Universidad Surcolombiana

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FECHA DE VIGENCIA
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Diseño de medios de cultivos 2

1. OBJETIVO

Desarrollar el diseño y la preparación de un Agar avena el cual sean idóneo para

el crecimiento de microorganismos y determinar las condiciones y concentraciones
necesarias

2. FUNDAMENTO DE PRACTICA

En este laboratorio se busca determinar bajo qué condiciones se puede diseñar de

forma casera un agar, cuya base fundamental sea la avena y que proporcione
todos los nutrientes y las propiedades necesarias para la proliferación de
microorganismos que hagan provecho de tales componentes.

3. DEFINICIONES

A) Agar Avena: El Agar Oatmeal avena es utiliza para el cultivo de hongos, en

particular para la formación de macrosporas, La harina de avena es una fuente
de nitrógeno, carbono, proteínas y nutrientes necesarios para el crecimiento
del hongo. [ CITATION Aga19 \l 9226 ]
B) Carboximetilcelulosa: Los hidrocoloides, como aditivos alimentarios, están
destinados a cumplir diversas funciones tales como espesar, gelificar y
estabilizar. Hoy en día son sustancias imprescindibles en la mayoría de los
alimentos que se consumen en nuestro entorno cultural. La
carboximetilcelulosa es uno de los aditivos más destacados por su calidad y la
variedad de campos de aplicación que abarca dentro del sector alimentario.
[ CITATION San03 \l 9226 ]
C) Hongos: “Los hongos se consideraron originalmente como plantas inferiores
en la categoría de las criptógamas y en la división (Phylum) Thallophitas”
(Arenas, 2008, p. 9). Desde 1969 Robert Harding Whittaker agrupó a los seres
vivos en cinco reinos (Mónera, Protista, Fungae, plantae y Animalia); en 2002,
Kendrick, teniendo en cuenta también la inmunología y la biología molecular,
clasificó a los seres vivos en siete reinos (Archeabacteria, Eubacteria,
Chromista, Protozoa, Fungi, Plantae y Animalia), los dos primeros tienen
células procariontes y también se llaman dominios, los demás son
eucariontes), y a los hongos los ubicó en el reino Fungae o Fungi (Arenas,
2011).[ CITATION Glo19 \l 9226 ]

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Ever Mauricio Morales A Marcela Rey
Linda valentina bautista
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4. NORMAS DE BIOSEGURIDAD
a. Tapa bocas desechables
b. Guantes desechables
c. Gorro desechable
d. Bata
e. Alcohol al 70%
f. Hipoclorito al 0.05%
g. Jabón liquido
h. Prohibido el uso de celular, fumar, comer, beber o aplicar cosméticos dentro del
laboratorio
i. Disposición de los residuos en los contenedores adecuados
j. Mantener cabello recogido
k. No uso de accesorios (aretes, cadenas, relojes, etc.)
l. Lavarse las manos antes y después de estar en el laboratorio
5. MATERIALES E INSTRUMENTOS
Los materiales son empleados por cada una de las muestras de forma independiente (A,
B, C)

 500ml de agua destilada

 1g de NaCl
 Carboximetilcelulosa 1% (la magnitud varía dependiendo la muestra)
 Avena molida, Don Pancho 5 g
 Balanza
 Una olla
 Jarra medidora
 Cuchara o espátula

6. PROCEDIMIENTO
I. Con anterioridad esterilizar y desinfectar todos y cada uno de los instrumentos a
utilizar.
II. En un cuarto de medio litro de agua destilada (125ml) se diluye completa mente el
carboximetilcelulosa bajo las siguientes condiciones, dependiendo la prueba
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Concentración 1:1 Concentración 2:1 Concentración 3:1

Con 1% de carboximetil Con 2% de carboximetil Con 3% de carboximetil
celulosa en relación 1:1 celulosa en relación 2:1 celulosa en relación 2:1

1g100ml 2g100ml 3g100ml

x 125ml x 125ml x 125ml
1 g∗125 ml 2 g∗125 ml 3 g∗125 ml
X= =1,25 g X= =2,5 g X= =3,75 g
100 ml 100 ml 100 ml

Tabla 1: concentraciones

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III. Disolver por completo el gelificante en el agua hasta obtener una “pasta” (no
deben quedar sedimentos o “grumos”)
Nota: de ser necesario, hacer uso de batidora previamente desinfectada, esto con el
fin de tener una completa dilución del compuesto y obtener una mezcla homogénea.
IV. En un recipiente aparte mezclar los 5 g de avena (Don Pancho, molida) en 375ml
de agua destilada y el gramo de sal
V. Calentar la mezcla hasta el punto de ebullición
VI. Mientras se esté calentando la mezcla se le agrega el carboximetilcelulosa en su
respectiva concentración dependiendo la muestra cómo se especifica en la Tabla
1, y con ayuda de una espátula revolver constantemente, para evitar formación de
sólidos.
VII. En el momento en que tome espesor la mezcla, sin parar de revolver, se apaga el
mechero y se sirve el agar
VIII. Una vez se tiene en los recipientes el agar se deja reposar
IX. De cada una de las muestras (A, B, C) se realiza una debida prueba con el fin de
determinar condiciones diferentes para ver el progreso en el diseño del medio de
cultivo
Condiciones:
 Una muestra de cada una de las pruebas fue llevada al refrigerador (A1:1, A2:1,
A3:1).
 Una muestra de cada prueba se dejó a temperatura ambiente (B1:1, B2:1, B3:1);
se dejó en un cajón de la cocina.
  Una muestra de cada prueba se expuso a un ambiente un poco más fresco que la
temperatura ambiente (C1:1, C2:1, C3:1); se colocó debajo de la cama en la
habitación más fresca de la residencia.
X. Marcar cada una de las muestras para la posterior identificación

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7. INTERPRETACION DE RESULTADOS
Ninguno de los medios de cultivo gelificó al punto de poder realizar la siembra de posibles
microorganismos presentes en objetos de uso diario, sin embargo, se obtuvo diversas
apreciaciones teniendo en cuenta el comportamiento de cada una de las 3 muestras en
las 3 pruebas.
El estudio de las nueve muestras tuvo una duración de 72 horas aprox.

 Muestras que fueron almacenadas en la nevera: estas fueron retiras de la nevera

a las 48 horas.

A 1:1 A 2:1 A 3:1

 Como lo muestran las evidencias anteriores en las muestras A 1:1 y A 2:1 no se
determina cambio alguno; se determinó que organolépticamente la muestra A 2:1 resultó
más densa o “espesa” que la muestra A 1:1; se puede inferir que esto es debido a que la
concentración de carboximetilcelulosa es mayor en la muestra A 2:1.
La muestra A 3:1 por su parte muestra la formación de “espumas”, lo que significa que
probablemente hay oxígeno en el medio y de lo cual se infiere que puede proliferación de
microorganismos aerobios facultativos, a su vez teniendo en cuenta que en la avena su
principal componente es el almidón, siendo este un carbohidrato, se puede decir que en el
medio se está presentando un proceso de fermentación del almidón y con ellos posible
producción de bacterias acido lácticas.

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 Muestras a temperatura ambiente almacenadas en el cajón de la cocina.

B 1:1
B 3:1
B 2:1
 En todas las muestras se identifican ciertas formaciones de colonias de
microorganismos no identificados, los cuales probablemente son producto de la
fermentación del almidón presente en el agar, proceso el cual está siendo llevado a cabo
a partir de la proliferación de BAL y teniendo en cuenta sus características
macroscópicas, en las muestras B 2:1 y B 3:1 hay presencia de organismos fúngicos.
En la muestra B1:1 se evidencian dos colores distintos, uno morado o violeta y el otro
verde con tonos amarillos, lo cual quiere decir que son dos microorganismos
completamente diferentes los que están proliferando en el medio, de los cuales podríamos
a su vez inferir que son hongos debido al aspecto físico que tienen, estructuras
algodonosas.
 Muestras expuestas a un ambiente un poco más fresco que la temperatura
ambiente, almacenadas debajo de la cama en la habitación más fresca de la
residencia.

C 1:1 C 2:1 C 3:1

 En las muestras no se denota cambio alguno, sólo se logra ver que hay
sedimentos de la avena molida.

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De los resultados entre las 3 pruebas (A, B, C) se pude determinar que la
temperatura cumple un papel fundamental en el proceso de desarrollo de los
microorganismos, ya que en las muestras B, sin importar la concentración, en todas las
muestras hubo formación de colonias mientras que en las muestras C por su parte no se
evidenció cambio alguno.
Se logra determinar que un factor importante a la hora de diseñar un medio de
cultivo es el almacenamiento del mismo, puesto que de allí parte la posible proliferación
de microorganismos.
Otra apreciación que se puede tener en cuenta es que la concentración del
gelificante influye de cierta manera en la inoculación de los microorganismos, en la
muestra A 3:1 se puede evidenciar a comparación de las otras muestras de la prueba A.
Aunque no se realizó una debida siembra, se logra determinar que los
microorganismos se encuentran presentes en todo sistema; en este caso se evidenció
cómo se formaron colonia a partir de microorganismos algunos ya presentes, otros
formados en le proceso, metabolizan la glucosa del almidón y forman etanol y otros
compuestos durante la fermentación, como lo es el caso de la prueba A 3:1.
Se puede establecer que otro factor que pudo influir en los resultados fue el uso del
carboximetilcelulosa puesto que dicha sustancia claramente debió reaccionar con los
componentes de la avena, dando origen así a nuevos compuestos utilizados por los
microorganismos para su desarrollo.
8. POSIBLES ERRORES
No garantizar el medio completamente anaerobio en el almacenamiento del medio.
Los utensilios no se encontraban debidamente esterilizados y de allí también se pudo
dar origen a la formación de los microorganismos obtenidos.
El choque térmico de las muestras refrigeradas pudo ser el causante del origen de
los resultados.
9. CONTROL DE CALIDAD
 De tener la posibilidad, se debería identificar por medio de los diferentes métodos de
identificación, qué tipo de microorganismos son los que se obtuvo al finalizar la práctica.
Para garantizar un aseguramiento de la calidad y cumpliendo con las BPL, se procede
a desinfectar por completo las áreas donde se mantuvieron almacenadas las muestras
junto con las áreas de trabajo a la hora de la preparación del medio de cultivo.

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10. REFERENCIAS
Agar oatmeal. (2019). condalab.
salazar, G. I. (2019). micologia general. Manizales: Centro Editorial Universidad Católica
de Manizales.
Sanz, M. (2003). Hidrocoloides en los alimentos: efectos espesantes, gelificantes y
estabilizantes. carboximetilcelulosa sodica. Revista de plasticos modernos:
Ciencia y tegnologia de polimeros .
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