PCR (REACCIÓN EN CADENA DE LA

POLIMERASA)

Presentado por:
Cristian Fernando Blanco
Sebastián Camilo Lara
Julieth Andrea Niño
 ¿Qué es PCR?
La reacción en cadena de la
polimerasa ó Polymerase chain
reaction (PCR) es una técnica de
laboratorio común especialmente en
Biología Molecular desarrollada por Kary
Mullis y col. en 1983 utilizada para
hacer muchas copias de una región
particular de ADN in vitro.
Por lo general, el objetivo de la PCR es
producir suficiente ADN de la región
blanco para que pueda analizarse o
usarse en:
- Ámbito forense.
- Identificar virus o bacterias causantes
de enfermedades.
- Test de paternidad.

Fig 2. Aplicaciones
de PCR.
Fig 1. Kary Mullis desarrollador de la
PCR.
 Cuando hacemos una reacción de PCR simulamos lo que sucede en
una célula cuando se sintetiza el ADN y en el tubo se mezclan todos
los ingredientes necesarios para hacerlo:
- - Taq Polimerasa y tampón ó Buffer.
- - ADN del organismo.
- - Oligonucleótidos (llamados también primers, iniciadores, cebadores).
- Dinucleótidos (dNTPs)
- Las condiciones para que la enzima trabaje adecuadamente (cierto
pH, determinadas cantidades de magnesio en forma de MgCl2, KCl, y
otras sales o reactivos, dependiendo de cada polimerasa)
 Taq Polimerasa
Las polimerasas son proteínas con función
enzimática de crear polímeros, en este caso
crean polímeros de nucleótidos para formar
una cadena de ADN.
T. aquaticus vive en aguas termales y fuentes
hidrotermales. Su ADN polimerasa es muy
termoestable y su mayor actividad se presenta
cerca de los 70°C.

La ADN polimerasa que normalmente se

utiliza en la PCR se llama Taq polimerasa, por
la bacteria tolerante al calor de la que se
aisló (Thermus aquaticus).

Fig 3. Thermus aquaticus.

 Primers o cebadores
Los cebadores para PCR son pedazos cortos
La Taq polimerasa solo puede hacer ADN
de ADN de cadena sencilla, generalmente de
si hay un cebador (corta secuencia de
unos 20 nucleótidos de longitud.
nucleótidos que proporciona un punto de
En cada reacción de PCR se utilizan dos
partida para la síntesis de ADN).
cebadores que están diseñados para flanquear
En una reacción de PCR, la región de ADN la región blanco (la región que debe ser
que será copiada, o amplificada, se copiada). Es decir, les agregan secuencias que
determina por los cebadores que el harán que se unan a cadenas opuestas del
investigador elija. molde de ADN solo en los extremos de la
región a copiar. Los cebadores se unen al
molde mediante complementariedad de bases.
 Pasos de PCR
En la PCR se simula en un tubo lo que ocurre durante la
Esta mezcla se somete a la repetición de varios ciclos
replicación celular.
a diferentes temperaturas (ciclo de PCR) que sustituye
La síntesis de nuevas cadenas de ADN se lleva a cabo a la mayoría de las proteínas que actúan en la
mezclando: el ADN que contiene el o los fragmentos que replicación celular.
se van a amplificar; la polimerasa; los primers
(fragmento de ADN de 15-30 nucleótidos que flanquean la
región a amplificar y que aportan el extremo 3’ libre para
que inicie la transcripción); desoxinucleótidos (dNTPs);
cloruro de magnesio (MgCl2) u otro co-factor necesario
para que trabaje la polimerasa y una solución
amortiguadora que mantenga el pH apropiado para que
se lleve a cabo la síntesis.

Fig 4. Componentes necesarios para PCR.

1. Desnaturalización (96°C): La reacción se
calienta bastante para separar, o
desnaturalizar, las cadenas de ADN. Esto
proporciona los moldes de cadena sencilla
para el siguiente paso.

Se separa la doble hélice de ADN

mediante calentamiento entre 94 y 96° C
para romper los puentes de hidrógeno que
las unían, de esta manera queda molde
para una nueva cadena complementaria
de ADN.
2. Templado (55 - 65°C): La reacción se
enfría para que los cebadores puedan
unirse a sus secuencias complementarias
en el molde de ADN de cadena sencilla.

Una vez separadas las cadenas del ADN,

se alinean los iniciadores a sitios
específicos complementarios de las
cadenas sencillas de la región que se va a
amplificar, para que esto suceda se baja la
temperatura entre 40 y 60 °C lo que
permite la unión (alineamiento) de los
iniciadores.
3. Extensión (72°C): La temperatura de la
reacción se eleva para que la Taq
polimerasa extienda los cebadores y
sintetice así nuevas cadenas de ADN.

Finalmente, se sintetiza una nueva cadena

en sentido 5’ a 3’ para lo cual se incrementa
la temperatura, por lo general a 72 °C,
porque es la temperatura óptima a la cual la
ADN polimerasa se une a los iniciadores y
comienza la replicación.
Este ciclo se repite 25 - 35 veces en una reacción de PCR típica, que
generalmente tarda 2 - 4 horas, según la longitud de la región de ADN
que se copia. Si la reacción es eficiente, puede producir miles de
millones de copias a partir de una o unas cuantas copias de la región
blanco.
resultados
Estos ciclos son repetidos varias veces, típicamente 30 veces, en el
termociclador. Al final de 30 ciclos de amplificación existen
aproximadamente un millón de copias del segmento de ADN de interés
por cada molécula molde original de la muestra inicial. Es así que
podemos seleccionar un fragmento específico dentro de todo el ADN
electroforesis y PCR
La electroforesis en gel es una técnica en la que una corriente eléctrica
impulsa fragmentos de ADN a través de una matriz de gel y los
fragmentos de ADN se separan según su tamaño. Típicamente se
incluye un estándar, o marcador de peso molecular, para que pueda
determinarse el tamaño de los fragmentos en la muestra de PCR.
Los fragmentos de ADN de la misma longitud forman una "banda" en
el gel que se puede identificar a simple vista si el gel se tiñe con un
pigmento que se una al ADN. Por ejemplo, una reacción de PCR que
produce un fragmento de 400400400 pares de bases (pb) se vería así
en un gel.
conclusión
La PCR es una herramienta importante ya que produce suficientes
copias de una secuencia de ADN para poder ver o manipular esa región
de ADN.
Referencias:
- - PCR: Reacción en cadena de la polimerasa. (2019). Retrieved from
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/pcr.pdf
- - Espinosa Asuar, L. (2019). Guía práctica sobre la técnica de PCR. Retrieved from
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/530/cap17.pdf
- - Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). (2019). Retrieved from
https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-seque
ncing-pcr-electrophoresis/a/polymerase-chain-reaction-pcr
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