TECNICASE ANALISIS MICROBIOLOGICOS

Análisis microbiológicos

Los análisis microbiológicos consisten en una inspección de alimentos o sustancias por

medio de pruebas que permiten detectar si se presentan o no elementos patógenos.

De acuerdo con la cantidad de agentes patógenos encontrados y el grado de

contaminación que tengan los alimentos o sustancias analizadas, se puede determinar
si es apto o no para su posterior procesamiento y consumo en humanos o animales.

Técnicas de análisis microbiológicos

MÉTODO DE PLACA FLUIDA (TÉCNICA DE INCORPORACIÓN EN PLACA)

Técnica consistente en añadir en una placa estéril de 90 mm de diámetro, de 0,1 a 1 ml

de la muestra objeto de ensayo, sobre la que se añaden de unos 15 a 20 ml del medio
de cultivo específico para la analítica requerida.

MÉTODO DE PLACA DIFUSA (TÉCNICA DE REPARTO DE PLACAS)

Técnica consistente en sembrar la cantidad requerida de muestra o de una dilución de

la misma, sobre una placa de 90 mm de diámetro, que, a diferencia del caso anterior,
ya contiene el medio específico, lo que evita el choque de calor, e implica que todas las
colonias permanecen en la superficie del agar.

MÉTODO DE FILTRACIÓN EN MEMBRANA

Técnica consistente en concentrar un gran volumen de agua problema, haciéndolo

pasar a través de un filtro de porosidad dependiente del microorganismo que se desee
buscar, se suele llevar a cabo para muestras de bajo contenido bacteriológico, donde
todos los microorganismos quedaran retenidos en el filtro, por eso a estas técnicas se
les suele llamara de forma coloquial técnicas de concentración pues retenemos todos
los microorganismos en el filtro.
Técnicas para identificación de microorganismos

 La técnica del PCR consiste en la amplificación del gen ribosomal LSU r-DNA, en el caso
de mohos y levaduras, y en la amplificación del gen mitocondrial 16S, en el caso de
bacterias.
 La técnica del MALDI-TOF utiliza la espectometría de masas en el diagnóstico
microbiológico, permitiendo la identificación de microorganismos mediante el análisis
de proteínas ribosómicas, tanto de mohos, levaduras como bacterias.

Análisis microbiológicos del agua

Se puede definir el análisis microbiológico como el conjunto de operaciones encaminadas a

determinar los microorganismos presentes en una muestra problema de AGUA.
El interés se centra en los microorganismos patógenos, que son los diferentes tipos de
bacterias, virus, protozoos y otros organismos, que transmiten enfermedades.

Al hacer el análisis de las aguas no buscamos tal o cual microorganismo patógeno, es decir, no
aislamos o identificamos los microorganismos patógenos del agua, sino que averiguamos si
esta tiene o no contaminación de origen fecal.

Métodos de análisis:

1. Bacterias coliformes y Escherichia coli ISO 9308-1:2000.

2. Enterococos ISO 7899-2:2001.

3. Clostridium perfringens (incluidas las esporas)

4. Enumeración de microorganismos cultivables ISO 6222:1999.

Toma de muestras para el análisis de agua

Las muestras que se tomarán para el análisis deben ser representativas para poder determinar
así su calidad microbiológica. Hay normas para la toma de muestras de aguas según sus
distintas procedencias

 Grifos
 Pozos
 Depósitos
 Lagos
 Ríos
 Manantiales

Para su recogida debe utilizarse frascos estériles y debe recolectarse cantidades comprendidas
entre 500 y 1000 ml.

Análisis microbiológico de los alimentos

El análisis nos permite conocer el número total de microorganismos presentes en el

alimento. Este número no guarda relación con el de microorganismos patógenos por lo
que no puede usarse como índice de su presencia y sólo debe considerarse un
indicador de las características higiénicas generales del alimento.
El primer método que se debe utilizar en el análisis de los alimentos es el
de principios de garantía de calidad microbiológica.

¿Cuáles son los fundamentos de los procedimiento analíticos?

 Heterogeneidad de la presencia de microorganismos en los alimentos.

Consiste en la evaluación de la muestra necesaria para evitar la distorsión

producida por los microorganismo que se encuentran en diferentes partes de las
superficies y en segundo lugar,  la determinación del modo óptimo de remoción del
micoorganismo de la muestra o lugar de muestreo.

 Transporte de muestras:
  Debemos evitar que se produzca, por un lado, la multiplicación de los
microorganismos presentes y por otro, la inactivación de algún microorganismo.

 Confianza en los procedimientos. 

Normalmente es necesario detectar bacterias que suponen entre 10-4 y 10-7 de la

flora normal del alimento, flora ésta inocua.

 Evaluación sistemática de los medios de cultivo. 

Dada la variabilidad debida a pequeños errores en la preparación de los medios de

cultivo, tanto los generales como los selectivos

Técnicas de diagnostico molecular

El diagnóstico molecular es un término general que engloba un conjunto de técnicas de

biología molecular empleadas para la identificación y análisis de marcadores
biológicos en el genoma y proteoma.

 CAPTURA DE HÍBRIDOS
La captura de Híbridos consiste en la amplificación de una señal molecular y su
posterior visualización por medio de quimioluminiscencia (una reacción química que
produce luz).

 REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) es una técnica de
biología molecular que en pocas horas permite la producción de millones de copias a
partir de una cantidad mínima de ADN o ARN extraída de una muestra.

 PCR MULTIPLEX
La PCR Multipex consiste en realizar simultáneamente en una sola reacción la
detección, mediante PCR, de varias distintas secuencias de ADN. 

 HIBRIDACIÓN REVERSA
La hibridación es la unión complementaria de ácidos nucléicos (ADN o ARN). Las
técnicas de hibridación se utilizan a menudo para detectar una molécula diana (la que
nos interesa conocer) partiendo de una sonda complementaria a ella.

Tecnología del desarrollo inmunológico

La Inmunología se encarga del estudio del sistema inmune, el cual abarca los
mecanismos de defensa para combatir a los microorganismos. Estos mecanismos se
encargan de discriminar lo que es propio (nuestros tejidos) y lo que no lo es
(microorganismos y otros elementos extraños).
Estudiar las enfermedades inmunológicas es algo complicado y que precisa de
exámenes específicos para un correcto diagnóstico.