ASIGNATURA : BIOQUIMICA

CICLO : IV
SEMESTRE ACADEMICO : 2023-1
 UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERIA

BIOQUIMICA

SEMANA: 5
TEMA : IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

Docente: Mg. Mirtha Yarasca Meza

 I. INTRODUCCION
• Las proteínas son sustancias nitrogenadas de elevado peso molecular,
que están formadas por unidades llamadas aminoácidos. Estos
aminoácidos presentan en su estructura química un grupo amino (NH2) y
un grupo ácido (COOH).
• Las proteínas se forman por la unión de aminoácidos, un grupo COOH de
un aminoácido se combina con el grupo NH2 de otro aminoácido,
liberándose una molécula de agua y estableciéndose la unión NH-CO
denominada enlace peptídico.
• Las proteínas cumplen un importante papel en la fisiología del organismo
y son moléculas orgánicas con gran diversidad funcional.
II. OBJETIVO
▪ Identificar a las proteínas como moléculas componentes de la materia viva.
▪ Familiarizarse con el espectrofotómetro como instrumento para medir
concentraciones de proteínas.

III. MATERIAL DIDACTICO

• Solución de albúmina 5% • Gradillas
• solución de almidón al 1% • Reactivo de Biuret
• Alcohol etílico • Solución de Ninhidrina
• tubos de ensayo • Solución de KOH al 40%
• Mecheros
• Pipetas
• pinzas
 PROCEDIMIENTO
A) REACCIÓN DE BIURET

Esta reacción es positiva cuando la molécula contiene dos uniones peptídicas o

mas, cercanas entre si (es decir, tripéptidos en adelante). se basa en que las
uniones peptídicas CO-NH establecidas entre los aminoácidos de las proteínas,
pueden formar con el Cu++ un complejo Biuret cuprosidico en medio alcalino.

El Reactivo de Biuret es un reactivo que se Esto se evidencia por la

coloración violácea de la
emplea para la determinación de proteínas muestra.
de cadena larga y de cadena corta.
El Biuret es de gran utilidad, pues permite
Las proteínas dan color violeta, las peptonas (PM mayor 5000)
cuantificar la presencia de proteínas en
color rojo-morado. El color desarrollado se debe a la
suero, plasma, orina, entre muchas otras
formación de un complejo de coordinación con el Cu++ ( ion
muestras. cúprico )

Esto se debe a que el cobre tiene la propiedad de formar iones

complejos, especialmente entre los enlaces peptídicos.
 Hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto
CONTIENE con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O).

El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia

de proteínas, y vira a rosa cuando se combina
con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio
no participa en la reacción, pero proporciona el
medio alcalino necesario para que tenga lugar.
 B) REACCIÓN DE LA NINHINDRINA

• Esta reacción permite identificar a los compuestos alfa aminoácidos. Estos reaccionan con la
Ninhindrina y forman CO2, amoniaco y un aldehído.
• Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo libre,
reaccionan con la ninhidrina.
• La Ninhidrina es el reactivo más empleado en la detección y cuantificación de aminoácidos.
• Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una
coloración que varía de AZUL a violeta intenso.
En aquellos casos donde la prueba de BIURET es
negativa, y positiva la de Ninhidrina, indica que no
hay proteínas, pero si hay aminoácidos libres.

Disuelve 50 mg de Ninhidrina en 100ml de

butanol saturado con fosfatos

C) REACCIÓN DE MILLON
El reactivo de Millón consiste en una solución de
nitrato de mercurio (II), en solución de ácido nítrico-
nitroso, nos sirve para identificar anillos fenólicos de
tirosinas presentes. El reactivo reacciona con la
tirosina y genera un color rosado a rojo oscuro,
indicando la presencia de tirosina.
El reactivo de Millón se prepara disolviendo una parte
de mercurio (Hg) en una parte de ácido nítrico (HNO3).
De esta forma, la presencia de cantidades
relativamente altas de mercurio conduce a la formación
de Nitrato de mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en un
medio fuertemente ácido reacciona con el grupo -
OH de la tirosina produciendo una coloración roja
característica.

REACTIVO DE MILLON : Permite identificar la

presencia de tirosina en una muestra. La mezcla de
nitrito y nitrato mercúricos y de ácido nítrico (
reactivo MILLON) reaccionan con este aminoácido
,formando una sal de color rojo

La reacción da un coágulo blanco que por calentamiento forma un

coágulo color rojo carne que identifica los restos de tirosina.
D)REACCIÓN XANTOPROTEICA

Es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando las

proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas
proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos, especialmente en presencia de
tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, vira a un color anaranjado
oscuro.

Se lleva a cabo agregando a la muestra a ensayar (por ej.

clara de huevo, o leche) ácido nítrico concentrado en
caliente:

• Colocar 0,5 ml. de solución de albúmina, en

un tubo de ensayo y añadir 1 ml. de HNO3.
• Calentar el tubo y observar el color que toma
la muestra.
• Luego añadir 1 ml. de NaOH al 40% y
observar el cambio.
E) DESNATURALIZACION DE PROTEINAS

Si se somete a las proteínas a la acción de ciertos agentes que trastornan su organización, se

alteran sus propiedades físicas, químicas y biológicas naturales , y se dice que las proteínas
se desnaturalizan.
Usualmente, debido a la menor solubilidad en agua de la proteína desnaturalizada se
observa la precipitación en la forma de un sólido blanco.

Rotular 5 tubos, y a cada tubo agregar 2ml de solución de albúmina, luego

adicionar lo siguiente:
• Tubo 1: Agregar 5 gotas de HCl concentrado
• Tubo 2: Agregar 3 ml. de alcohol etílico
• Tubo 3 : Agregar 2 gotas de HNO3 ( acido
nítrico ) concentrado
• Tubo 4 : agregar 1 ml de NaOH
• Tubo 5: Calentar al mechero.
• Anotar lo observado y registrar en imágenes
Si se ensaya la albúmina del huevo frente a calor, alcohol
etílico, sales neutras (como sulfato de amonio) o a la presencia
de un ácido, se observa lo siguiente:
Cuando esto ocurre, las
proteínas pierden las
estructuras secundaria y
terciaria (y cuaternaria si
la tuviere).
COAGULACION DE
PROTEINAS
Las proteínas , debido al gran tamaño
de sus moléculas, forman con el
agua soluciones coloidales. Estas
soluciones pueden precipitar con
formación de coágulos al ser
calentadas a temperaturas superiores a
los 70ºC o al ser tratadas con
soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.
La coagulación de las proteínas es un
proceso irreversible y se debe a
su desnaturalización por los agentes
indicados, que al actuar sobre la
proteína la desordenan por la
destrucción de su estructura terciaria y
cuaternaria .
CUESTIONARIO

1. Esquematice un enlace peptídico.

2. ¿A qué se le denomina desnaturalización de las proteínas, y

porque puede ocurrir?
 BIBLIOGRAFIA :

• Resendiz, J. (2021) PROTEINA. Recuperado el 17 de octubre de 2022 de:

https://www.genome.gov/es/genetica-glorary-proteina
• Luque, V. (2012) ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS, Recuperado el 17 de octubre de 2022
de: https://www.uv.es/tunon/pdf_doc/proteinas_09.pdf
• Gallegos, R. (2018) PROTEÍNAS PEPTIDOS Y AMINOÁCIDOS. Recuperado el 17 de octubre
de 2022 de: http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/farmacognosia/wp-
content/uploads/2017/03/TP3-_PROTEÍNAS-PEP-AA-2017.pdf