UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIA QUÍMICAS

CARRERA: QUÍMICA Y FARMACIA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA II
Nombre del estudiante: Nayeli Angelica Chain Tumbaco. Semestre: Sexto

Informe # 4 GRUPO: 3

TEMA: DETERMINACIÓN DE AEROBIOS TOTALES

OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA DE LABORATORIO:

1. Confirmar la presencia de este microorganismo que puede ser agente causal de intoxicaciones e
infecciones.
2. Determinar si un alimento o ingrediente de los mismos, es fuente potencial de este microorganismo.
3. Demostrar la contaminación pos proceso, la cual es usualmente debida a contacto humano o con
superficies inadecuadamente sanitizadas.
MARCO TEÓRICO
Son todas aquellas bacterias aerobias o anaerobias facultativas, mesófilas o psicrófilas capaces de crecer en agar
nutritivo. Se investigan por el método de recuento en placa con siembra en profundidad, que se basa en contar el
número de colonias desarrolladas en una placa de medio de cultivo sólido (Agar para recuento en placa o PCA),
donde se ha sembrado un volumen conocido de la solución madre o sus diluciones (1 ml) incubadas a 37 °C
durante 24 horas. [ CITATION Lat15 \l 3082 ]
Se agrupan en dos géneros importantes: Bacillus y Sporolactobacillus formadores de endoesporas. Las especies
encontradas en los alimentos son generalmente extensas y no poseen un habitad definido y en general no
provocan enfermedades en el ser humano. Son utilizados como indicadores de la calidad del procesamiento.
(Salgado, 2016)
En este grupo se incluyen todos los microorganismos, capaces de
desarrollar en presencia de oxígeno a una temperatura comprendida
entre 20°C y 45°C con una óptima entre 30ºC y 40ºC.
El recuento de microorganismos aerobios mesófilos, en condiciones
establecidas, estima la microflora total sin especificar tipos de
microorganismos. El conteo sirve para calcular la cantidad de
microorganismos por gramo o por mililitro de alimento.
Refleja la calidad sanitaria de los productos analizados, indicando
además de las condiciones higiénicas de la materia prima, la forma
como fueron manipulados durante su elaboración. Un recuento bajo de
aerobios mesófilos no implica o no asegura la ausencia de patógenos o sus toxinas, de la misma manera un
recuento elevado no significa presencia de flora patógena. Ahora bien, salvo en alimentos obtenidos por
fermentación, no son recomendables recuentos elevados.
Un recuento elevado puede significar:
 Excesiva contaminación de la materia prima.
 Deficiente manipulación durante el proceso de elaboración.
 La posibilidad de que existan patógenos, pues estos son mesófilos.
 La inmediata alteración del producto.
En el uso o la interpretación del recuento de microorganismo aerobios mesófilos hay ciertos factores que deben
ser tenidos en cuenta:
Este recuento es sólo de microorganismos vivos.
 La utilidad del indicador depende de la historia del producto y el momento de la toma de muestra. En
alimentos perecederos manipulados correctamente pueden desarrollar recuentos elevados y perder
calidad si son almacenados por un período de tiempo prolongado. En este caso, el recuento no se
encontraría elevado por la condición de higiene del producto, sino por la vida útil del mismo.
 Los procedimientos que sufre el alimento en su elaboración, por ejemplo, un proceso térmico, pueden
enmascarar productos con altos recuentos o condiciones deficientes de higiene. Además, el
almacenamiento prolongado en congelación o con pH bajo puede producir una disminución del
recuento.
 El recuento de mesófilos nos indica las condiciones higiénico-sanitarias de algunos alimentos, pero no
tiene significado sanitario. (Díaz et al., 2017)

Hay dos métodos para la cuantificación de aerobios mesófilos totales: el método del número más probable
(NMP) y el método del filtro de membrana (MF). En el recuento de microorganismos en alimentos, encontrarás
un tercer método, basado en la inoculación de diluciones de alimentos. La habitual escasa concentración de
microorganismos en agua impide la utilización directa de diluciones del agua para su análisis.
El medio de cultivo para el recuento de mesófilos totales en ambos casos es peptona-extracto de levadura-
glucosa y agar. (Díaz et al., 2017)

REACTIVOS
 Medio de cultivo: PCA (Plate Count Agar)
 Diluyente: agua peptonada al 0.1%
 Agua Destilada
MATERIALES
 Pipetas graduadas estériles de 1 mL con tapón de algodón (se debe utilizar una pipeta para cada dilución)
o pipetas automáticas
 Pipetas Pasteur estériles
 Pipetas graduadas estériles de 10 mL con tapón de algodón (en caso de que la muestra sea líquida.)
 Propipeta.
 Varillas de vidrio de 3.5 mm de diámetro aproximadamente y 20 cm. de largo, dobladas en ángulo recto
(forma de “L”), estériles (se debe utilizar una por dilución).
 Utensilios estériles para manipular las muestras: cuchillos, cucharas, pinzas, tijeras, espátulas y
separador de huevo.
 Vaso de licuadora estéril o Bolsa para Stomacher
 Motor para licuadora o Stomacher
 Asa bacteriológica
 Portaobjetos
EQUIPOS
 Balanza gramera
 Horno para esterilizar material de vidrio.
 Autoclave
 Baño de agua a ebullición
 Incubadora a 35 ± 2°C
ACTIVIDADES / TÉCNICA OPERATORIA POR DESARROLLAR O PROCEDIMIENTO
1. Preparar la muestra de alimento traída según su tipo, si es líquido hay que homogenizar, si es sólido hay
que licuar o triturar la mezcla por trituración en vaso esterilizado de licuadora a una velocidad
aproximada de 14.000 rpm y en un tiempo medio de 60-90 segundos.
2. Luego preparamos las diluciones correspondientes, generalmente hacemos 6
3. Luego de hacer las diluciones, y de haber agregado los inóculos, pasamos a agregar a cada placa el agar
PCA, este debe estar a 45 – 46 ºC (10 a 15 mL. por placa).
4. Luego hacemos la mezcla (agar + inóculo).
5. La mezcla se realiza de la siguiente. Manera: hacer rotaciones 5 veces sentido horario, 5 veces de abajo
arriba, 5 veces antihorario y 5 veces derecha e izquierda.
6. Luego esperamos que solidifique el medio y luego incubamos a 29 – 31 ºC por 24h (dejamos una placa
control).
7. Realizamos las lecturas a las 24 y 48 h.
8. Se puede realizar un cómputo de recuento estándar en placa o computo estimado de recuento estándar en
placa.
9. Hay que elegir placas que tengan de 30 a 300 colonias.
RESULTADOS OBTENIDOS
Los resultados obtenidos, serán de acuerdo con la calidad microbiológica de la muestra
CONCLUSIONES
La presencia de un número elevado de bacterias aerobias mesófilas que crecen bien a temperatura corporal o
próxima a ella, significa que pueden haberse dado condiciones favorables a la multiplicación de los
microorganismos patógenos de origen humano o animal. Recuentos altos en alimentos estables a menudo
indican materias primas contaminadas o tratamientos no satisfactorios desde el punto de vista sanitario. El
recuento de mesófilos, por lo tanto, nos indica las condiciones de salubridad de algunos alimentos.
RECOMENDACIONES
 Trabajar en condiciones de asepsia.
 Todo el material para utilizarse en la determinación debe estar perfectamente limpio y estéril.
 Usar los equipos de bioseguridad para evitar algún accidente.
 El área de trabajo debe estar constituida por una mesa nivelada, de superficie amplia, limpia,
desinfectada, bien iluminada, situada en una sala de aire limpio, libre de polvo y corrientes de aire.
 La carga microbiana del aire debe ser controlada durante el ensayo y, para una exposición del medio de
cultivo a él por 15 min, no debe exceder de 15ufc/placa; de superarse este valor los ensayos deben ser
anulados.

BIBLIOGRAFÍA
Díaz, A., Barrio, M., Darré, M., López, M., Cofre, M., Condorí, M., Lazarte, D., Trevisán, V., Peirano, C., Del
Bó, C., Cañate, A., & Alcaide, C. (2017). Análisis Microbiológico De Los Alimentos Microorganismos
Indicadores. Anmat, 3, 1–14.
http://www.anmat.gov.ar/renaloa/docs/analisis_microbiologico_de_los_alimentos_vol_iii.pdf

Latam. (15 de Mayo de 2015). Lacteoslatam. Obtenido de https://www.lacteoslatam.com/inocuidad/53-

salud/2499-%C2%BFque-son-los-aerobios-mesofilos.html
Salgado, V. (2016). Análisis de mesófilos aerobios, mohos y levaduras, coliformes totales y Salmonellaspp. en
cuatro ingredientes utilizados en la planta de lácteos de Zamora. Análisis de Mesófilos Aerobios, Mohos y
Levaduras, Coliformes Totales y Salmonellaspp. En Cuatro Ingredientes Utilizados En La Planta de
Lácteos de Zamora, 9. https://silo.tips/download/victor-ramiro-salgado-zeballos-zamorano-carrera-de-
agroindustria