INFORM [PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE

E MICROBIOLOGÍA]

[MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL] | ING. AMBIENTAL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL

 “Año De La Promoción De La Industria
Responsable Y Del Compromiso Climático”
Universidad Nacional de Piura
PROEDUNP - Sullana

ESPECIALIDAD : Ingeniería Ambiental y Seguridad Industrial.

CURSO : Microbiología Ambiental

TEMA : Práctica de laboratorio

DOCENTE : Blgo. Henry Robles Cueva

ALUMNA : Saldarriaga Palacios Flor Vanessa

Enero 2014
 Práctica N°4
AISLAMIENTO POR DILUCIONES SUCESIVAS Y REECUENTRO
DE COLONIAS

Introducción
En el manejo de muestras contaminadas o cultivos mixtos en los que se
encuentran diversos microorganismos, el primer paso para proceder a su
estudio es el aislamiento, es decir la separación de cada uno de los posibles
integrantes microbianos de la muestra.

Existen diversos métodos para conseguir esta separación, la mayoría de ellos

basados en la inmovilización de las células microbianas en la superficie de los
medios de cultivo sólidos. Al depositar una célula bacteriana o una levadura en
un punto del medio de cultivo, ésta quedará inmovilizada en ese punto y en él
se reproducirá por absorción de los nutrientes del medio. Las nuevas células
generadas permanecerán igualmente inmóviles y tras sucesivas generaciones
conformarán lo que denominamos una "colonia" que no es más que un montón
de células derivadas de una sola célula madre inicial, es decir, un clon de la
bacteria o levadura depositada al sembrar. Esta colonia es visible al ojo
humano y presenta diferentes características según el microorganismo que la
genera. Esto nos permite distinguir las diferentes poblaciones microbianas que
se encuentran en la muestra sembrada y separarlas transfiriendo una colonia
de cada tipo a un nuevo medio de cultivo estéril, a estos cultivos los
consideraremos "puros" por poseer un sólo tipo de microorganismo. (El
fundamento es válido teniendo en cuenta sólo microorganismos cultivables)

Objetivos
 Distinguir los conceptos de cultivo puro y cultivo mixto.

 Aplicar técnicas de aislamiento para la localización de microorganismos

concretos en muestras contaminadas o con flora mixta.

 Aplicar las técnicas del agotamiento y las estrías escocesas como las más
habituales en aislamiento de microorganismos cultivables.

 Observar la influencia de la temperatura sobre el desarrollo de los

microorganismos.
Técnicas de aislamiento. Se realiza un aislamiento de los microorganismos
presentes en un cultivo mixto en caldo ordinario, sobre agar nutritivo. Se
siembran dos placas de agar nutritivo, una mediante la técnica del agotamiento
de asa y otra mediante la de estrias escocesas.

Estas técnicas pretenden diluir la carga microbiana que se deposita sobre el

medio de cultivo de forma que, en los últimos trazos de la siembra, haya tan
pocas células que queden suficientemente separadas unas de otras y puedan
desarrollar colonias independientes.

Técnica de aislamiento y recuento: el banco de diluciones. Se realizan una

serie de diluciones seriadas a partir del cultivo mixto Con esta técnica
conseguimos además de aislar colonias, obtener un recuento del número de
bacterias que tenemos en el cultivo.
METODOLOGÍA

SIEMBRA POR ESTRIAS.-Durante este proceso se coge la placa y

se lleva a flamear al mechero para de esa forma esterilizar las
cosas se agarra la pinza de utilización cogiendo el contenido de la
suspensión bacteriana y se comienza a realizar diferentes líneas en
la placas de formas de estrías de un solo lado luego, continuas con
otro y luego así sucesivamente hasta que la placa que totalmente
con estrías.

SIEMBRA PLACA INCLINADA- Durante este proceso se coge el

tubo de ensayo siempre flameando cada objeto a utilizar para la
esterilización, de placa en suspensión bacteriana se coge un poco
con la pinza se coloca en el tubo estriando de abajo hacia arriba el
tubo de ensayo.

SIEMBRA PLACA VERTIDA- Se coge la pipeta y se procede a

absorber 1ml de la suspensión bacteriana, y se procede a vaciar en
la placa.

RESULTADOS

En la práctica en las muestras utilizadas, los resultados recién se pueden

apreciar después de 48 horas o sea 2 días aproximadamente.
Lo que se espera es que el cultivo se reproduzca en la placa

DISCUSIONES Y RECOMENDACIONES

 En esta práctica de laboratorio era muy importante esterilizar todo lo que

íbamos a utilizar ya que de lo contrario podíamos nuestra siembra
bacteriana.
  Para preparar un medio de cultivo se tiene que colocar el guardapolvo y
manejar los instrumentos necesarios con mucho cuidado evitando
contaminar la suspensión bacteriana y el sembrado a realizar

CONCLUSIONES

 En esta práctica de laboratorio aprendimos realizar siembra por

estrías, siembra de placa inclinada, siembra por placa vertida.

 Durante está practica nos familiarizamos con la utilización de los

instrumentos utilizados, el mechero, las placas, observamos la
suspensión bacteriana, etc.

 En el desarrollo de la práctica de laboratorio aprendimos a diferenciar

y reconocer cada metodo

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

 Módulo de laboratorio de Prácticas

 http://www.instrumentosdelaboratorio.net/2012/05/bano-
de-maria.html

 https://www.google.com.pe/search?
q=microbiologia&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ei=IjwZ
U9WvFI-
5kQf3_YGwDA&ved=0CAcQ_AUoAQ&biw=1366&bih=667
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