PRÁCTICA N.

PROCEDIMIENTOS BÁSICOS UTILIZADOS EN EL LABORATORIO DE

MICROBIOLOGÍA

Esta práctica ha sido diseñada para identificar los procedimientos básicos

utilizados en el laboratorio de Microbiología. Entre ellos esta: desinfección,
uso del mechero; medios de cultivo, tinciones.

El cultivo de microorganismos es una actividad que requiere del

conocimiento de técnicas de siembra o inoculación y de aislamiento para
transferirlos de un medio a otro, o mantener su crecimiento y actividad. Es
indispensable para realizar diversos estudios morfológicos, de identificación,
bioquímicos, de patogenicidad y ecológicos, entre otros.

Existen diferentes técnicas de siembra: por suspensión de la muestra en

medios líquidos, extensión de diluciones de un cultivo en superficie de
medios en caja de Petri, por estría en caja de Petri y tubos con medios
solidificados en forma inclinada, por piquete o picadura en tubos con medios
sólidos o semisólidos. Con la aplicación de cada técnica se obtiene
información de importancia para el estudio básico o aplicado de los
microorganismos de interés.

En la naturaleza, los microorganismos generalmente se encuentran en

poblaciones, formando parte de comunidades de gran complejidad, por lo
que uno de los objetivos de estudio más importantes en microbiología es
aislarlos. El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza,
en la mayoría de los casos, mediante la técnica de estría para producir
colonias aisladas en cultivos sólidos y así, obtener un cultivo puro o axénico,
también conocido como cepa, que contiene un solo tipo de microorganismo
con la misma composición genética.

Además, observarán las técnicas de preparación de frotis, fijación y tinción

más utilizadas en el estudio microscópico de cultivos microbianos.
Los microorganismos vivos o activos son por lo general incoloros (excepto
algas y cianobacterias), por los que no se observarán con facilidad en un
microscopio óptico por la falta de contraste entre las células y el medio
circundante, por lo que es necesario fijarlos y teñirlos en un frotis.
Existen diferentes tipos de tinciones: simple, diferencial y selectiva, de
acuerdo con el número y tipo de colorantes utilizados y de los objetivos para
su estudio. La tinción que hace uso de un solo colorante es la simple.

I. OBJETIVO GENERAL.

Reconocer la importancia de los procedimientos básicos de laboratorio para

la identificación de microorganismos

II. MATERIALES

Materiales y Equipos cada 2 estudiantes:

- Tubos con solución salina estéril 0.85%
- Laminas porta objetos 3x1”
- Cultivo en caja Petri con Bacillus subtillis
- Placas con medio de cultivo, agar simple
- Frasco con desinfectante (Fenol al 5%)
- Tubo con Bacillus subtillis
- Asas bacteriológicas
- Mecheros bunsen
- Cerillos
- Jabón
- Papel toalla y tirro (material que traerá el estudiante)
- Esponjas
- Fenol 5%
MATERIALES PARA EL DOCENTE

- Placas con medio de cultivo, Agar Simple

- Laminas portaobjetos 3 X 1"
- Placa de Petri con cultivo de Bacillus subtillis
- Papel toalla

III. PROCEDIMIENTOS

A continuación, el docente hará una demostración de cada uno de los

procedimientos. Además, se indicará las medidas de bioseguridad que deben
de cumplir cuando se trabaja en un laboratorio de microbiología.

Procedimientos utilizados en un laboratorio de Microbiología:

A. TÉCNICA PARA EL USO DEL MECHERO BUNSEN

Figura 1. Mechero de
Su utilización es un proceso bastante Bunsen
sencillo. Lo primero que se debe hacer
es, asegurarse de que el espacio donde
se vaya a encender no tenga ningún
material inflamable. Luego encender un
cerillo y abrir la llave del gas
suavemente. Ajuste el cuello de metal y
la válvula de gas para controlar el
tamaño de la llama y su temperatura.
Cuando termine de utilizarlo, cierre la
llave del gas. (Ver figura 1 y 2).
Figura 2. Temperaturas que se alcanzan en el mechero de bunsen

B. TÉCNICA PARA LA ESTERILIZACIÓN DEL ASA BACTERIOLÓGICA

El asa bacteriológica es un instrumento extraordinariamente sencillo, pero de

gran valor en el trabajo microbiológico. Consiste en un alambre delgado de
platino o de cobre que rápidamente se pone incandescente al colocarlo en la
parte más caliente de la llama de un mechero de Bunsen (parte superior de la
llama color azul claro) igualmente se enfría con rapidez al retirarlo de la
llama. Cualquier microorganismo vivo que se encuentre en el asa será
incinerado en pocos segundos, quedando el asa estéril y lista para utilizarse
en los diferentes procedimientos bacteriológicos. La posición correcta para la
esterilización del asa se puede observar en la figura 3. Para esterilizar el asa
se siguen los pasos siguientes:
1. FLAMEAR primero la punta del ASA introduciéndola en el centro de la
llama.
 2. Esperar que la parte en contacto con la llama externa se ponga al rojo
vivo.
3. Exponer el resto del asa a la llama externa hasta que se ponga al rojo
vivo.

Figura 3. Posición del asa para su correcta esterilización.

C. TÉCNICA DE PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO A PARTIR DE

UN MEDIO SÓLIDO.

- Con el asa previamente esterilizada deposite sobre el portaobjetos una

gota de solución salina al 0.85% estéril.
- Esterilizar de nuevo el asa bacteriológica y déjela enfriar cerca del área
del mechero.
- Con el asa ya fría, tomar una pequeña porción de una colonia y
homogenizar en una gota de solución salina colocada en el
portaobjetos.
- Dejar secar el frotis al ambiente.
- Fijar el frotis, pasándolo ligeramente 2 o 3 veces por la llama del
mechero.
IV. DISCUSIÓN:
(llevar a la respectiva práctica resuelta esta guía)
¿Qué es un medio de cultivo?
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y
otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo
de los microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que
la variedad de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de
cultivo universal adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las
bacterias con exclusividad

2. ¿Qué es el AGAR?
Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En
el agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se
obtiene de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que a
excepción de algunos microorganismos marinos, no es utilizado como
nutriente.

3. ¿Qué es un medio sintético?

Es un medio con un compuesto químico definido utilizado habitualmente
para cultivar fotoautótrofos, como las cianobacterias y los protistas
fotosintéticos. Se utiliza mucho en investigación para estudiar el
metabolismo de los microorganismos.

4. Para que es útil el mechero en un laboratorio de Microbiología.

Los equipos con llama se emplean fundamentalmente para calentar,
evaporar o esterilizar muestras o reactivos químicos. Los más habitualmente
usados en el laboratorio son los mecheros, habiéndolos de alcohol y gas
(mechero Bunsen)
5. Explique por qué se esteriliza el asa bacteriológica en el laboratorio
Antes de cada uso, el asa se esteriliza calentándola hasta que se ponga al rojo
vivo y luego se deja enfriar para eliminar microorganismos presentes.
6. ¿Cuál es la utilidad de un medio de cultivo líquido?
Los medios de cultivo líquidos son aquellos en los que los nutrientes están en
forma líquida. Los medios de cultivo líquidos se utilizan para la producción de
grandes cantidades de microorganismos o para la observación de
características microscópicas de los microorganismos

7. ¿Cuál es la utilidad de un medio de cultivo sólido?

Los medios de cultivo sólidos son aquellos en los que los nutrientes están en
forma sólida, generalmente en forma de agar. El agar es una sustancia
gelatinosa que se utiliza para solidificar los medios de cultivo. Los medios de
cultivo sólidos se utilizan para la observación de características
macroscópicas de los microorganismos, como la forma y el color de las
colonias

8. ¿Cuál es la utilidad del Método de Estriado?

Este método es muy utilizado para obtener un gran número de
microorganismos (incremento de inóculo), en la superficie de un agar.

9. ¿Qué es un inóculo?
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra
(inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano,
para su desarrollo y multiplicación

10. ¿Cuál es la forma adecuada de incubar los cultivos realizados en placa de

Petri y en tubo?
Una vez que hayas sembrado las bacterias, cerrá la tapa de la placa de Petri y
colócala en posición invertida para evitar la condensación de agua en el agar.
Coloca las placas en una incubadora a la temperatura adecuada para el
crecimiento de las bacterias que estás cultivando.
11. ¿Por qué es importante la realización de un frotis bacteriano?
La importancia del frotis bacteriano radica en su utilidad en el diagnóstico
médico. A través de esta técnica, los profesionales de la salud pueden
identificar el agente causal de una infección bacteriana y determinar su
sensibilidad a los antibióticos. Esto es fundamental para prescribir el
tratamiento adecuado y evitar complicaciones o resistencia bacteriana.

V. BIBLIOGRAFÍA

Jawetz, Medicick y Adelberg. Microbiología Médica. 25a Ed. Mc Graw —

Hill, lnteram. Edit. México. 2011.

Murray, Rosenthal y Pfaller, Microbiología Médica, 7ª. Edición. ElSevier,

Saunder España. 2014