UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE INGENIERÍA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIA, TECNOLOGÍA E INGENIERÍA

DE ALIMENTOS

“METODOS DE SIEMBRA DE MICROORGANISMO”

DOCENTE: ING.CONDORI RONDAN, VICTOR ELVIS

CURSO: MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS 1

AUTORES: SEVILLANO VILLANUEVA, DAIVID

BERAU RIBERA, CESAR

TINGO MARÍA – PERÚ

2020
 I. INTRODUCCIÓN

En microbiología se entiende como siembra el proceso mediante el cual se

lleva una porción de una población de microorganismo, denominada entonces
inoculo, de un cultivo crecido a un medio nutritivo para su crecimiento. En la
naturaleza los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixtas con
otros tipos de microorganismo. Los cultivos de estas mezclas se llaman por ello
cultivos mixtos. Sin embargo, el conocimiento en cultivos puros o axénicos. La
identificación bacteriana y la caracterización completa solo es posible tras el
aislamiento de la bacteria y la obtención de cultivo puros. Por ello el primer
problema al estudiar una bacteria es su aislamiento del resto del microorganismo
presentes (en una muestra patológica, de agua, de suelo, de alimentos, etc.) unas
ves que se ha logrado el aislamiento es posible obtener la bacteria de interés en
cultivo puro.

Es la separación de un determinado microorganismo del resto de

microorganismos que le acompañan. El método más usual es la siembra por
estría sobre un medio de cultivo sólido adecuado dispuesto en una placa de Petri.

Para ello se toma una pequeña cantidad de muestra con un asa de platino
y se reparte sobre la superficie del medio de cultivo. Sobre el medio quedan
separadas e inmovilizadas las células bacterianas. Tras la incubación en
condiciones adecuadas, cada célula viable origina una colonia visible resultado de
sucesivas divisiones celulares. Cada colonia bacteriana tiene unas características
determinadas en cuanto a su forma, borde, elevación, tamaño, consistencia, etc. 
Los tipos de bacterias presentes en la muestra original es visible como tipos
diferentes de colonias. A  partir de colonias separadas suficientemente es posible
obtener un cultivo puro de cada uno de los tipos de bacterias presentes en la
muestra original.
 Es aconsejable hacer un segundo aislamiento antes de proceder a la
obtención del cultivo puro. Si todas las colonias de la segunda placa resultan
idénticas, puede usarse una de ellas para establecer el cultivo puro. Obtenido el
cultivo puro es conveniente comprobar su pureza mediante una tinción de Gram.
Los cultivos puros de microorganismos son mantenidos en el laboratorio
por resiembras (pase de un medio de cultivo a otro) sucesivas. Una de las copias
puede ser liofilizada para su conservación.
II. Objetivo
- Que el alumno aprenda a trabajar en condiciones de asepsia y sea capaz
de inocular medios de cultivo sólidos mediante el uso de dos diferentes
métodos de inoculación.
 III. REVISIÓN BIBLIOGRAFICA

Siembra: es el acondicionamiento de un microorganismo en un medio de cultivo,

de acuerdo a sus exigencias vitales, para que, en condiciones óptimas de
temperatura y tiempo de incubación, pueda desarrollar y multiplicarse in vitro. Se
siembra con 2 finalidades:

A) Para hacer un aislamiento

B) Para hacer un trasplante.

 Aislamiento: Permite la separación de microorganismos al estado de pureza

a partir de una muestra problema. Se requiere un medio sólido con gran
superficie para que los microorganismos al ser diseminados sobre el medio,
generen su progenie formando colonias separadas. Si se aíslan colonias
distintas, cada colonia tendrá caracteres especiales. La morfología
microbiana también será distintiva.
 Trasplante: Significa la separación primaria de la cepa a un medio de cultivo
apropiado en tubo, que puede ser líquido o sólido. Se conserva la cepa
pura y por tanto trasplantes en medios especiales, se logran conocer las
propiedades culturales y bioquímicas y como resultado, la identificación
específica.

Las siembras pueden ser:

1. Primarias: Cuando el material es inoculado en los medios por primera vez.

2. Secundarias: Cuando el material a inocular procede de una siembra
primaria.
A. Aislamiento de bacterias aerobias en placa Petri

Todo aislamiento implica el agotamiento de una muestra sobre la superficie del

medio del medio sólido. Se va descargando gradualmente el inóculo, para que
los últimos planos o cuadrantes del medio de cultivo queden escasas células
que en el ambiente nutricional se irán multiplicando logarítmicamente hasta
formar colonias puras. Los métodos de aislamiento varían según el dispositivo
de siembra y la forma de distribuir el inóculo. Cualquier que sea el método
ensayado, aprovechando el máximo de superficie del medio, se logra el
aislamiento de mayor número de cepas microbianas.

 Aislamiento por el método de estriado: El método de estrías en placa

es el procedimiento clásico para aislar cepas de bacteria. Este método
consiste en la separación de un determinando microorganismo del resto
de microorganismos que le acompañan. Estriar para aislar implica una
sola inoculación de una sección de la placa de Petri y a continuación,
disminuir la colonia arrastrando microrganismos de la sección inicial a
dos o tres secciones adicionales, achicando eficazmente la población de
microorganismo. Generalmente es utilizado para separar un cultivo
mixto.
a. Estría simple: Esta técnica es ampliamente utilizado para la
visualización de ciertas propiedades metabólicas tales como la
producción de enzimas hidrolíticas (a través de la hidrólisis de las
sustancias – yema de huevo, sangre) y la producción de pigmento.
 Fig. 1 Estría simple

b. Estriar para aislar: Implica una sola inoculación de una sección de la

placa de Petri y a continuación, disminuir la colonia arrastrando
microorganismos de la sección inicial de dos o tres secciones
adicionales, achicando eficazmente la población del microorganismo.
Generalmente utilizado para separar un cultivo mixto de las bacterias.
Estría en T; se dibuja una T en la placa y se procede a estriar en tres
cuadrantes (A, B, C).

Fig.1.1 estría en T

c. Estriado por agotamiento sobre cuatro cuadrantes: Este también es

un método de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro secciones
en lugar de tres. Divide la placa de Petri en cuatro parejas iguales,
consiste en sembrar uno a uno los cuadrantes, sin flamear el asa entre
 estría y estría, de tal forma que cuarto cuadrante, al ir agotando la
muestra del asa, tendremos los microorganismos aislados, Es
importante no cruzar las estrías (no tocar con el asa la estría anterior)
para reducir el inoculo a cada estría y obtener colonias aisladas.

Fig. 1.2 técnicas de cuatro cuadrantes

 Puede alternamente flamear el asa al terminar cada cuadrante y toca la

punta del asa la última estría anterior para arrastrando un pequeño
inóculo a la siguiente estría. También es importante que en los primeros
cuadrantes hagamos las estría más junta y que la cantidad de muestra
tomada en el asa de siembra sea la adecuada, y que los últimos dos
cuadrantes hagamos las estrías más separadas.
 Fig.1.3 técnicas de cuatro cuadrantes

B. Método se siembra en placa para el recuento de microorganismos

viables:
Las siembras para recuentos son aplicadas en la medición del crecimiento
de los microorganismos, entre otros fines. En estos casos el contenido
microbiano de un medio (leche, agua, suelo, alimentos, etc.) es de varios
millones por gramo o mililitro de inóculo, y los recuentos en placa permiten
la determinación de los microorganismos presentes en una muestra sobre
la base de que se desarrollen sobre un medio de cultivo apropiado, en
placa, formando colonias. Es decir, que en medio solido cada viable dará
origen a una colonia, de manera que se determinen por este método solo
las células microbianas viables en las condiciones de trabajo (nutrientes,
temperatura, atmosfera).
El método involucra, como primer paso, la dispersión de la muestra a
contar, usando diluciones decimales de la muestra, tal como se muestra en
la figura, con el objetivo de obtener concentraciones apropiadas de células
bacterianas en las placas, evitando obtener tanto placas repletas de
colonias, como placas sin ninguna colonia.
Siembra en placa por extensión y siembra incorporada o por inclusión
(Pour plate): Se prefiere utilizar este método cuando se trata de analizar
muestras en las que se quiere observar la diversidad de colonias que
presentan.
 Fig. 1.4 Siembra en placa por diluciones

Siembra en agar en tubo: En el caso del tuno inclinado se colocan 5 ml de

medio de cultivo fundido y estéril, se inclina el tubo y se deja enfriar. Las
siembras en tubos con medio sólido, por lo general se emplean para la
conservación de un cultivo puro proveniente de una placa o para la siembra
de pruebas bioquímicas como el medio OF, SIM y MIO.

El pico del tubo. Del medio con agar se inocula primero por punción
(cuando es necesario), seguido por una estría en el pico del tubo desde el
fondo a la parte superior con un movimiento en “S” a medida que se retira el
asa. En tubos en medio semisólido se utilizan tubos sin inclinar. Se siembra
por picadura, este tipo de medio contiene una proporción menor de agar
que los medios sólidos, en medio semisólido se podrá comprobar si el
microorganismo es móvil o no, ya que en el primer caso se observará que el
 crecimiento difunde alrededor de la zona donde se hizo la picadura,
detectándose turbidez.

Fig. 1.5 Siembra en agar en tubo

CRECIMIENTO:

1. Abundancia de crecimiento: La cantidad de crecimiento es designada

como ninguna, leve, moderada o abundante.
2. Pigmentación: Los microorganismos cromogénnicos, pueden producir
pigmentos intracelulares que son responsables de la coloración de las
colonias, otros microorganismos producen pigmentos solubles
extracelulares que son excretados en el medio y también producen un
color, sin embargo, la mayoría de los microorganismos son no
cromogénicos y aparecerán en tonalidades que van desde el blanco hasta
el gris.
3. Las características ópticas: Pueden evaluarse con base a la cantidad de
luz transmitida a Trávez del crecimiento, estas características son descritas
como: opaca (ninguna transmisión de luz), traslucida (transmisión parcial), o
transparente (transmisión total de luz).
4. Forma: La apariencia del crecimiento de la siembra en una solo línea sobre
la superficie del agar inclinado se designa de la siguiente forma.
A. Filiforme: Crecimiento de forma de hilo con bordes lisos continuos.
B. Esquinulado: Crecimiento en forma de hilo con bordes irregulares
continuos.
C. Barbado: Colonias semi-confluentes o no confluentes.
D. Difuso: Crecimiento difuso y reducido.
E. Arborescente: Crecimiento en forma de árbol.
F. Rizoide: Crecimiento en forma de raíz.

A .B C D E F

Siembra en tubo
en medio líquido: La siembra en tubos de cultivo en medio líquido, el
tubo debe inclinarse en un ángulo de 30 ° y el asa de inoculación debe
tocar la superficie interna del vidrio, justo encima del punto donde la
superficie del agar forma un ángulo agudo. Cuando el tubo es vuelto a su
posición vertical, el área de inoculación queda sumergido debajo de la
superficie, se puede agitar suavemente el asa en el inferior del medio
líquido.
CRECIMIENTO:
A. Turbidez fina uniforme:
Crecimiento fino y totalmente disperso
B. Floculante: Crecimiento en agregados escamosos totalmente dispersos.
C. Película: Crecimiento en la superficie como plataforma gruesa.
D. Sedimento: Concentración de crecimiento en el fondo del caldo, puede ser
granular, escamoso o floculante.

ESTUDIOS DE LA MORFOLOGÍA DE LA COLONIA

Cuando se cultivan microorganismos sobre medios de cultivo sólidos, las

cél0ulas aisladas se multiplican sucesivamente hasta dar un crecimiento
visible conocido con el nombre de colonia, las características de estas
colonias son estudiadas y se usan en la identificación de las especies. Las
características que se le estudian a las colonias son: Tamaño, Elevación,
Pigmentación, Apariencia general, Forma, Superficie, Borde.

a. Tamaño: Grande (diámetro mayor a 1mm), mediano(diámetro

aproximado a 1mm), pequeño (diámetro inferior a 1mm), y puntiforme.
b. Forma: Puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide y lanceolado.
c. Borde: de borde regular (continuo), de borde irregular (ondulado,
lobulado).
d. Elevación: plana o aplastada, elevada.
e. Superficie: Liso o rugoso.
f. Consistencia: Blanda dura o mucoide.
g. Aspecto: Brillante, opaco y mate o translucido.
h. Pigmento: De diferente color, soluble en agua y que decoloran el
medio.
i. Hemolisis: Parcial (alta, parcial aclaración de la sangre alrededor de las
colonias, con decoloración verde del medio, borde de células rojas
intacta). Total (Beta, zona de completa aclaración de sangre alrededor
de las colonias, debida a la lisis de las células rojas). Y no hemólisis
(gamma. No hay cambio en el medio circundante a la colonia, no hay
lisis ni decoloración de las células rojas de la sangre).
 IV. MATERIALES Y METODOS

4.1. MATERIALES

 Cajas de Petri
 Mechero
 Rejillas
 Tubos de ensayo
 Estufa
 Asa de siembra

4.2. METODOS

La técnica empleada para realizar la siembra bacteriana a partir de diferentes

cultivos que se encontraban previamente en el laboratorio.

 El asa se esteriliza en el mechero hasta estar al rojo vivo.

 Se tomará una muestra del cultivo de microorganismos (desconocidos) y se
depositará sobre el agar donde se realizará la siembra.
 El asa se esterilizará nuevamente y con esta se extendió la muestra sobre
un área del agar formando estrías juntas.
 El asa se esterilizará por tercera vez, y de las estrías previamente
realizadas se tomará una muestra de cultivo y se realizaran nuevas estrías
a un lado de las primeras.
 Las cajas Petri serán incubadas a 37°C de 24 a 48 horas.
 Finalizada la incubación se procederá a observar y evaluar las colonias
presentes en el cultivo.
 V. Resultados
ESTRIA SIMPLE
No se obtuvo buen resultado es este caso de aislamiento.

ESTRIAR PARA AISLAR

En este caso se pudo aislar poca cantidad de microorganismo.
ESTRIADO POR AGOTAMIENTO SOBRE CUATRO CUADRANTES

En este estriado no se pudo hacer con facilidad y eso no nos dio buen resultado.

SIEMBRA EN AGAR EN TUBOS

En este caso de siembra en tubos se puede observar que se pudo aislar

microorganismo.
CALDOS
Se pudo ver el cambio en caldo
turbidez por que se obtuvo el crecimiento
de microorganismo con la muestra de la
chica morada
 VI. Discusiones

Habiendo ya terminado nuestra primera experiencia de laboratorio e informe,

podemos decir que, luego de realizar una reflexión pertinente frente al trabajo
realizado, los objetivos que nos planteamos fueron cumplidos de manera
generalmente exitosa, pero que sin embargo existieron pequeños errores y
confusiones durante la experiencia, que, a pesar de todo, no la llevaron al
desastre, ya que se llevó a cabo el método de siembra por agotamiento, aunque
no de manera perfecta.

A pesar de todo, gracias a esta experiencia pudimos aplicar los conocimientos

adquiridos en la clase de microbiología de alimentos I
Se conoció de forma más práctica cómo
se llevan a cabo las normas y procedimientos para el aislamiento de microbios y la
formación de colonias
También podemos concluir a partir de los conocimientos adquiridos en esta
experiencia que los procesos de esterilización, desinfección y demás son
importantísimos en la microbiología, ya que son la puerta para la siembra y el
aislamiento de colonias de microorganismos, y por ende al estudio serio de estos
para el avance de la ciencia.

Con esto podemos decir que las bases para el estudio de los microorganismos se
encuentran en el aislamiento de estos mismos mediante el uso de técnicas de:
esterilización, desinfección, aislamiento de medios de cultivos y siembra. Todo
esto para poder ser manipulados y estudiados de mejor manera.
 VII. Conclusión

- Se logró recordar las técnicas y procedimientos básicos de microbiología

general, sobre todo se llegaron a aplicar de forma correcta lo cual servirá
posteriormente en el control de microbiología de alimentos.

- Los medios de cultivo son uno de los métodos más usados para el análisis
de microorganismos con varios fines, como el de multiplicación,
identificación, entre otros, y puede ofrecer información valiosa sobre los
mismos si se realiza de manera adecuada e higiénica para evitar la
contaminación del medio y la alteración de los resultados

.
 VIII. Revisión bibliográfica

INGRAHAM AND INGRAHAM. “Introducción a la Microbiología”. Editorial

Reverté. 1998.

SCHLEGEL, H.G. “Microbiología general”. Ediciones Omega, S.A. 1997

JIMENEZ SANCHEZ Y GUERRERO. “Genética molecular bacteriana”.

Editorial Reverté.