UNIVERSIDAD DE SANTANDER

Aseguramiento de la Calidad

Comité de Calidad
Programa de Bacteriología y Laboratorio Clínico
Formato Guía de Versión 1.0
Laboratorio
CL-F-010 Página 1 de 6

METALES Y NO METALES

DETERMINACION DE ARSENICO EN MUESTRAS BIOLOGICAS

OBJETIVOS:

 Realizar la determinación de arsénico en muestras biológicas sospechosas de contener la

sustancia toxica
 Junto con la prueba de arsénico se realizará pruebas confirmatorias para otros metales
pesados como selenio, antimonio, bismuto y mercurio.

GENERALIDADES

La importancia actual sobre este tema reside en que la difusión de las propiedades toxicas del arsénico,
su uso causa intoxicaciones agudas e inclusive la muerte. Se debe destacar el hecho que los arsenicales
están presentes en cantidades trazas como contaminantes de suelos en mezclas con otros metales y
como contaminantes de alimentos. El arsénico es un metaloide empleado en forma de sales de color
blanco, sus principales usos son:

 Plaguicidas, medicamentos en forma arsenical, trivalente y pentavalente (amenizadas para el

tratamiento de leishmaniasis).

La dosis letal en envenenamiento agudo es muy variable:

 Para As2O3 la dosis es de 60-180 mg en adultos

 Nivel permisible es de 0.05 ppm en el aire
 En agua potable puede contaminarse por diversas razones y contener mayores cantidades que
las permisibles y provocar intoxicaciones colectivas.
 En la leche de vaca se ha comprobado la presencia de arsénico entre 32 – 60 mg/L y estos
valores han sido controlados.
 En frutales se ha utilizado los derivados inorgánicos como insecticidas tales como el arseniato de
plomo, calcio, magnesio con el objetivo de eliminar plagas.

DIAGNOSTICO:

 Determinación cualitativa y cuantitativa del toxico en: vómitos, contenido gástrico, orina, materia
fecal y sangre

La dosis letal en envenenamiento crónico:

 Dosis mínimas pero en forma repetida.

  Identificación del toxico en pelo, uñas orina, materia fecal y vomito.

La gran afinidad del arsénico por las proteínas tisulares es causa de que este sea separado rápidamente
de la sangre, por o cual la sangre no es una buena muestra salvo n casos que ha sido ingerida en una
dosis excesiva de esta sustancias.

PRUEBA DE REINSH MODIFICADA

REACTIVOS:

 Acido clorhídrico concentrado

 Cobre metálico
 Acido clorhídrico al 10 %
 Cianuro de potasio al 10 %
 Sulfito de sodio al 10 %
 Acido nítrico al 15 %
 Suspensión de yoduro cuproso.

FUNDAMENTO

Se basa en el hecho en que el cobre metálico en presencia de acido reduce el arsénico en la forma
elemental. El arsénico se deposita en el cobre como una película oscura visible.

HCL
3Cuº + 2As *** _______ 3 Cu ** + 2Asº

La forma oxidada del antimonio, mercurio, bismuto y selenio pueden ser reducidas también por cobre
metálico, en estas condiciones. Así la misma reacción constituye también una reacción de exclusión de
metales.

PROCEDIMIENTO

 Colocar 20 cc o gr de muestra en un erlenmeyer pequeño.

 Agregar 1 o varias laminas de cobre y 2 cc de Hcl concentrado.
 Calentar suavemente durante media hora
 Se debe prevenir la rápida evaporación agregando 1 cc de Hcl al 10%

RESULTADO

Están basados en os depósitos que los metales pesados hacen sobre la lamina de cobre metálico.

METAL PESADO DEPOSITO EN EL COBRE

Arsénico Color gris opaco
Selenio Color gris opaco
Bismuto Color gris opaco
Mercurio Color gris plateado
Antimonio Color gris purpurino
PRUEBAS CONFIRMATORIAS

 ARSENICO: la lámina de cobre se lava y se coloca en un tubo de ensayo, se agrega 1 cc de

KCN al 10 %, si el depósito se disuelve se confirma la presencia de arsénico en la muestra. Los
depósitos producidos por los otros metales no se disuelven.

 BISMUTO: la lámina de cobre se coloca en un tubo de ensayo y se agrega 1 cc de NaSO3 al

10% y 1 cc de HNO3 al 15 % agitar y dejar en reposo por 5 minutos. La muestra es positiva si el
depósito negro se disuelve y se reconfirma adicionando unas gotas del reactivo de quinina,
retirando previamente el espiral de cobre. Se agita a los pocos minutos y si aparece color
naranja quiere decir que la prueba es positiva para bismuto.

 MERCURIO: la lámina se coloca sobre un vidrio de reloj, se agregan unas gotas de la

suspensión de yoduro cuproso y se deja en reposo por 1 hra. La aparición de color rosa brillante
confirma la presencia de mercurio. La intensidad del color es proporcional a la cantidad de
mercurio.

 ANTIMONIO: la coloración del depósito sobre el cobre y la negatividad de las pruebas

anteriores confirman la presencia de este elemento.

Muestras utilizadas: orina, heces y contenido gástrico.

La orina es mas conveniente ya que se analiza mas rápida y fácilmente, la orina constituye la excreción
del grado de exposición al elemento o sus derivados y su determinación cuantitativa comporta un recurso
analítico obligado en el control periódico del personal expuesto.

Para autopsia: parte de riñón, hígado y bazo

1. DETERMNACION CUANTITATIVA DEL MERCURIO

FUNDAMENTO: en este método se destruye la materia orgánica por digestión húmeda, extrayendo el
mercurio en forma de complejo amarillo con la ditizona, y se valora el color producido en el rango visible
del espectrofotómetro.

REACTIVOS

 Acido sulfúrico concentrado

 Solución de clorhidrato de hidroxilamina al 20%
 Acido nítrico concentrado
 Acido clorhídrico 0.5 N
 Solución de ditizona: 10 mg / L de cloroformo
 Patrón de mercurio: en un matraz volumétrico de 1 L se disuelve 0.1353 gr de cloruro mercúrico
para reactivo con 500 cm3 de acido clorhídrico 0.5 N.
 Completando con agua destilada (25 ml = 10 um de mercurio)

PROCEDIMIENTO:

 En un matraz de cuello largo de 300 ml provisto de un condensador de reflujo por aire de unos
50 cm de longitud.
  Se ponen 5 gm o 5 cm3 de la sustancia que se va a investigar pesados o medidas con gran
exactitud.
 Se añaden 5 ml de acido sulfúrico concentrado y 15 ml de acido nítrico también concentrando
calentando con suavidad.
 Después de desaparecer los primeros humos, se calienta a fuego intenso hasta que deja de
producirse humos de acido nítrico y comienza los de SO3. si antes se carboniza el contenido se
enfría algo el digerido, se añaden 5 – 10 ml mas de acido nítrico y se continua calentando
 Se deja enfriar un poco el digerido, se añaden de 12-13 de acido clorhídrico 0.5 N y se pasa a
un embudo de decantación, con ayuda de 10 cm de agua.
 Se añaden 2 ml de solución de hidroxilamina
 En otro tubo de decantación se ponen 25 ml de la solución tipo de mercurio
 A cada embudo se le agregan 10 ml de reactivo de ditizona, agitando bien hasta extraer el
mercurio de la fase acuosa
 Después de que se separa ambas fases se recogen las soluciones cloroformicas, en tubos de
ensayo, haciéndolas pasar por algodón y papel filtro puesto en embudos ordinarios.
 Se lee la muestra problema y la solución tipo en el espectrofotómetro a 490 nm y empleando el 0
obtenido con solución de ditizona.

2. ION DE TALIO EN MUESTRAS DE MATERIAL BIOLOGICO.

GENERALIDADES

La fuente de intoxicación con este no metal es la sal en forma de sulfato de talio utilizado como
rodenticidas. Se eliminan en la orina en su mayor parte y en las materias fecales en pequeños
porcentajes, también se encuentra en raíces de cabello, siendo este un signo precoz para el diagnostico
al talio. Se vera como un pigmento de color negro que contrasta con el área circundante de la raíz. Este
pigmento se encuentra según la siguiente distribución:

 Cabello de la cabeza 95%

 Regiones pilosas del tórax y de miembros inferiores 50-60%
 Cejas y pestañas 30%

Toda pequeña cantidad en la orina, sangre o vísceras es significativa. Hay métodos cualitativos y
cuantitativos, rápidos que pueden realizarse con facilidad el primer paso debe efectuarse es la
destrucción de materia orgánica lo que es recomendable el método de cloro naciente o el sulfonitrico, sin
embargo alguna de las técnicas pueden realizarse directamente sobre la orina sin necesidad de digestión.

METODO INDIRECTO

Antes de proceder a la investigación debe someterse la muestra a un proceso de digestión en medio

acido.

REACTIVOS:

 Acido sulfúrico concentrado

 Acido nítrico concentrado
 Acido perclórico
 Yoduro de potasio al 13.5 %
 Acido acético
 Dicromato de potasio
 Hidróxido de sodio al 30%
 Cianuro de hierro y Potasio al 10%
PROCEDIMIENTO PARA LA DIGESTION

Para 100 ml de orina, agregar 10 ml de los siguientes ácidos:

 H2SO4
 HNO3
 HClO4
 Se calienta suavemente el principio y luego a fuego fuerte hasta realizar una digestión completa,
reducción del volumen a 50 ml. Este proceso debe llevarse a cabo en la vitrina para gases.
ENFRIAR

PRUEBAS PARA LA IDENTIFICACION

Para 5 ml de orina digerida:

 Se agregan 4 ml de solución de Kl al 10 % la formación de color blanco indica presencia de
talio.

Para 5 ml de orina digerida previamente acidificada con acido acético:

 Se agregan 5 ml de dicromato de potasio la formación de un precipitado amarillo indica
prueba positiva. Esta reacción tiene una sensibilidad de 100 um.
Para 5 ml de orina digerida previamente alcalinizada con NaOH
 Agregar 5 ml de K4Fe (CN)6 al 10 % la formación de un precipitado color café indica
presencia de talio.

TENER EN CUENTA: para observar más claramente los precipitados es aconsejable centrifugar.

METODOS DIRECTOS

Reacción con bismuto de sodio: puede llevarse a cabo directamente sobre la orina sin necesidad de
hacer la digestión acida.

REACTIVOS

 Solución de bismutato de sodio al 0.4 % en acido nítrico al 20%

 Solución de yoduro de sodio al 10%

PROCEDIMIENTO

 Tomar 2 ml de la orina en un tubo de ensayo

 Agregar 2 ml de la solución de bismuto y 2 ml de solución de yoduro. La aparición de un
precipitado color ladrillo rojizo indica positividad en la prueba.

Inconvenientes: este mismo resultado puede darlo el plomo, arsénico y mercurio por lo demás la
sensibilidad de este método es aceptable ya que detecta hasta 1 mg sobre porcentaje.

3. ENSAYO CON EL VERDE BRILLANTE

REACTIVOS

 Acido clorhídrico 6 N
 Agua oxigenada de 25 volúmenes
  Tolueno
 Verde brillante en solución alcohólica al 1 %

PROCEDIMIENTO

 Colocar en tubo de ensayo 4 ml de orina

 4 ml de HCL 6N
 2.5 de agua oxigenada
 Agitar y reposar 5 minutos.
 Añadir 0.3 ml de solución alcohólica al 1% de verde brillante
 4 ml de tolueno
 Agitar fuerte y centrifugar si la capa de tolueno se colorea de verde azul la prueba se considera
positiva para talio

Inconvenientes: la presencia de antimonio y hierro, acido acético, salicílico, sulfamidas y yoduros

interfieren con la prueba analítica.