Practica No. 3.

Determinación
cualitativa de cianuro en material
Biológico

María Fernanda Hernández Felipe

José Luis Martínez García
Jocelin Martínez Vera
Carrera: Q.F.B
Grupo: 92
Fecha de entrega: 09/Sep/2021
 Practica No. 3

Objetivo
Determinar cualitativamente el contenido de cianuro en muestras biológicas

Introducción
El cianuro es una sal resultante de la combinación del ácido cianhídrico con diversos
compuestos; algunas de estas sales o derivados son absorbibles por el tubo digestivo,
como el cianuro potásico, pero otras no, entre ellas el fenocianuro férrico o azul de
prusia; de ahí la importancia de identificar el tipo de cianuro y la vía de absorción para
evitar la toxicidad. La toxicidad depende de que el cianuro se encuentre en forma libre
(gas o líquido) o compleja (acuoso o sólido). Este compuesto puede inhalado (gas),
ingerido (líquido o sólido) o adsorbido por contacto dérmico. La intoxicación aguda en el
ser humano resulta en convulsiones, vómitos, coma y la muerte. Básicamente, el
cianuro se presenta com o cianuro de hidrógeno (HCN), que es un gas, o en form a de
cristales como el cianuro de sodio (NaCN) o el cianuro de potasio (KCN)
El cianuro en cantidad de trazas está ampliamente distribuido en las plantas, en donde
se encuentra principalmente en forma de glucósido, ya que al parecer más que
metabolito secundario como en un principio se creía, son productos intermediarios en la
biosíntesis de algunos aminoácidos. Sin embargo, hay algunas plantas que pueden
acumular una alta concentración de este tipo de compuestos; en la almendra amarga
(Prunus amigdalus) se encuentra un alto contenido de amigdalina, que fue el primer
glucósido cianogénico descubierto y aislándose en 1830.
Destrucción Biológica
La degradación biológica de cianuro aprovecha de la capacidad de ciertos grupos de
microorganismos, mayormente bacterias, de utilizar compuestos cianurados como
fuente de carbono y nitrógeno convirtiendo el compuesto tóxico en sustancias inocuas.
La biodegradación de cianuro, como también se le conoce, resulta en la formación de
amonio. Los microorganismos involucrados poseen varios sistemas enzimáticos
específicos que les permite desarrollar en ambientes con alta concentración de cianuro.
Entre los microorganismos se conoce de la capacidad degradadora de muchos hongos
(Fusarium , Hasenula) y bacterias (E.coli, Pseudom onas fluorescens, Citrobacter,
Bacillus subtilis y otros) quienes asimilan cianuro y lo usan como fuente de nitrógeno y/
o carbono, teniendo como intermediario NH 3
Son diversos los mecanismos empleados para utilizar o romper la molécula de cianuro.
Uno de los mecanismos involucra a la enzima cianuro hidratasa, que resulta en la
conversión irreversible del cianuro en formamida, que finalmente es transformada en
CO y NH3.
La biosíntesis de los glucósidos cianogénicos ha sido ampliamente estudiada,
observándose que derivan de aminoácidos, los precursores de los glucósidos de
importancia en alimentos son los siguientes: L-tirosina precursor de durrina; L-
fenilalanina de prunasina; L-valina de linamarina y L-isoleucina precursor de
lotaustralina. En la Figura 3.1.1 se muestra la ruta de biosíntesis de los glucósidos
cianogéncios, de la cual un compuesto clave es la formación de la correspondiente
aldoxima, ya que dependiendo de la fisiología de la planta, a partir de este metabolito
se puede derivar hacia la formación de un diferente b-glucósido.
Desarrollo experimental

Colocar en el centro de una En el canal interno 1 mL de

cámara microdifusión de la muestra problema y
Conway, 1 mL de NaOH al paralelamente la muestra de
10% referencia (R)

Quitar la tapa con cuidado

en el interior de la campana Mezclar cuidadosamente y Adicionar suavemente 1
de extracción y agregar 5 dejar reaccionar durante 1 mL de ácido sulfúrico al
gotas de FeSO4 al 10% en hora en una estufa a 55 °C 10% sobre la muestra R y P
el centro de la cámara y tapar rapidamente
 Adicionar HCl concentrado
para disolver el precipitado
café del centro de la cámara

Cuando el color café se

disuelve totalmente, se
detecta la presencia de CN
al formarse un precipitado
fino de color azul (azul de
prusia)

Resultados y observaciones
MUESTRA IMAGEN OBSERVACIONES

La muetra problema que se utilizó

fue piracanto, a la cual se le quería
analizar la cantidad de CN- que
puediera contener, sin embargo lo
Muestra problema que se pudo visualizar fue que si es
que contenía la cantidas era muy
minima, debido a la coloración que
adquirió despues de haber añadido
el HCl

Lo que pudimos observar en la

muestra de referencia es que
claramente hubo la presencia de
Muestra de referencia color azul de Prusia debido a la alta
concentración de cianuro en la
muestra ya que el reactivo
empleado es precisamente el KCN
Conclusiones

La determinación de cianuro en diferentes muestras toma gran importancia debido a las

características toxicas que presenta este compuesto en determinadas cantidades en el
organismo que puede ir desde pequeños malestares como náuseas y vómitos hasta los
más severos como la muerte. Se puede hacer uso de sencillas pruebas para su
determinación en diversas muestras, como en este caso fue de material vegetal y de
esta manera se pudo observar si poseía o no este compuesto. En el caso de nuestro
equipo no se obtuvo un resultado positivo ya que la coloración, azul de Prusia, no se
notó en ningún momento descartando con ello la presencia de CN -. La causa posible
de esto es que nuestra muestra ya se encontraba muy madura, siendo así que éste se
puede apreciar en concentraciones visibles cuando esta inmadura.
ANEXO
Cuestionario

1. Escriba la reacción de hidrólisis que se lleva a cabo cuando se consume

un vegetal rico en glucósidos cianogénicos.

Esta hidrólisis puede producirse cuando las plantas que los contienen son masticadas o
cuando se desintegran (al molerlas, golpearlas, fermentarlas o en presencia de agua).
2. ¿Cuál es la respuesta tóxica del ácido cianhídrico en un organismo e
indica cuál es la DL50 para el hombre?
Actúa en el sistema nervioso central acumulando calcio intracelular y liberando
neurotransmisores excitatorios que inhiben enzimas que protegen al cerebro contra la
lesión por oxidación. Los sitios más afectados son la sustancia gris, el hipocampo, el
cuerpo estriado y el cuerpo calloso.

DL50 (hombre): 200 mg (por ingesta); 100 mg/kg (en contacto con la piel).

3. ¿Cómo eliminarías los glucósidos cianogénicos presentes en un alimento?

Por lavado o por calentamiento, porque el producto de su hidrólisis es soluble en agua
y volátil.

4. Indica la terapia antidotal que se aplica ante una intoxicación por cianuro.

El tratamiento consiste en medidas generales de apoyo, maniobras de reanimación,

descontaminación digestiva mediante disminución en la absorción y aumento en la
eliminación, oxígeno en dosis elevadas y antídotos con nitrito de amilo, nitrito y
tiosulfato sódicos.

El nitrito de amilo se administra mediante inhalación, seguido por el nitrito sódico por
vía intravenosa en dosis inicial de 300 mg. El nitrito de amilo convierte una fracción
tolerable de la hemoglobina circulante total en metahemoglobina, que tiene mayor
afinidad por el cianuro que la citocromo oxidasa, ya que promueve la disociación de
esta enzima.

La desintoxicación irreversible permanente del cianuro se logra por medio de tiosulfato

de sodio por vía intravenosa. El tiosulfato contiene un sulfanoazufre, un enlace sólo con
otro azufre que puede ser utilizado por la enzima rodanasa que se encuentra en el
hígado y el músculo estriado, la cual convierte el cianuro en tiocianato, que se excreta
fácilmente en la orina.

En los pacientes que no responden al tratamiento con el antídoto se debe administrar

oxígeno hiperbárico; otra alternativa, es la hidroxicobalamina, un precursor de la
vitamina B12, que también se une al cianuro, por lo cual se ha utilizado como un
antídoto alternativo, más seguro, que tiene pendiente autorización oficial como método
de descontaminación.

5. Describe otros métodos cuali y cuantitativos alternativos para la

determinación de cianuro en muestras biológicas
 Cianuro libre por volumetría
Se utiliza este método para concentraciones de cianuro mayores de 5 mg/l (ppm) y en
soluciones claras; el método es rápido y fácil. La técnica se basa en la reacción del
nitrato de plata con el ión cianuro en solución alcalina para formar el complejo soluble
Ag (CN)2 – según la reacción:
Ag+ + 2CN- = Ag (CN)2 –
Cuando no queda más cianuro en solución, el exceso de plata precipita como AgCN o
reacciona con el indicador (generalmente KI) para formar AgI. En ambos casos, el
punto final de la titulación lo proporciona la aparición de una turbidez permanente,
blanca o amarillo opalescente.
 Cianuro libre por electrodo específico de cianuro.
Se utiliza este método para concentraciones bajas de cianuro. La técnica permite medir
de manera muy precisa cantidades mínimas de cianuro (el rango de trabajo es de 0,05
a 10 mg/l) tanto en soluciones claras como en pulpas o soluciones con color. El
electrodo para medir cianuro tiene una membrana de sulfuro de plata y yoduro de plata
que reacciona con el cianuro de la solución y libera una cantidad proporcional de ión
yoduro, según la siguiente reacción:
2CN– + AgI = Ag(CN)2 – + I –
El yoduro liberado es detectado por el electrodo. Es necesario realizar una curva de
calibración de concentración de soluciones estándar contra voltaje del potenciómetro al
que está conectado el electrodo específico y, por interpolación, encontrar la
concentración correspondiente a la medida de voltaje que presenta una muestra
problema.
El electrodo detecta todo el cianuro libre y todos los complejos de cianuro que poseen
una constante de estabilidad menor que la del cianuro de plata (cianuros de zinc y de
cadmio). Algunos de los iones metálicos que forman complejos con el cianuro también
forman hidróxidos en solución.
Cianuro total por destilación.
Este método cuantifica el cianuro libre, los cianuros simples y la mayoría de los
complejos metálicos de cianuro (excepto los de oro, platino y cobalto). Existen
numerosas versiones de la técnica de destilación, con diferentes reactivos según los
complejos de cianuro que se quieran disociar.
La variante más utilizada de este método para el análisis de cianuro total es una
destilación ácida a reflujo que utiliza cloruro de magnesio (MgCl2) como catalizador
para descomponer los complejos metálicos; sin embargo, algunos complejos muy
estables como los de oro, cobalto, platino y paladio no serán disociados
completamente.
La destilación ácida genera ácido cianhídrico, que es arrastrado y absorbido en una
solución alcalina, en la cual se cuantifica el cianuro libre por alguno de los métodos
indicados anteriormente (volumetría o electrodo específico).

Actividad versión en línea

 Práctica 3. Determinación de cianuro en muestras biológicas
Versión en línea

Actividades a desarrollar:
Cada equipo deberá proponer una pregunta a resolver, la cual será transformada en un
objetivo, a partir del cual diseñará un protocolo en el cual se incluya la información
siguiente:
Problema a resolver
¿Cuáles son los métodos que existen para la identificación cualitativa y cuantitativa del
ácido cianhídrico y cual es el nivel de reproducibilidad y calidad que ofrece cada uno de
ellos?
Objetivo
Identificar cuantitativa y cualitativamente el contenido de ácido cianhídrico en muestras
biológicas, mediante herramientas sencillas y de uso común como lo es la
cromatografía, espectrometría, etc. De forma rápida y eficaz.
Antecedentes
El ácido cianhídrico es un líquido muy volátil, altamente soluble en agua y alcohol, su
densidad es reducida y la tensión de vapor que presenta es muy elevada, pero el olor a
almendras amargas, es el rasgo distintivo.
El HCN o también denominado ácido prúsico, es un tóxico utilizado desde la
antigüedad, el gas cianógeno fue utilizado como gas de guerra y en las cámaras de
gas. Los cianuros de mayor importancia toxicológica son el potásico y el sódico, pues
reaccionan fácilmente liberando ácido cianhídrico. Las principales vías de absorción
son: oral, inhalatoria y mediante mucosas. Los cianuros y sus sales que son ingeridos
se absorben en el aparato digestivo por liberación del ion CN de su sal para formar el
HCN debido al HCl presente en los jugos gástricos. A nivel celular, inactiva
metaloenzimas, siendo la más importante el citocromo oxidasa mitocondrial. La
inhibición de esta enzima produce anoxia citotóxica y el paso de la glucólisis aerobia a
anaerobia. El cianuro también inhibe la transformación del piruvato en el ciclo de Krebs,
lo que resulta en hiperproducción de lactato y acidosis metabólica severa. Por otros
mecanismos de acción, libera aminas biógenas que contribuyen con falla cardiaca y
vasoconstricción arteriolar o coronaria, que genera fallo de bomba; en el ambiente
puede ocurrir por acción del ácido carbónico presente en el aire. 1,2
Como consecuencia de su alta toxicidad y su nocividad, estas sustancias son utilizadas
con fines suicidas u homicidas, por lo tanto, es necesario llevar a cabo una
investigación de HCN para determinar si tiene valor durante la investigación. Esta
investigación puede llevarse a cabo en diferentes tipos de muestras: sangre u orina,
vísceras, líquidos biológicos, o en alimentos y medicamentos.
Previamente la determinación de ácido cianhídrico se realizó por tres medos diferentes:

 Ensayo cualitativo o inmediato. El HCN se identifica directamente en el

recipiente que lo contiene haciendo uso de sus características de pH,
temperatura y principalmente su elevada presión de vapor del medio.
 Ensayo mediato. Se separa el HCN de la muestra mediante destilación simple o
por micro difusión.
 Ensayo cuantitativo. Se realiza una valoración para obtener una sal estable para
su posterior determinación mediante espectrofotometría.

Material y Métodos (Diagrama de flujo)

-Método cromatográfico
-MATERIALES
Reactivos Material
 ácido sulfúrico,  cromatógrafo marca Agilent
 acetonitrilo, Technologies 6890,
 cianuro de sodio,  detector de nitrógeno-fósforo (npd),
 nitrato de plata  columna capilar hp Blood Alcohol
 tabletas foscam® Analysis de 7 m x 0,32 mm d.i.
 viales de 10 ml

-MÉTODO
~Preparación de la muestra

Colocar en el vial 1 ml de muestra

Adicionar 200 μl de acetonitrilo de concentración 500 mg/ L

Adicionar 200 μl de ácido sulfúrico concentrado

~Cromatografía
Configurar el horno: iniciar en 70 °C por 0,5 min; luego incrementar a razón de 35
°C/min hasta 150 °C y mantener por 4 min.

Mantener el inyector y detector a 250 ℃

Utilizar helio como gas de arrastre

Emplear split en relación 20:1 como modo de inyección

El automuestredor de volátiles tendra temperatura de incubación de 70 °C por 5

minutos, volumen de inyección 1 mL

Resultados esperados
MUESTRA Límites de detección y
cuantificación
Ácido cianhídrico Sangre 0,04 – 0.2 mg/L
Suero

Reportándose como niveles tóxicos en sangre de 0.2 mg/L y en suero de 0.5-1.0 mg/L.
Mediante la cromatografía se esperarían señales cromatográficas del ácido cianhídrico
en 2,73 min.
Mediante las curvas de calibración se esperaría una respuesta lineal entre el área
relativa y la concentración, con coeficientes de relación iguales o superiores a 0.99.

Referencias consultadas
 Servicio Nacional de Medicina Legal y Ciencias Forenses. (2017) Instructivo
para la determinación cuali-cuantitativa de cianuro en muestras biológicas
mediante reacciones colorimétricas y titulación. Recuperado en 06 de agosto de
2021 de https://www.cienciasforenses.gob.ec/wp-
content/uploads/2019/07/2_Cianuro_muestras-_biologicas.pdf
 Gianuzzi, T. & Ferrari, L. (s.f) Manual de Técnicas Analíticas en el Laboratorio de
Toxicología. Recuperado en 06 de agosto de 2021 de
https://es.slideshare.net/adnestelamartin/capitulo-4-monxido-de-carbono-y-
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 Monsalve, L., Ortiz, M. & Mateus, A. (2015) Identificación simultánea y
determinación cualitativa de ácido cianhídrico y fosfina por cromatografía de
gases con detector de nitrógeno fósforo y automuestreador Headspace (hs-gc-
npd) en fluidos biológicos. Recuperado en 06 de agosto de 2021 de 1188-Texto
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 Fernández, A. R., & Heggins, C. P. (2001). INTOXICACIÓN POR CIANURO.
Research gate. https://www.researchgate.net/profile/Aurelio-Rodriguez-
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 Guerrero-Rojas, J. J. (2013, noviembre). Cianuro: toxicidad y destrucción
Biológica. Academia.
https://www.researchgate.net/publication/258499252_Cianuro_Toxicidad_y_Dest
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 Guerrero-Rojas, J. J. (2013b, noviembre). Toxicologia de alimentos. Reseach
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 CAEM. (2011). Efectos del cianuro en la salud humana. Recuperado en 07 de
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 Guillermo Arrázola, Nuria Grané, María L. Martin, Federico Dicenta. (2013).
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