Técnicas de

recuento de
microorganismos

Belén Bautista Ramos

ENMI 1º LACC
ÍNDICE
1. Introducción
2. Técnicas de recuento directo
3. Técnicas de recuento indirecto
4. Legislación de recuento de microorganismos en alimentos y aguas
5. Bibliografía
INTRODUCCIÓN
INTRODUCCIÓN
El análisis del recuento microbiano es esencial para
El recuento de microorganismos permite
asegurar la calidad y la eficacia de alimentos o
determinar la presencia y la cantidad de
aguas.
microorganismos viables en un medio de cultivo.
Las técnicas de recuento incluyen pruebas de
Es de vital importancia en microorganismos
recuento total de microorganismos aerobios,
patógenos, durante la producción y almacenamiento
recuento de levaduras y mohos, detección de
de los alimentos, por ejemplo, ya que el número de
patógenos específicos.
microorganismos presente en alimentos o
medicamentos puede ser beneficioso o perjudicial.
INTRODUCCIÓN
Existen diversos métodos de cuantificación de
microorganismos que van a depender de la industria
que los requiera:

● Métodos directos
○ Recuento en placa
○ Recuento por filtración
○ Método de número más probable (NMP)
○ Recuento en microscopio
● Métodos indirectos
○ Espectrofotometría
○ Actividad metabólica
○ Peso seco
TÉCNICAS DE RECUENTO
DIRECTO
Recuento en placa
El recuento en placa es uno de los métodos más
utilizados para determinar cuál es el número de
microorganismos viables en un medio líquido.

Cuando se realice el conteo hay que tener en cuenta

que cada bacteria va a dar lugar a una colonia.
Solamente contaremos aquellas placas en las cuales el
número de colonias se encuentre comprendido entre
30-300.

Esta técnica consiste en realizar diluciones seriadas

1:10 y extender 100 µl de cada dilución en una placa.
Las placas se incuban hasta que las colonias son
apreciables para su recuento.

Este método tiene la ventaja de tener un buen

límite de detección, sin embargo consume
mucho tiempo durante los plaqueos.
Recuento por filtración
El recuento por filtración consiste en hacer pasar un
volumen determinado de una muestra líquida a través
de un filtro de membrana microporosa en un equipo de
filtración, en cuya superficie quedarán retenidos los
microorganismos.

El filtro se coloca sobre una placa de Petri con el medio

de cultivo apropiado y se incuba durante un
tiempo/temperatura adecuados según el tipo de
microorganismo. Las bacterias formarán colonias sobre
la superficie de los filtros.

Se utiliza cuando el microorganismo está en bajas

concentraciones en la muestra y se necesita mucho
volumen de muestra.

Este método tiene la ventaja de ser más

representativo, obtención de resultados en
menos tiempo, se pueden conservar los filtros
durante más tiempo.
Método del N.M.P.
El método del número más probable (N.M.P.)
también llamada técnica de dilución en tubo, está
basado en una estimación estadística de la densidad
microbiana presente.

Esta técnica consiste en la inoculación de una

muestra en tubos que contienen un medio de cultivo
líquido selectivo. El objetivo de esta técnica es saber
si la muestra presenta algún tipo de contaminación
bacteriana

Este método tiene la ventaja de poder

aplicarse para recuento de coliformes,
coliformes fecales y de cepas gasógenas
(aerógenas) de Escherichia coli. Sin embargo,
no sirve para aislar ni contar serotipos de E.
coli asociados a enfermedades humanas,
Recuento en microscopio
El recuento en microscopio se basa en contar la
superficie de un cuadrado de 1 cm de lado dibujado
en un portaobjetos en el que hemos depositado 0,1
mL de muestra en una cámara de recuento.

Se cuenta el mayor número de campos posible y

hacer una media teniendo en cuenta la cantidad
añadida y el área del cuadrado.

Este método tiene la ventaja de que la

muestra puede utilizarse tal cual o pueden
realizarse diluciones.
TÉCNICAS DE RECUENTO
INDIRECTO
Espectrofotometría
La espectrofotometría consiste en una técnica en la
cual se calcula la turbidez, que estará directamente
relacionada con la cantidad de células presentes en la
muestra.

Se suele expresar en porcentaje de transmitancia,

como absorbancia o como densidad óptica.

Se calcula la concentración de una muestra en

función de la cantidad de luz que absorbe o que emite
cuando la muestra es atravesada por un haz de luz.

Con los datos de absorbancia podemos proponer una

correlación entre absorbancia y el recuento hecho en
placa.

Este método tiene la ventaja de ahorrarnos

realizar diluciones
Actividad metabólica
La actividad metabólica se basa en determinar
la cantidad de microorganismos presentes en
función de alguno de los productos que producen
en el metabolismo bacteriano como pueden ser
ácido, CO2, consumo de oxígeno,etc.
Este método tiene la ventaja además de
ser rápido, nos permite contabilizar
colonias no visibles al ojo humano.
Peso seco
El peso seco se utiliza cuando lo que queremos
hacer es la determinación de una masa
bacteriana de formas filamentosas.
Este método tiene la ventaja de poder
usarse con mohos filamentosos cuyo
final celular no es visible al ojo humano
LEGISLACIÓN DE RECUENTO
DE MICROORGANISMOS EN
ALIMENTOS Y AGUA
La ley que legisla el recuento de microorganismos en alimentos y agua es la ISO
11133:2014.

Esta norma es obligatoria para todos los laboratorios acreditados que realizan
análisis microbiológicos de productos destinados al consumo humano o animal o del
agua utilizando medios de cultivo.

La ISO 11133:2014 contiene los procedimientos, así como las responsabilidades de

los laboratorios y de los fabricantes y proveedores de medios de cultivo con
respecto a la preparación, la producción y el almacenamiento de los medios, así
como de su rendimiento analítico.
BIBLIOGRAFÍA
- Davislab (2023), Análisis Microbiológico (Recuento Microbiano) en Productos Farmacopéicos: Importancia y Aplicaciones.
Consultado el 12/03/24 en
https://www.davislab.cl/es/blog/analisis-microbiologico-recuento-microbiano-en-productos-farmacopeicos-importa
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- Copisa, Métodos de cuantificación de microorganismos. Consultado el 12/03/24 en
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- Agrolab (2012), Interpretación análisis de agua - Microbiología. Consultado el 12/03/24 en
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BIBLIOGRAFÍA

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- Universidad de Granada. Consultado el 12/03/24 en
https://www.ugr.es/~pomif/pom-ali/ma-i/ma-i-3-nmp_concepto.htm#:~:text=El%20m%C3%A9todo%20del%20n%
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https://www.merckmillipore.com/ES/es/industrial-microbiology/learning-center/regulatory-expertise/w6ab.qB.WF
YAAAFJtMAHESyG,nav#:~:text=La%20EN%20ISO%2011133%3A2014,agua%20utilizando%20medios%20de%20c
ultivo.