

5.2.2 Caracterización del crecimiento en Caldo Líquido.

Primero se enciende el mechero Bunsen, se esteriliza el asa
bacteriológica con la llama, ya esterilizada el asa bacteriológica se
toma el inóculo de la placa de Petri, antes de la siembra se
esteriliza el tubo que contiene el medio de cultivo líquido (caldo
nutritivo o caldo BHI), se coloca en las gradillas y finalmente se
rotula e incuba a 35ºC por 48 horas.

15
 Evaluación según la distribución y apariencia del crecimiento:

 Turbidez fina uniforme: Crecimiento fino y totalmente disperso.

 Floculante: Crecimiento en agregados escamosos totalmente
dispersos.
 Película: Crecimiento en la superficie como plataforma, grueso.
 Sedimento: Concentración del crecimiento en el fondo del caldo;
puede ser granular, escamoso o floculante.

5.2.3. Recuento total de bacterias en placa Petri.

5.2.3.1 Cálculo del Recuento Estándar en Placa:

1. Se elige dos placas correspondientes a diluciones
consecutivas (10-3 o 10-4) que presenten entre 30 y 300
colonias.
2. Se cuenta todas las colonias de cada placa utilizando el
contador de colonias.
3. A la placa de menor dilución se le denominara A, y la de
mayor dilución B.
4. Se procede a tomar el cociente de B/A < 2, se procederá a
tomar la media aritmética de ambas.
5. Si el cociente B/A ≥ 2, se considera para el recuentro el
numero de colonias a la disolución menor (10 -3), ya que es
una dilución más concentrada por lo tanto habrá menos error
en el conteo de colonias.
6. Se multiplica por el factor de dilución correspondiente, se da
el valor obtenido como el recuento estándar en placa, se
expresa como UFC/g.

5.2.3.2 Cálculo del Estimado del Recuento Estándar en Placa

1. Si las placas presentan más de 300 colonias, dividir la
correspondiente a la dilución más elevada, en secciones
radiales (2,4 u 8).

16
 2. Contar todas las colonias obtenidas en cada caso y
multiplicar por el factor adecuado, con el fin de conseguir
una estimación del número total de colonias presentes en la
placa.
3. Hallar la media del valor estimado por las dos placas y
multiplicar por el factor de dilución correspondiente, el valor
obtenido se da como el recuento estándar en placa
estimado, se expresa como UFC/g.
4. Si en las placas inoculadas con la dilución menos
concentrada se encuentran más de 200 colonias en una
sección correspondiente a la octava parte de la placa,
multiplicar 1.600 (procedente de 200 x 8) por el factor de
dilución y expresar el recuento estándar en placa estimado
como superior al valor obtenido. En estos casos resulta
aconsejable señalar entre paréntesis la dilución utilizada.
5. Cuando no se encuentran colonias en las placas
correspondientes a la dilución más concentrada (10 -1),
expresar el recuento estimado como inferior a 1 multiplicado
por el factor de la dilución más concentrada. Se reportaría
como <10 UFC/g.

5.2.3.3 Expresión de Resultados

Cuando se dan los valores del recuento estándar en placa,
deben utilizarse únicamente dos cifras significativas. Estas
dos cifras corresponden a los dígitos primero y segundo
(empezando por la izquierda) de la media de las colonias
halladas o estimadas. Los dígitos restantes tienen que ser
substituidos por ceros. Por ejemplo, si el valor calculado fue
523.000, éste ha de darse como 520.000 (52x10 4). Si el
tercer dígito que empieza por la izquierda es 5 o superior, se
le añade una unidad al segundo dígito (se redondea). Por
ejemplo, si el valor calculado es 83.600, este debe hacerse

17
 como 84.000 (84x103). Los resultados se expresan como
UFC/g.

5.2.3.4 Siembra y caracterización en caldo BHI (muestras de

sarro dental y manos)
1. Empapar un hisopo estéril con agua peptonada y luego
pasarlo por la cavidad bucal y ponerlo en el caldo BHI.
2. En el caso de la mano usar también un hisopo estéril
empapado con agua peptonada y pasar por palma, dorso y
pliegues de la mano y las uñas, posteriormente colocarlo en
el caldo BHI.
3. Se rotula ambos tubos y se incuba a 35ºC por 48 horas.

Finalmente se siembra los cultivos de los caldos BHI y nutritivo usado en

la practica al agar TSA en plano inclinado por estriado, también los
cultivos de sarro y manos se rotulan e incuban a 37ºC por 24 horas, se ve
las características del crecimiento, se cubren los tubos con el papel Kraft
y se guardan en la refrigeradora para seguir usándolos en las próximas
prácticas.

VI. RESULTADOS

Los siguientes resultados fueron obtenidos de la práctica de laboratorio

realizado el 23 de abril de 2019 por los estudiantes del curso de
Microbiología Ambiental, llevado a cabo en el ciclo presencial 19-1 a
cargo del docente Ms. Blgo. Alvaro Martín Martínez Vila.

6.1 Caracterización de crecimiento en placas de agar sólido.

Para estos resultados se tomaron 8 muestras de colonias y se realizó
un cuadro de las características presentadas por cada colonia.

MORFOLOGIA COLONIAL BACTERIANA

18
N°  SUPERFICIE  FORMA  BORDE  COLOR
1  Acuminada  Circular  Redondeado

Crema blanquiazul

2  Convexa   Fusiforme  Ondulado 

Crema 

3  Acuminada  Circular  Redondeado

Crema fresa

4  Plana  Circular  Filamentoso

Blanco

5  Plana   Fusiforme  Redondeado

convexa
Amarillo

6  Plana  Irregular  Ondulado 

Transparente 

7 Acuminada Irregular Ondulado

Amarillo  
transparente

8 Plana Circular Ondulado

Crema

6.2 Caracterización de crecimiento de caldo liquido

CALDO NUTRITIVO

19
 N° DE
TUBO CARACTERISTICA DE CRECIMIENTO MICROBIANO

1 Turbidez y poco sedimento

2 Crecimiento ligero
3 Turbidez y sedimento
4 Turbidez
5 Ligero crecimiento microbiano
6 Poco sedimento y turbidez
7 Turbidez
8 Turbidez y sedimento

6.3 Recuento total de bacterias en placas Petri

Dilucione N° de colonias UFC/ g

s
M. 1 M. 2 M. 1 M. 2

10-5 115 50 12 x 106 50x105

colonias colonias
10-4 78 44 78 x 104 44x104
colonias colonias
10-3 138 90 14 x 104 90x103
colonias colonias
10-2 153 126 15 x103 13x103
colonias colonias
10-1 296 17 30 x 102 17x101
colonias colonias

20
 6.4 Siembra y caracterización en caldo BHI (muestras de sarro dental
y manos)

CULTIVO MIXTO (CALDO BHI)

TIPO DE
MUESTR CARACERISTICA DE CRECIMIENTO MICROBIANO
A
BOCA Sedimento, ligero crecimiento, superficial con poca turbidez

MANO Crecimiento superficial, con poco sedimento y poca turbidez

VII. DISCUSION DE RESULTADOS

 Dado que la práctica de laboratorio se desarrolla de manera virtual se

presentan dificultades para conseguir resultados que reflejen el trabajo
hecho en el laboratorio, así como buen aprendizaje practico.
 Se puede observar en el recuento de colonias que a medida que la
dilución aumenta, la cantidad de colonias visibles decae.
 Para realizar el recuento se tuvo que entender los métodos y así poder
realizar o establecer las Unidades formadoras de colonia (UFC), en el
caso de la dilución 10-4 se contabilizo una menor cantidad de la
adecuada, esto es debido a que nos hacen mencionan que, al momento
de añadir el APC, este estaba aún caliente.
 Se hace mención que no se presentaron dificultades al momento de
realizar la siembra en tubos en caldo nutritivo y BHI. A partir de ello se
ve la caracterización adecuada para este tipo de siembra.

VIII. CONCLUSIONES

 La cantidad de colonias obtenidas no es proporcional a la concentración

de la muestra.
 Los microorganismos pueden ser anaeróbicos en algunos tubos debido
a la formación dentro del caldo

21
  Se hace presente que mediante el método de recuento total de bacterias
en placa Petri se pudo distinguir las células viables de las no viables.
 Las bacterias pueden variar en su caracterización en diferentes
diluciones.
 Para la correcta caracterización de las bacterias es necesario
encontrarse en un lugar con buena iluminación.
 Para la correcta siembra de medios contenidos en un tubo se debe evitar
la contaminación de la boca del tubo con el aire.

IX. RECOMENDACIONES

 Mantener la higiene durante todo el proceso de la experiencia.

 Lavarse las manos y hacer uso de desinfectante, hacer uso de guantes,
uso de gorros para el cabello, mascarillas, no usar pulseras o collares
dentro del laboratorio.
 Colocar con plumón indeleble el nombre a cada muestra para evitar
confusiones entre ellas.
 Tener cuidado al momento de retirar el inóculo de la placa Petri.
 Colocar los algodones a los tubos de ensayo para que la muestra no se
contamine.
 Prestar mucha atención a los cambios que suceden con el recuento de
placas.
 Estar seguros de que la autoclave se encuentre esterilizado.
 Hacer las siembras cerca de un mechero Bunsen para evita
contaminación externa.

X. CUESTIONARIO

¿Qué es un cultivo axénico o puro?

Es aquel cultivo conformado por una sola especie cepa de microorganismos, es

decir proveniente de una sola célula, el cual no está contaminado con otros
microorganismos, este tipo de cultivo también es conocido como “cultivo puro”.
Sin embargo, en la naturaleza es cotidiano encontrar cultivos mixtos, este

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contiene muchas especies de forma conjunta. Debido a esto último los cultivos
puros lo “obtenemos artificialmente”, aprendemos a obtenerlos en los
laboratorios de microbiología para que se nos sea más fácil el estudio de estos
microorganismos, aprendemos aislar las colonias para obtener una solo especie
con la misma característica genéticas.

¿Qué importancia tiene la obtención de un cultivo puro?

La importancia de su obtención radica en lo esencial que es para poder estudiar

características morfológicas y así poder identificarlos con mayor seguridad, es
decir nos permite que el estudio del macroorganismo sea mas viable. ¿Como lo
relacionamos a nuestra carrera de Higiene y seguridad Industrial? Los peligros
biológicos a lo que están expuestos los trabajadores pueden definirse como
polvos orgánicos de distintas fuentes de origen biológico, como “virus”,
“bacterias”, “hongos”, proteínas animales o sustancias vegetales, como
productos de la degradación de fibras naturales. Es ahí el dónde nuestra carrera
y el curso de microbiología, ya que nosotros como ingenieros buscamos la salud
del trabajador, y necesitamos identificar los microorganismos estudiarlos, por ello
necesitamos obtener los cultivos puros para su fácil identificación y establecer la
seguridad del trabajador contra el microorganismo.

Mencione brevemente el proceso de purificación de un aislamiento

bacteriano obtenido en agares.

Con la autoclave que es un recipiente de presión metálico de paredes gruesas

con un cierre hermético que permite trabajar esterilización con vapor de agua a
fin de desinfectar materiales e instrumentos quirúrgicos.
La presión elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los
121°, esta temperatura al mantenerla constante durante 20 minutos permite la
purificación.

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XI. FUENTES DE INFORMACIÓN
1. MELISSA SOLANO, LUZ CHACÓN, KENIA BARRANTES y ROSARIO
ACHI. Implementación de dos métodos de recuento en placa para la
detección de colifagos somáticos [en línea]. Revista Peruana de Biología
Online. [Lima, Perú], dic. 2012. [citado 6 de dic. de 20. 2020]. Disponible
en: [http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1727-
99332012000300016]
2. Material Didáctico, Manuel de prácticas de microbiología básica.
Universidad Autónoma metropolitana Unidad Cuajimalpa, 2016.
http://www.cua.uam.mx/pdfs/conoce/libroselec/23Manual%20de
%20microbiologia_09diciembre2016.pdf
3. Desconocido. (11 de marzo de 2014). Bioquimicamicro. Obtenido de
http://bioquimicamicro.blogspot.com/2014/03/cultivo-axenicopuro-
introduccion.html
4. Ramírez R, Luna B, Velásquez O, Vierna L, Mejía A, et al.Manual de
Prácticas de Microbiología General. 5ª edición. México: Universidad
Nacional Autónoma de México UNAM, Facultad de Química; 2006.
5. GUIA METODOLÓGICA https://drive.google.com/open?
id=15y39T_3_8Kygo2wvtvaqpb-UTQqb5Srf&authuser=1
6. LABORATORIO DE ANÁLISIS
http://www.anmat.gov.ar/renaloa/docs/analisis_microbiologico_de_los_ali
mentos_vol_iii.pdf
7. YOUTUBE https://www.youtube.com/watch?v=GXcXpp9k0Sw

24
XII. APENDICE

4. Diagrama de flujo
Siembra en medios contenidos en tubos con medio sólido

En condiciones de asepsia,
colocar el asa de siembra sobre
la llama seguido de la boca del
tubo

A partir de la placa sembrada,

seleccionar una colonia aislada.

Aplicar la colonia contenida en

la placa con agar y colocar
sobre el medio sólido

25
 Utilizar el método de estriado
simple

Flamear la boquilla del tubo,

colocar la tapa y cerrar. Incubar
a 37°C

26