Universidad Autónoma del Estado de México

Facultad de Odontología – Cirujano Dentista

Microbiología general

Practica No. 7: “Siembra y aislamiento de microorganismos”

Alumnos; Grupo 3, Equipo 3::

Cruz Bahena Lisset Perla
Flores Antonio Ximena
Olvera Flores Iván de Jesús

Profesores:

DR. EN C. ISAIAS DE LA ROSA GOMEZ

E. EN ES. LUIS MANUEL LAREDO MOYSEN
Título de la práctica: “Siembra y aislamiento de microorganismos”

Objetivos:

1) Conocer las ventajas que tiene obtener un microorganismo en cultivo puro.

2) Conocer las diferentes técnicas para llevar a cabo el aislamiento de una mezcla de
microorganismos para obtener un cultivo puro.
3) Determinar el número de bacterias por mililitro de una muestra a través del método de
las diluciones.

Antecedentes:

Obtener microorganismos en cultivo puro es un proceso fundamental y crucial en el campo de

la microbiología. Implica el aislamiento de un solo tipo de microorganismo, como bacterias,
hongos o virus, de una mezcla compleja de varios microorganismos presentes en una muestra.
El objetivo es tener un cultivo que contenga solo un tipo específico de microorganismo, lo que
permite a los investigadores estudiarlo de manera aislada y obtener una comprensión más
profunda de sus características, comportamiento y posibles aplicaciones.

Fig. 1: Apariencia de colonias aisladas

El proceso de obtener microorganismos en cultivo puro generalmente sigue estos pasos clave:

Recopilación de la muestra: El camino para obtener un cultivo puro comienza con la

recopilación de una muestra de una fuente de interés, que podría ser cualquier cosa,
desde suelo, agua, alimentos o un espécimen biológico. La muestra a menudo contiene
una variedad diversa de microorganismos.

Dilución en serie: Para reducir la diversidad microbiana y aumentar las posibilidades

de aislar un solo microorganismo, la muestra se somete a una dilución en serie. Esto
implica tomar pequeñas porciones de la muestra original y diluirlas en una serie de
 tubos que contienen un medio de cultivo estéril. Este proceso ayuda a diluir los
microorganismos y dispersarlos para su aislamiento.

Siembra: Después de la dilución, se coloca una porción de cada dilución en la

superficie de un medio de agar sólido en placas Petri. El agar proporciona un sustrato
sólido para que los microorganismos crezcan. Cada microorganismo presente formará
una colonia, que es un grupo visible y discreto de células genéticamente idénticas.

Incubación: Las placas Petri se colocan en una incubadora a una temperatura y

condiciones adecuadas para el crecimiento de los microorganismos. Esto permite que
las colonias se desarrollen con el tiempo.

Aislamiento de colonias: Una vez que aparecen las colonias, los microbiólogos
seleccionan cuidadosamente colonias individuales utilizando técnicas estériles.
Transfieren una pequeña porción de una sola colonia a un medio de cultivo fresco,
asegurando que solo un tipo de microorganismo esté presente en este nuevo cultivo.

Controles de pureza: Para confirmar la pureza del cultivo aislado, los microbiólogos
pueden realizar pruebas adicionales como la tinción de Gram, ensayos bioquímicos o
técnicas moleculares como la PCR. Estas pruebas ayudan a garantizar que no haya
otros contaminantes presentes.

Obtener microorganismos en cultivo puro es esencial para diversas aplicaciones, incluyendo

diagnósticos médicos, biotecnología, farmacéutica y estudios ambientales. Los cultivos puros
sirven como base para comprender la fisiología, genética y bioquímica microbiana. También
permiten a los investigadores investigar el potencial de los microorganismos para producir
antibióticos, enzimas, biocombustibles y otros productos valiosos.

En resumen, obtener microorganismos en cultivo puro es un proceso meticuloso y crítico en

microbiología. Permite a los científicos explorar el mundo de los microorganismos,
desbloqueando su potencial para descubrimientos científicos y aplicaciones prácticas, al tiempo
que asegura la pureza e integridad de los cultivos con los que trabajan.

Características de los cultivos bacterianos

Las características morfológicas de las colonias obtenidas en los cultivos bacterianos pueden
ser muy variadas.
Fig. 2: Diferentes formas de encontrar colonias bacterianas.

Las colonias pueden ser muy pequeñas, moderadas o grandes y su aspecto puede ser seco o
mucoide, brillante u opaca. Según la textura puede variar entre lisa y rugosa y, según la forma,
pueden ser circulares, planas, convexas.

Según el color pueden ser: incoloras, blancas, amarillas, rosadas, fucsias, rojas, naranja, beige,
grisáceas, verdosas, marrón, negra o con brillo metálico, dependiendo de la bacteria
involucrada y del medio de cultivo utilizado.

Los bordes de las colonias pueden ser regulares o irregulares. Otras, en cambio, pueden
presentar una película uniforme que se distribuye en casi la totalidad del medio denominada
“swarming”. Esto es característico de Proteus sp.

Algunos cultivos bacterianos emiten olores que son bastante característicos de la especie
involucrada. Por ejemplo, un cultivo de Pseudomonas aeruginosa tiene un característico olor a
frutas, mientras que el género Proteus presenta un olor característicamente putrefacto.

Fig. 3: Diferentes morfologías que poseen las colonias bacterianas.

Material:

Bata Pipetas de 1 mL x 6
Guantes Agua destilada
Cubre bocas Agar cerebro-corazón
Asa bacteriológica Agar Dextrosa-Sabouraud
Mechero Cultivo de Candida albicans
Cinta testigo Cultivo de Staphylococcus aureus
Tubos de ensaye x 6 Muestra salival

Tecnica o método:

Siembra por estria crusada y masiva

La siembra de microorganismos en cajas de Petri es una técnica comúnmente utilizada en

microbiología para cultivar y estudiar microorganismos, como bacterias, hongos y levaduras.
Esta técnica permite a los científicos aislar y estudiar colonias individuales de microorganismos,
lo que es esencial para investigar su morfología, crecimiento, metabolismo y otras
características.

Aquí hay algunos pasos básicos involucrados en la siembra de microorganismos en cajas de

Petri:

1. Preparación de medios de cultivo: Antes de comenzar, se prepara un medio de cultivo

adecuado para el tipo de microorganismo que se va a estudiar. El medio de cultivo
puede ser sólido (agar) o líquido y debe contener los nutrientes necesarios para el
crecimiento del microorganismo.
2. Esterilización: Tanto las cajas de Petri como el medio de cultivo se esterilizan mediante
autoclave u otros métodos de esterilización para eliminar cualquier microorganismo no
deseado que pueda contaminar el experimento.
3. Siembra: Se toma una muestra del microorganismo que se va a estudiar y se coloca en
la superficie del medio de cultivo sólido en la caja de Petri. Esto se puede hacer
mediante diferentes técnicas, como el método de la estría, en el que se utiliza una asa
de siembra para extender el microorganismo en una serie de líneas en la superficie del
agar.
4. Incubación: Después de sembrar los microorganismos en la caja de Petri, esta se
coloca en una incubadora a la temperatura y condiciones adecuadas para el crecimiento
del microorganismo. Durante la incubación, los microorganismos formarán colonias
visibles a simple vista.
5. Observación y estudio: Después de un período de incubación, se examinan las
colonias que han crecido en la caja de Petri. Los científicos pueden estudiar estas
colonias para determinar su morfología, color, tamaño, textura y otras características.
También pueden realizar pruebas adicionales, como tinciones o pruebas bioquímicas,
para identificar el tipo de microorganismo presente.
 6. Aislamiento: Si es necesario, se pueden aislar colonias individuales seleccionando una
sola colonia y transfiriendo a una caja de Petri separada para su estudio en detalle o
para su conservación a largo plazo.

La siembra en caja de Petri es una técnica esencial en microbiología y juega un papel

fundamental en la identificación y estudio de microorganismos, así como en la investigación y
desarrollo de nuevos medicamentos, alimentos y productos biotecnológicos. También es
importante llevar a cabo el trabajo en condiciones estériles para evitar la contaminación
cruzada entre las muestras y garantizar resultados confiables.

Un cultivo de bacterias es el resultado de la siembra de estos microorganismos sobre medios

nutritivos, con el fin de que estos se reproduzcan, dando lugar a la aparición de colonias
bacterianas en medios sólidos y de turbidez en medios líquidos. El método de sembrado es
muy importante para poder distribuir el inóculo de tal manera que las bacterias presentes
queden dispersas y puedan desarrollar colonias debidamente aisladas.

Fig. 4: Técnica de estrías cruzada y siembra masiva.

Las colonias obtenidas en el medio de cultivo sólido es la consecuencia de la proliferación del

microorganismo que fue sembrado. Cada colonia parte de una sola bacteria, que puede
multiplicarse de forma exponencial hasta formar una población macroscópicamente visible.
Igualmente sucede en los medios de cultivos líquidos pero en este caso el crecimiento
bacteriano se observa por turbidez. El crecimiento bacteriano es posible cuando el medio de
cultivo elegido reúne las condiciones nutricionales y de pH necesarias para el desarrollo de una
bacteria en particular. Además, es necesario controlar otras variables, tales como temperatura,
tiempo de incubación, concentración de oxígeno, CO2, entre otros.
Fig. 5: Técnica de siembra en medio sólido para aislamiento de colonias bacterianas.

Banco de diluciones

Esta técnica nos permite un doble objetivo, el aislamiento de colonias y además el recuento de
los microorganismos que tenemos en el cultivo inicial.

Se trabaja con cinco tubos con solución salina estéril con 9 ml. Mediante una pipeta con una
punta estéril tomar 1 ml del lenguaje bucal realizado y depositarlo en el primer tubo. Agitar
hasta conseguir una suspensión homogénea. Tomar otra pipeta estéril y de este primer tubo
transferir 1 ml al segundo tubo, agitar y repetir la operación transfiriendo 1 ml del segundo al
tercer tubo, del tercero al cuarto, del cuarto al quinto y del quinto al sexto.

Fig. 6: Técnica del banco de diluciones.

Una vez realizado el banco de diluciones procederemos a sembrar de los tubos 10-1, 10-3, 10-6,
1 ml en placas de agar nutritivo. Se depositan los 1 mL en la caja de Petri y se vierte agar
líquido, se homogeniza el contenido y se espera a que solidifique.

Fig. 7: Técnica del banco de diluciones.

Incubar a 37ºC durante 24 horas y realizar el recuento de las colonias calculando la

concentración de células en el tubo inicial mediante la fórmula:

UFC / ml = N x D / mL muestra

Donde:

UFC = unidades formadoras de colónias

D = dilución
N = nº de colonias

Resultados:

Siembra de C. albican, S. aureus, y muestra de enjuague bucal con agua.

Fig. 8: Resultados obtenidos. (Arriba izquierda: S. aureus, arriba derecha: C. albicans, Abajo de
izquierda a derecha dilución 10-1, 10-3, 10-6).
Tabla 1: Conteo en placa obtenido de las muestras de lenguaje bucal.
Dilución Conteo en placa

10-1 -

10-3 13

10-6 15

Calculos:

𝑈𝐹𝐶 𝑁𝑜. 𝑑𝑒 𝑚𝑖𝑐𝑟𝑜𝑜𝑟𝑔𝑎𝑛𝑖𝑠𝑚𝑜𝑠 𝑒𝑛 𝑝𝑙𝑎𝑐𝑎 × 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛

𝑚𝐿
= 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎

Se tomó en cuenta la dilución de la placa con la dilución 1:1,00,000

6
𝑈𝐹𝐶 15 × 10 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠
𝑚𝐿
= 1 𝑚𝐿

Siembra de muestra de tierra

Fig. 9: Resultados obtenidos. (cultivo de tierra, de izquierda a derecha dilución 10-1, 10-3, 10-6).

Tabla 1: Conteo en placa obtenido por la siembra de 1 gramos de tierra.

Dilución Conteo en placa

10-1 -

10-3 5

10-6 1
Calculos:

𝑈𝐹𝐶 𝑁𝑜. 𝑑𝑒 𝑚𝑖𝑐𝑟𝑜𝑜𝑟𝑔𝑎𝑛𝑖𝑠𝑚𝑜𝑠 𝑒𝑛 𝑝𝑙𝑎𝑐𝑎 × 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛

𝑚𝐿
= 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎

Se tomó en cuenta la dilución de la placa con la dilución 1:1,000

3
𝑈𝐹𝐶 5 × 10 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠
𝑔
= 1𝑔

Discusión y conclusión:

Identificación de Microorganismos: El proceso de aislamiento permitió identificar y estudiar

microorganismos específicos presentes en la muestra. Esto es esencial para comprender la
diversidad y la composición de la microbiota en un entorno dado.
Aislamiento de Colonias Puras: Se logró el aislamiento de colonias puras de
microorganismos individuales, lo que facilita el estudio detallado de sus características, como
morfología, color, tamaño y comportamiento en el medio de cultivo.
Contaminación Cruzada: La práctica enfatizó la importancia de trabajar en condiciones de
esterilidad para evitar la contaminación cruzada entre las muestras y garantizar la integridad de
los resultados.
Diversidad Microbiana: Dependiendo de la muestra y del método utilizado, es posible que se
haya observado una diversidad microbiana significativa. Esto puede ser indicativo de la
complejidad de los ecosistemas microbiológicos en la muestra.
Potencial Aplicativo: El aislamiento de microorganismos puede tener aplicaciones prácticas
en diversos campos, como la medicina, la biotecnología, la industria alimentaria y la agricultura.
Los microorganismos aislados pueden ser objeto de futuras investigaciones y desarrollo de
productos.
Limitaciones: Es fundamental mencionar cualquier limitación experimentada durante la
práctica, como la falta de acceso a técnicas avanzadas de identificación o la posible
contaminación durante el proceso.
Importancia de la Técnica: Las conclusiones también pueden destacar la importancia de la
técnica de aislamiento de microorganismos en la microbiología y su relevancia en la
comprensión de la vida microbiana.

Bibliografia:

● "Microbiología de los Alimentos" por Carlos Javier Álvarez González.

● "Microbiología Médica" por Patrick R. Murray, Ken S. Rosenthal y Michael A. Pfaller.
● "Microbiología" por Michael J. Pelczar Jr., E.C.S. Chan y Noel R. Krieg.
● "Microbiología y Parasitología Humana" por Raúl Romero Cabello, Dolores Gutiérrez
Félix y Eduardo Ullmann Montal.
● "Microbiología Ambiental: Un Enfoque Integral" por Juan Luis Ramos Gómez y Luisa
María Pérez Montaño.
● "Brock. Biología de los Microorganismos" por Michael T. Madigan, John M. Martinko,
David A. Stahl y David P. Clark.
● "Microbiología Industrial y Ambiental" por José Manuel Guisán y Arsenio Díaz.