IV INFORME DE LAB – BIOTECNOLOGIA

CARTAGENA DE INDIAS

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
Castro D1., Mieles M1., Rodelo R1., Yabrudy S1., Ramírez L..2
1
Estudiantes del Programa de Ingeniería Química de la Universidad de San
Buenaventura.
2
Docente de Biotecnología de la Universidad de San Buenaventura.

Resumen:
En el presente informe se mostrará el procedimiento, resultado y análisis obtenido del
conteo, aislamiento y la descripción morfológica colonial realizada en microorganismos
procariotes, los cuales fueron obtenidos en este caso del agua y lodo retenidos en una
columna de winogradsky anteriormente hecha. En el anterior laboratorio se elaboró el
cultivo de bacterias al cual, en el presente laboratorio, se le realizó el conteo y los procesos
anteriormente mencionados. Dichos procedimientos se dieron a cabo con la técnica del
aislamiento por estría cruzada y la obtención de colonias aisladas.
Palabras claves: Conteo, aislamiento, morfología, procariotes.
Introducción 2. Utilización de medios de cultivo
selectivos y diferenciales.
Es importante recalcar que en cada tipo
de ambiente natural existen múltiples 3. Aprovechamiento de características
microorganismos de diferentes tipos y particulares de los microorganismos, tales
actividad fisiológica. En base a esto, se como la formación de esporas, el
llevó a cabo el estudio a cultivos de metabolismo anaerobio y/ o facultativo,
bacterias previamente realizados. Para la la capacidad para utilizar sustratos poco
ejecución de dicho estudio, es necesaria comunes, etc.
la separación o aislamiento del medio en
En otras palabras, los procedimientos
que habitan ya sea el suelo, agua
para el aislamiento de los
contaminada, alimentos, aire entre otros.
microorganismos mas usados son: la
Esto con el fin de poder obtener un
estría cruzada, las diluciones decimales
cultivo puro. Las técnicas utilizadas en
(con sus variantes por vaciado en placa y
estos métodos son:
extensión con varilla de vidrio) y por la
1. Separación física de los técnica de Hungate.
microorganismos mediante:
Los cultivos puros son los mas
a. Diluciones seriadas y siembra por importantes ya que son los que contienen
vertido en placa. un solo tipo de microorganismo.
contienen un solo tipo de
b. Siembra por agotamiento.
microorganismo. El modo de obtener
estos cultivos consiste en obtener
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colonias aisladas, que provienen de
una sola célula.
Cultivos puros para:
Inoculación: Consiste en tomar una
pequeña porción de la muestra y diluirla
para dispensarla y que crezca con mayor
facilidad en el medio de cultivo. Se puede
inocular en medio sólido o líquido.
Aislamiento: Tiene como finalidad la
obtención de cultivos puros. Se siembra
en caja Petri que contiene medios de
cultivos sólidos. Existen varios tipos de
siembras para aislamiento: estría o en zig-
zag, estría múltiple, cuatro cuadrantes.
Definición de los métodos para la
obtención de los cultivos puros.
Siembra por aislamiento o en estría: Con
el asa estéril tomamos la muestra y
hacemos extensiones en la placa.
Volvemos a esterilizar el asa de siembra
y extendemos parte de la extensión
anterior en otra dirección. Se repite la
operación otras dos veces. Incubamos a
37ºC por 24 horas. En la 1era zona habrá
un amasijo de células, en la 2da una parte
de la 1era zona estará mejor extendida y
en la 3era y 4ta aún mejor. Si tomamos
una colonia y la colocamos sobre una
caja Petri se tendrá un cultivo puro.
Para aislamiento por diluciones
sucesivas: Consiste en diluir una muestra
hasta conseguir muy pocas células que
tras inocularse en un medio de cultivo
generen colonias aisladas. Se toma 0.1 ml
de la muestra y se deposita en una caja
Petri como medio de cultivo, con un asa
de vidrio se extiende esa cantidad sobre
la caja, se incuba a 37ºC por 24 horas.
En la 1era dilución había un amasijo de
colonias, en la siguiente 10 veces menos,
y así sucesivamente hasta conseguir
colonias aisladas.
Cultivo por enriquecimiento: Consiste en
ajustar las condiciones de cultivo para
seleccionar el microorganismo que nos
interesa aislar.
Morfología colonial: Cuando una célula
bacteriana es inoculada sobre la
superficie de un medio nutritivo sólido,
ésta comienza a reproducirse
exponencialmente; después de formarse
algunos miles o millones de células, se
hace visible esa masa celular, a la cual
llamamos colonia. Una vez que se
obtienen colonias de microorganismos, se
analiza la morfología colonial bajo los
siguientes criterios generales, Forma,
tamaño, color, bordes, superficie,
elevación, opacidad, consistencia y
aspecto, destacando cualquier otra
característica que ayude a la
identificación de:
o Forma: puntiforme, circular, irregular,
alargada, fusiforme, filamentosa,
rizoide, etc.
o Tamaño: estimar el diámetro en mm.
o Superficie: lisa, rugosa, cerebriforme,
en anillos concéntricos, etc.
o Elevación: aplanada, elevada,
pulvinada, convexa, umbonada,
umbilicada
o Borde: liso, ondulado, lobulado,
rizado, festoneado, filamentoso
o Color: blanco, amarillo, rojo ladrillo,
anaranjado, etc.
o Opacidad: transparente, opaca,
translúcida
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o Consistencia: dura, viscosa, Para esta técnica se incineró a rojo vivo el

membranosa, gelatinosa, mucosa
o Aspecto: húmedo, seco
o Luz reflejada: mate o brillante
o Luz transmitida: transparente,
translúcida, opaca.
Objetivos
Tener la capacidad entender y utilizar los
diferentes medios de cultivo y
condiciones de incubación para el
aislamiento de microorganismos
procariotes obtenidos de diferentes
hábitats. Además de poder contar y
describir su morfología colonial.
Metodología
Materiales y componentes
Los materiales utilizados fueron los
siguientes:
7 pipetas estériles de 2 mL, 3 placas Petri
con agar nutritivo estéril, 3 placas Petri
con agar EMB estéril, Asa bacteriológica.
Mechero, Cerillos ó encendedor,
Gradilla, Kit para tinción de Gram y
aceite de inmersión, Porta y cubre
objetos.
asa bacteriológica, se inició por el
filamento y se terminó por la
circunferencia del asa; se procedió a
destapar el tubo que contiene el cultivo
de E. coli y se tomó el inóculo con el asa
estéril, se depositó el inóculo sobre la
superficie de la placa de EMB (Agar
Eosina Azul de Metileno) posteriormente
se deslizó el asa con el inóculo sobre el
medio de cultivo y se hizo una serie de
estrías de acuerdo con la técnica
explicada en la introducción. Luego, se
incineró y se enfrió el asa en el agar antes
de realizar el otro estriado; al finalizar las
estrías, se cerró la caja, se etiquetó y se
puso en posición invertida sobre la mesa.
Por ultimo se realizaron las siembras por
duplicado, se etiquetaron las placas con
fecha, técnica y microorganismo y se
incubó las bacterias a 37°C durante 24 h.

Microorganismos:
Suspensión de: Escherichia coli, Bacillus
subtilis. Obtención de colonias aisladas

Reactivos utilizados Se seleccionó una colonia

Etanol al 70 % y Etanol al 100% morfológicamente distinguible y aislada
Procedimiento para su observación y descripción, se le
realizó la tinción de Gram y se observó al
Técnica de aislamiento por estría cruzada microscopio. Se sembró la colonia aislada
(Cultivo puro) por estría simple en una placa de agar
nutritivo e incubar en las mismas

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condiciones para crecimiento de
bacterias.
Resultados y análisis
Resultados
Se tomaron muestras de las bacterias E.
Coli y Pseudomona Aeruginosa.
Imagen 1-Preparación de la Coloración de Gram-
Imagen tomada desde un Samsung.
Imagen 2-Muestra 1 E. coli-Imagen tomada desde
un Samsung.
Imagen 3-Muestra 2 Pseudomona Aeruginosa-
Imagen tomada desde un Samsung.
Análisis
Al analizar ambas muestras de
microorganismos, siendo estas
Pseudomona Aeruginosa y Echerichia
Coli se pudieron apreciar diferentes
resultados al someterlas a la tinción de
Gram.
La Pseudomona Aeruginosa se tiñó de
color azul y se lograban ver claramente,
lo cual significa que la bacteria presenta
una capa de peptidoglucano entre su
citoplasma y su pared celular, lo que
significa que se trata de una bacteria
Gram positiva. Se usó un agar común
para aislar a esta.
La Echerichia Coli se tiñó de color
rosado y se requería de un mejor enfoque
para poder verlas con claridad, lo cual
significa que la bacteria presenta una
membrana lipídica exterior a la pared
celular y una fina pared de
peptidoglicano. Esto da a entender que se
trata de una bacteria Gram negativa.
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Teniendo en cuenta estos datos, se
utilizó un agar EMB para aislar la
Echerichia Coli para que no contaminara
con bacterias Gram positivas.
Cuando se observaron en el microscopio
se identificó que la Pseudomona
Aeruginosa presentaba una forma de
bacilos al igual que la Echerichia Coli.
Temas de consulta
A. ¿Qué es un cultivo axénico o puro?
Rpta/
Un cultivo puro, son aquellos contienen
un solo tipo de microorganismo. El modo
de obtener dichos cultivos se basa en
obtener colonias recluidas, que provienen
de una sola célula, siendo estas clones.
B. ¿Cómo funcionan los medios de
cultivos diferenciadores para
microorganismo? Ejemplo el EMB.
Rpta/
Los medios de cultivos diferenciadores
para microorganismo en este caso el
EMB, funciona para el aislamiento
selectivo de bacilos Gram negativos de
veloz desarrollo y pocas exigencias
nutricionales. Este posibilitando el
desarrollo de cada una de las especies del
núcleo familiar Enterobacteriácea.
C. ¿Qué importancia tiene la obtención
de un cultivo puro?
Rpta/
En el sector industrial los medios de
cultivo son utilizados para fomentar el
aumento de ciertos microorganismos
importantes en la producción y
conservación de alimentos, producción
vegetal y animal, insumos industriales,
minería y servicios, esto con el objetivo
de dar efectos definidos en el proceso de
construcción y venta de los mismos. Para
que los procesos anteriores se desarrollen
de manera correcta es fundamental
disponer de productos de calidad y que
cumplan con cada una de las regulaciones
requeridas por los mecanismos de
control. De igual manera, tener claro que
la manipulación de dichos debería estar
mediada por expertos preparados y con
elevados conocimientos en la zona.
D. ¿Cuál es el fundamento de la técnica
de aislamiento por estría cruzada?
Rpta/
El cimiento de esta técnica es permitir
analizar y aislar la morfología de la
colonia (se examina la morfología
colonial bajo los próximos criterios en
general, Forma, tamaño, color, bordes,
área, altura, opacidad, consistencia y
aspecto, destacando cualquier otra
característica que ayude a la
identificación del microorganismo).
E. ¿Cuál es el fundamento de la técnica
de aislamiento por vaciado en placa?
Rpta/
El motivo de la técnica se basa en contar
las colonias, que se desarrollan en el
medio de elección luego de un cierto
tiempo y temperatura de incubación. El
procedimiento admite varias fuentes de
alteración, varias de ellas controlables,
pero sujetas a la predominación de
diversos componentes.
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F. ¿En qué casos se utiliza la técnica axénicos. Sin embargo, la identificación

de extensión con varilla? bacteriana y la caracterización completa
solo es viable tras el confinamiento de la
Rpta/
bacteria y la obtención de cultivos puros.
En la técnica por diseminación en el área
El propósito de este laboratorio ha sido
de un medio sólido en placa de Petri,
hallar las distintas propiedades de ambas
como la dilución previa, expansión de
muestras de microorganismos, siendo
área, extenuación de asa, depósito y
estas Pseudomona Aeruginosa y
consecutivo de quemado
Echerichia Coli.
G. ¿Para qué se hacen las diluciones?
La Pseudomona Aeruginosa se tiñó de
¿Es posible sembrar una muestra en
color azul, demostrando de esta forma
forma directa?
una capa de peptidoglucano entre su
Rpta/ citoplasma y su pared celular, siendo esta
una bacteria Gram positiva y la
la dilución es la reducción de Echerichia Coli se tiñó de color rosado,
concentración de una sustancia química observando tal cual una membrana
en una ruptura. Las disoluciones se lipídica exterior a la pared celular y una
hacen, debido a que estas se basan en fina pared de peptidoglicano.
descargar las proporciones de soluto por
unidades de volumen de disoluciones.
No es viable plantar una muestra en Referencias
forma directa, es decir ya que la muestra
[1] ATLAS, RONALD M. Ecología
se debería suspender en solución
microbiana y microbiología ambiental.
fisiológica o caldo nutritivo, para después
Edición: 4 ed. Madrid: Pearson. 2002.
de esta forma elaborar después las
677 p.
diluciones seriadas decimales en
condiciones asépticas. Se toman las [2] BROOCK. Biología de los
diluciones y se estría con ellas una placa Microorganismos. Edición: 10 ed.
para cada una. En la dilución idónea se México. 2002. 484 p.
obtendrán colonias aisladas.
[3] JUAREZ, MIRIAM. Manual de
laboratorio de microbiología ambiental.
Instituto politécnico nacional. 2011
Conclusiones
[4] LAURA RAMÍREZ. Practica de
En la naturaleza, los microorganismos se
laboratorio 5, aislamientos de
hallan conformando poblaciones mixtas
microorganismos.
con otros tipos de microorganismos. No
obstante, el razonamiento de los
microorganismos se consigue por medio
del análisis de cepas recluidas, cultivadas
en el laboratorio en cultivos puros o

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