UNIVERSIDAD AUTONOMA DEL ESTADO DE HIDALGO.

CURSO|12w
INFECTOLOGIA.
JUNIO-DICIEMBRE.
7TO. SEMESTRE.
UNIDAD 3.
METODOS DE DIAGNÓSTICO EN INFECTOLOGIA
DR. JOSE G. JUÁREZ TORRES.
NEFRO-PEDIATRA.
2022.
 Diagnóstico de laboratorio de
enfermedades infecciosas

Para diagnosticar una infección por medio de

técnicas de laboratorio es necesario
demostrar de manera directa o indirecta la
presencia de virus, bacterias, hongos y
parásitos en los tejidos, líquidos o excreciones
del hospedador.
 METODOS DE DETECCIÓN.

La revaloración de los métodos utilizados en el

laboratorio de microbiología clínica ha
permitido idear formas de reconocer
patógenos mediante sistemas de detección no
visual de señales biológicas. Una señal
biológica es un material que puede
diferenciarse las veces que sea necesario de
otras sustancias presentes en el mismo
entorno físico
 Sistema de Detección.
Entre los sistemas de detección comunes se hallan la
inmunofluorescencia; la quimioluminiscencia con sondas
de DNA/RNA; la identificación (por medio de ionización de
llama) de ácidos grasos de cadena corta o larga, y la
detección de uso de sustratos o la formación de productos
terminales con base en cambios colorimétricos, actividad
de enzimas en la forma de cambios en la absorbencia
lumínica, cambios de la turbidez como un índice de
crecimiento o proliferación, efectos citopáticos en líneas
celulares y aglutinación de partículas como una medida de
la presencia del antígeno.

Infectologia Clinica. Kumate-Gutierez Cap 8, 71 Edic 17

 Amplificación específica más rápida de señales
Biológicas.
La amplificación específica más rápida de señales
biológicas se logra con técnicas como la reacción en
cadena de la polimerasa (PCR, polymerase chain reaction);
la reacción en cadena de la ligasa (LCR, ligase chain
reaction), y la amplificación mediada por transcripción
(TMA, transcription-mediated amplification), técnicas
dirigidas de modo específico a DNA y RNA del patógeno;
enzimoinmunoanálisis (EIA, enzyme immunossays) para
antígenos y anticuerpos.

Infectología Clinica. Kumate-Gutierez Cap. 8, 72 Edic 17

 DETECCIÓN DIRECTA

La detección directa se refiere a la identificación de

patógenos sin el uso de cultivos.
MICROSCOPIA Y TINCIÓN
El campo de la microbiología ha sido definido en gran
medida por el desarrollo y uso del microscopio. El
estudio de muestras por métodos de ese tipo permite
contar a muy breve plazo con información diagnóstica
útil.
Es posible percibir con mayor claridad los
microorganismos gracias a las técnicas de tinción.
 DETECCIÓN DIRECTA
El método más sencillo de valoración microscópica es
la preparación húmeda, que se emplea por ejemplo
para estudiar el líquido cefalorraquídeo (LCR) en busca
de Cryptococcus neoformans, con tinta china que sirva
como trasfondo contra el cual se delinean hongos con
grandes cápsulas. Los preparados húmedos con
iluminación de campo oscuro también se utilizan para
detectar espiroquetas obtenidas de muestras de
lesiones en genitales e identificar Borrelia o Leptospira
en la sangre.
 Técnica de Gram.
Por medio de la tinción de Gram se diferencia
entre microorganismos con paredes de
peptidoglucanos gruesas (grampositivos) y los que
tienen dichas paredes pero delgadas y membrana
externa que se disuelven con alcohol o acetona
(gramnegativos). La morfología y las
características de la tinción de Gram suelen usarse
para clasificar en grupos a microorganismos
teñidos, como estreptococos, estafilococos y
clostridios
 Técnica de Gram.

La tinción de Gram es en particular útil para el

estudio de esputo en busca de
polimorfonucleares (PMN) y bacterias. Las
muestras de esputo obtenidas de sujetos con
buena función inmunitaria que tienen ≥25
polimorfonucleares y <10 células epiteliales por
campo .
 Tinción de Gram.

El estudio de muestras de líquidos

cefalorraquídeo, sinovial, pleural o peritoneal
mediante tinción de Gram tiene utilidad para
identificar la presencia de bacterias, PMN o
ambos. Su sensibilidad hace posible detectar
incluso >10(4) bacterias/mL.
 Tipos de tinciones.

• Tinción para acidorresistentes

• Este tipo de tinción identifica bacterias
acidorresistentes (AFB, acid-fast
bacteria; micobacterias) por la retención
de colorante carbol fucsina después de
la disolución de un solvente
ácido/orgánico
 Tinciones con fluorocromo
Las tinciones de esta índole, como la que utiliza naranja de
acridina, permiten identificar leucocitos, levaduras y bacterias
en líquidos corporales. Los colorantes para cápsulas, flagelos y
esporas se emplean para identificar o demostrar estructuras
características.

Tinciones inmunofluorescentes.
La técnica directa con anticuerpos inmunofluorescentes usa anticuerpos
acoplados a un compuesto fluorescente (como la fluoresceína) dirigidos
contra un blanco antigénico específico para visualizar los microorganismos. Si
se analizan las muestras en condiciones apropiadas, el compuesto de
fluoresceína absorbe luz ultravioleta y la refleja con una longitud de onda más
alta, que es visible para el ojo humano. En la técnica indirecta de anticuerpos
inmunofluorescentes, un anticuerpo sin marcar (objetivo o blanco) se une a
un antígeno específico.
DETECCIÓN MACROSCÓPICA DE ANTÍGENO

Las técnicas de aglutinación con látex y las de

enzimoinmunoanálisis son rápidas y baratas para
identificar microorganismos, toxinas
extracelulares y agentes virales por medio de
antígenos proteínicos y polisacáridos.
 DETECCIÓN DE PATÓGENOS POR MEDIO DE CULTIVO

• OBTENCIÓN Y TRANSPORTE DE LA MUESTRA:

• Para el cultivo de bacterias, hongos y virus
patógenos es necesario colocar la muestra
idónea en un medio adecuado para que
prolifere.
• Por lo general, la identificación de un
patógeno específico depende de la obtención
y el proceso de transporte.
 HEMOCULTIVO
. La detección de patógenos microbianos en la sangre
es difícil porque el número de microorganismos
presentes en la muestra es a menudo demasiado bajo
y la capacidad e integridad del patógeno para
replicarse puede alterarse por los mecanismos de
defensa humoral o fármacos antibióticos.
Los sistemas de hemocultivo automatizados detectan
la producción de gas (sobre todo CO2) por bacterias o
levaduras en proliferación en el caldo de una botella
de hemocultivo.
 MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN.

Una vez aisladas las bacterias, se puede determinar la

especie a que pertenecen por medio de las características
detectables con facilidad después de su proliferación en
medios de agar (tamaño y color de la colonia, reacciones
hemolíticas, olor, aspecto microscópico), pero para
identificarlas de manera definitiva se necesitan más
estudios.
Los métodos de identificación incluyen la fenotipificación
bioquímica regular, que es aún el más común, y otros más
complejos como la espectrometría de masas, la
cromatografía de gas y los estudios de ácido nucleico.
 DETECCIÓN DE PATÓGENOS POR MÉTODOS
SEROLÓGICOS.

La medición de anticuerpos séricos proporciona un

marcador indirecto de infección previa o actual con un
virus u otro patógeno específicos.

La determinación de las concentraciones de anticuerpos

como medida de la inmunidad actual es importante en el
caso de agentes virales para los cuales existen vacunas,
como el virus de la rubeola y el virus de la varicela-zóster;
los análisis para este propósito utilizan casi siempre una o
dos diluciones de suero para determinaciones cualitativas
de las concentraciones protectoras de anticuerpos.
 DETECCIÓN MACROSCÓPICA DE ANTÍGENO
Las técnicas de aglutinación con látex y las de
enzimoinmunoanálisis son rápidas y baratas para
identificar microorganismos, toxinas extracelulares y
agentes virales por medio de antígenos proteínicos y
polisacáridos.
Dichos procedimientos se pueden realizar de manera
directa en muestras clínicas o después de la proliferación
de los microorganismos en placas de agar o cultivos para
virus. Se utilizan anticuerpos unidos a un portador (como
las partículas de látex o una enzima) para detectar las
reacciones de unión de antígenos-anticuerpo.
 REACTANTES DE FASE AGUDA.

Son proteínas especificas producidas en el

hígado o secretadas por leucocitos ante
infecciones, traumatismos e inflamación .

El estimulo procede de citocinas como : IL-1, 3,

6 o FNT alfa •
 REACTANTES DE FASE AGUDA.

EL DAÑO O INFECCIÓN DE UN TEJIDO U ORGANO

LLEVA A UNA RESPUESTA INFLAMATORIA LOCAL.
LAS CITOCINAS LIBERADAS EN EL SITIO DE
INFLAMACIÓN, PASAN O TIENEN ACCESO A LA
CIRCULACIÓN SANGUÍNEA Y SON TRANSPORTADAS
HACIA EL HÍGADO EN DONDE ACTUÁN SOBRE LOS
HEPATOCITOS, DONDE LE HÍGADO RESPONDE A LA
SEÑAL DE LAS CITOCINAS CON UN DISPARO EN LA
PRODUCCIÓN DE SINTESIS DE PROTEINAS DE FASE
AGUDA.
 . VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR
(VSG)
Es uno de los reactantes de fase aguda que indica la
presencia y la intensidad de un proceso inflamatorio.
Mide indirectamente la concentración de proteínas en
plasma. •
Se altera cuando cambia la proporción entre
albumina y globulinas.
• VALORES NORMALES
• Hombres : 0-10 mm • Mujeres : 0-20 mm
-Aumenta con la edad, menstruación, embarazo,
lactancia.
 PROTEINA C REACTIVA

El análisis de sangre de proteína C reactiva (PCR) se utiliza para

identificar inflamaciones e infecciones del organismo.
Poco después del inicio de una infección o inflamación, el
hígado libera la proteína C reactiva en la sangre.

La proteína C reactiva (PCR) es producida por el hígado.

El nivel de PCR se eleva cuando hay inflamación en todo el
cuerpo. ... Los niveles de reaccionantes de la fase aguda
responden a las proteínas inflamatorias denominadas citocinas.
SE ELEVA ALAS TRES HORAS.
VALOR NORMAL < 10 MGRS/DL.
 PROCALCITONINA.

SE ENCUENTRAN ELAS CELULAS C DE LA TIROIDES.

MINIMA CIONCENTRACION EN SANGRE 0.5 ng/ml.
ESPECIFICO PARA INFECCIONES BACTERIANAS.
SE ADELANTA SU APARICION 4 A 6 HRS ANTES QUE LA
PROTEINA C REACTIVA.
MARCADOR PREVIO ENTRE 6 A 12 HRS DE UNA
SEPSIS.
 VALORES DE PROCALCITONINA.

-O.5 A 2 ng/dl : infecciones víricas o bacterianas

localizadas.

-2-10 ng/dl: Infección bacteriana sistémica.

-> 10 ng/dl : Choque Séptico y riesgo de falla

Multiorgánica
Utilidad de la biometría hemática en la práctica
clínica
La Biometría Hemática.
(Citometría hemática, citología hemática, hemograma,
conteo sanguíneo completo) es un estudio de laboratorio
que mide las cantidades y características
(tamaño, forma y volumen) de los tres tipos de cuerpos
que normalmente se encuentran en la sangre, que en
orden decreciente de tamaño son:
1. Leucocitos (glóbulos blancos, serie blanca, fórmula
blanca).
2. Eritrocitos (glóbulos rojos, serie roja, fórmula roja).
3. Plaquetas (trombocitos).
Utilidad de la biometría hemática en la práctica
clínica
Aumento en el recuento absoluto de
neutrófilos (neutrófilos >8.000/ml), se observa
con mayor frecuencia en procesos infecciosos
bacterianos, puede acompañarse de aumento
en la sangre periférica de formas menos
maduras de leucocitos, como baciliformes y
mielocitos, hallazgo más conocido como
desviación a izquierda.
( infecciones bacterianas agudas.)
PARA REALIZAR UNA BUENA INTERPRETACIÓN
DE LOS RESULTADOS TOMAR EN CUENTA:
1.-AGENTE ETIOLÓGICO AISLADO O REPORTADO, SI ES
PATÓGENO O FLORA NORMAL.
2.-ASPECTOS CLÍNICOS.
3.-EPIDEMIOLÓGICOS.
4.- FACTORES PREDISPONENTES.
5.-ESTADO INMUNOLOGICO DEL PACIENTE.
6.- EDAD DEL PACIENTE.
7.-ENFERMEDADES DE BASE.
8.-ESTADO FISIOLOGICO.
TRIÁNGULO DE LA INFECCIÓN.
Interacción Huésped Bacteria
Concepto Dinámico