DETECCIÓN DE ADN Y ARN MICROBIANO

La detección de ADN y ARN microbiano se puede llevar a cabo mediante diferentes técnicas entre
las más conocidas están la PCR (prueba de PCR) y la Hibridación de sondas (Hibridación en situ).
PCR

¿QUÉ SON LAS PRUEBAS DE PCR?

 Son una técnica rápida y precisa de diagnosticar enfermedades infecciosas y cambios

genéticos.
 Se conoce también como reacción en cadena de la polimerasa (RCP), rtPCR, PCR de
transcripción inversa, qPCR, PCR cuantitativa, PCR en tiempo real.
 Detectan el ADN o el ARN de un patógeno (el organismo que causa una enfermedad) o células
anormales en una muestra.
El ADN: es el material genético que contiene las instrucciones y la información de todos los seres
vivos.

El ARN: Contiene información copiada del ADN e interviene en la producción de proteínas

¿PARA QUÉ SE UTILIZAN?

 Diagnosticar ciertas enfermedades infecciosas

 Identificar un cambio genético que puede causar una enfermedad.
 Encontrar cantidades pequeñas de células cancerosas que podrían pasar desapercibidas en
otros tipos de pruebas.

A diferencia de muchas otras pruebas, las de PCR pueden encontrar signos de una enfermedad en
las fases más tempranas de la infección. Otras pruebas pueden no detectar los primeros signos de
la enfermedad porque no hay suficientes virus, bacterias o patógenos en la muestra, o porque su
organismo no ha tenido tiempo suficiente para desarrollar una respuesta de anticuerpos.

Los anticuerpos son proteínas que el sistema inmunitario produce para atacar a sustancias extrañas
como los virus y las bacterias. Las pruebas de PCR pueden detectar una enfermedad cuando hay
sólo una cantidad muy pequeña de patógenos en su cuerpo.

¿CUÁL ES EL PROCESO?

 Una pequeña cantidad de material genético de una muestra se copia varias veces.
 El proceso de copia se conoce como amplificación.
 Si en la muestra hay patógenos, la amplificación hace que sean mucho más fáciles de ver.

La muestra se puede obtener mediante análisis de sangre o hisopado nasal:

 Hisopado de narinas
 Hisopado de cornete medio
 Hisopado nasofaríngeo

HIBRIDACIÓN DE SONDAS DE ADN

¿QUÉ ES?
 Es una técnica de laboratorio empleada para localizar una secuencia de ADN o ARN en una
muestra biológica.
 Se conoce como Hibridación in situ
 Muchas técnicas moleculares están basadas en la hibridación como la RCP (PCR).

¿EN QUÉ SE BASA?

Se basa en el desarrollo de dos moléculas de ácidos nucleicos:
 Una homogénea de secuencia distinguida como sonda.
 Otra heterogénea de secuencia desconocida, la cual contiene la secuencia diana que se quiere
analizar.

¿PARA QUÉ SE UTILIZA?

 Diagnóstico de enfermedades
 Identificación de microorganismos patógenos
 Estudio de perfiles de expresión génica
 Localización de genes en cromosomas o en ARN en tejido in situ.
 En la comparación de especies patógenas

¿CUÁL ES EL PROCESO?

 Una muestra biológica que consiste en cortes de tejido, células o cromosomas de un individuo
se fija a un portaobjetos de vidrio.
 Luego se expone a una “sonda”, que es una pequeña secuencia de ADN de una sola hebra
marcado con un tinte químico o fluorescente.
 La sonda marcada halla su secuencia correspondiente y se une a ella en la muestra biológica.
 La ubicación de la sonda unida luego puede verse con la ayuda de un microscopio.

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD O ANTIBIOGRAMAS (SUSCEPTIBILIDAD)

¿QUÉ DETERMINAN?

 Determinan la susceptibilidad de un microorganismo frente a los medicamentos

antimicrobianos.
 A partir de la exposición de una concentración estandarizada del germen a estos fármacos.
 Estas pruebas pueden hacerse para bacterias, hongos o virus.
 Controlan la cepa, el antibiótico y el medio de cultivo.

¿CÓMO SE REALIZAN?

Las pruebas de sensibilidad pueden realizarse por:

 Métodos cualitativos
 Métodos semicuantitativos
 Métodos basados en los ácidos nucleicos.

MÉTODOS CUALITATIVOS
 Son menos precisos que los semicuantitativos.
 Se basan en múltiples factores, especialmente en datos farmacocinéticos, farmacodinámicos,
clínicos y microbiológicos.
Los resultados generalmente se informan en una de las siguientes formas:

 Susceptible (S)  Intermedia (I)  Resistente (R)

¿CUÁL ES EL MÉTODO COMÚNMENTE USADO?

 Es el método de difusión en disco más comúnmente usado (también conocido como prueba
de Kirby-Bauer) es adecuado para los microorganismos de crecimiento rápido

¿CUÁL ES EL PROCESO?

 Se basa en la colocación de discos impregnados con antibióticos en placas de agar inoculadas

con el microorganismo que está probándose.
 Después de la incubación (por lo general de 16 a 18 h), se mide el diámetro de la zona de
inhibición que rodea a cada disco.
 Cada combinación de microorganismo-antibiótico tiene diámetros diferentes que implican
que es S, I o R.

MÉTODOS SEMICUANTITATIVOS
 Determinan la concentración mínima de un antibiótico que inhibe el crecimiento de un
microorganismo en particular in vitro.
 La CIM (concentración inhibitoria mínima) aísla bacterias (micobacterias y anaerobios). S-I-R
(valor numérico)
 La CBM (Concentración bacteriana mínima) establece si un fármaco puede ser bactericida o
bacteriostático.

¿CUAL ES EL PROCESO?
 El antibiótico se diluye en caldo o agar y luego se inocula con el microorganismo.
 La CIM permite correlacionar la sensibilidad del microorganimos frente al medicamento con las
concentraciones tisulares que puede lograr el fármaco libre (no unido proteínas).
 Si las concentraciones tisulares del fármaco libre son mayores a la CIM, puede esperarse que el
tratamiento sea exitoso.

MÉTODOS BASADOS EN ÁCIDOS NUCLEICOS

 Detectan secuencias de DNA o RNA específicas, extraídas del microorganismo.

 Estas pruebas incorporan técnicas que permiten detectar genes o mutaciones conocidos que
confieren resistencia.
 Un ejemplo de ellos es mecA, un gen que confiere resistencia a la oxacilina en el Shtapylococus
aureus, si este gen está presente, el microorganismo se considera resistente a la mayoría de los
fármacos beta-lactámicos

Sin embargo, los métodos en ácido nucleicos se prefieren para:

 Diagnóstico rápido de tuberculosis multirresistente en grupos de alto riesgo

 La detección rápida de la posible resistencia en los microorganismos obtenidos directamente a
partir de hemocultivos positivos