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ARTES DE CHIAPAS
FACULTAD DE INGENIERÍA
PROGRAMA EDUCATIVO DE INGENIERÍA AMBIENTAL
REPORTE
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
PRESENTA:
EDUARDO LORENZO RUEDA
IVÁN MENDOZA PÉREZ
EDSON ELÍ OCAÑA MADARIAGA
MARÍA MAGDALENA PARRA REVUELTA
ADRIANA CAROLINA PÉREZ ESPINOSA
CESAR RAMOS MOLANO
LUIS ALBERTO SANTIAGO COUTIÑO
KARLA PATRICIA VÁZQUEZ FLORES
KRYSTEL VELÁZQUEZ ESCALANTE
MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL
PROFESOR(A):
DRA. REBECA ISABEL MARTÍNEZ SALINAS
REPORTE ........................................................................................................................................................... 1
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................................................ 3
OBJETIVOS ....................................................................................................................................................... 4
MATERIALES Y EQUIPO ............................................................................................................................. 4
METODOLOGÍA ............................................................................................................................................. 5
DIAGRAMA. ...................................................................................................................................................... 6
OBSERVACIONES .......................................................................................................................................... 7
INVESTIGACIÓN ........................................................................................................................................... 9
DISCUSIÓN ..................................................................................................................................................... 15
CONCLUSIONES........................................................................................................................................... 15
REFERENCIAS. .............................................................................................................................................. 16
INTRODUCCIÓN
La vigilancia de la calidad del agua es fundamental para reducir los riesgos de transmisión de
enfermedades a la población por su consumo, como las de tipo gastrointestinal y las producidas
por contaminantes tóxicos [...] el resultado de la verificación e inspección de las características
mencionadas, se evalúa comparando las condiciones que presentan los sistemas de abastecimiento,
con los requisitos sanitarios que permiten preservar la calidad del agua (NOM-230-SSA1-2002).
El agua destinada al consumo humano puede ser contaminada por las aguas residuales o por
desechos humanos y animales que pueden contener microorganismos patógenos (principalmente
intestinales) como son las causantes de la tifoidea (Salmonella typhi), la disentería (Shigella
dysenterieae) o el cólera (Vibrio cholerae) entre otros (UNAM, 2012).
Las bacterias coliformes son un grupo heterogéneo compuesto por varios. Existe poca evidencia
que indique que estas bacterias coliformes pertenecen a un solo género taxonómico. El método se
basa en que las bacterias coliformes, fermentan la lactosa incubadas a 35 ± 1°C durante 24 a 48
horas, resultando una producción de ácidos y gas el cual se manifiesta en las campanas de
fermentación. (NOM-112-SSA1-1994).
Al crecer en medios de cultivo tipo ENDO, las bacterias coliformes metabolizan la lactosa con la
producción de aldehído y ácido, el aldehído libera la fucsina del compuesto fucsina-sulfito. La
fucsina luego colorea las colonias de rojo en algunos casos esta reacción es tan intensa que se el
color rojo viene acompañado de un brillo metálico. Este procedimiento aplica para todo tipo de
aguas (Barrios, Sierra & Bertel, 2013).
Los coliformes crecen con colonias rojo-violáceas, con mayor o menor reflejo metálico (E. coli,
máximo brillo). Las bacterias no fermentadoras de la lactosa crecen con colonias del mismo color
del medio, que tienden a decolorar al rosa pálido. La flora Gram positiva es parcialmente inhibida
por la presencia de Sulfito Sódico y Fucsina Básica.
Para detectar un peligro potencial se utilizan “indicadores de contaminación” que reúnen las
siguientes características:
Las bacterias coliformes reúnen las características anteriores. El grupo de los microorganismos
coliformes es el más ampliamente utilizado en la microbiología de los alimentos como indicador
de prácticas higiénicas inadecuadas (NOM-113-SSA1-1994). La supervivencia de coliformes en el
agua es mayor que la de cualquier bacteria enteropatógena y su identificación es fácil y confiable.
Por tanto, el aspecto más importante del análisis bacteriológico del agua es la determinación de
coliformes que puede hacerse por el método del número más probable (NMP), la determinación
de bacterias mesófilas aerobias o por el método de filtración de membrana.
OBJETIVOS
MATERIALES Y EQUIPO
● Sistema de Filtración (recipiente de vidrio de 250 ml con base para embudo esmerilado,
frasco de Erlenmeyer de 1000 ml, pinzas y porta filtros).
● Cajas de Petri.
● Pinzas.
● Bomba de vacío.
● Incubadora. Manguera.
● Membranas de filtración con tamaño de poro de 0.45 m.
● Mecheros.
● Agua estéril.
● 200 ml de muestra (agua de pozo, agua de la llave, agua de río, agua embotellada).
● Medios de cultivo comerciales en ampolleta:
❖ Medio de cultivo para el recuento de microorganismos totales: Tryptone Glucosa
Extract Broth.
❖ Medio de cultivo para el recuento de coliformes totales: m-Endo Total Coliform
Broth.
❖ Medio de cultivo para el recuento de coliformes fecales: m-FC Broth
METODOLOGÍA
Existen en el mercado medios de cultivos específicos para el análisis microbiológico del agua, como
los suministrados por la casa Millipore.
Los medios de cultivo propuestos son líquidos ya que estos medios tienen más facilidad para
penetrar en los poros de la membrana y bañar las superficies de las mismas.
El proceso de la práctica fue realizado en las condiciones adecuadas (medio estéril), se puede
observar que los resultados esperados se cumplen, ya que las colonias se vieron presentes en los
medios de cultivo, para realizar el conteo se tuvo que hacer un aproximado debido a que en las
cajas hacían presencia colonias y puntiformes, eso dificulta el conteo. En el caso del blanco no se
espera ningún resultado. La muestra de agua que fue tomada desde un grifo, se encuentra en buenas
condiciones.
Cálculos (Unidades formadoras de colonias UFC/100 ml por cada muestra procesada en ambos
métodos y compara los resultados con los niveles máximos permisibles.
TABLA 1- FILTRACIÓN POR MEMBRANA.
La muestra tomada en el pozo de cerro hueco, indica la presencia de contaminantes como se puede
ver en las tablas y dibujos, más visibles en la muestra de coliscan. Por tanto, los resultados indican
que el agua no cumple con la normativa establecida.
Mientras que la muestra tomada directamente del grifo resultó que tenía menor y casi nula cantidad
de unidades formadoras de colonias, por lo tanto, si cumple con lo que la normativa establece.
INVESTIGACIÓN
● Usar aparatos especiales que permitan destapar y tapar mecánicamente el frasco debajo de
la superficie.
Muestreo en pozos:
● Si el pozo está provisto de bomba de mano, bombear durante 5 minutos para que el agua
fluya libremente antes de tomar la muestra.
● Si el pozo está dotado de bomba mecánica, tomar la muestra en una llave previamente
sanitizada de la descarga dejando que fluya el agua libremente durante 5 minutos antes de
tomar la muestra.
● Si no se cuenta con equipo de bombeo, tomar la muestra directamente del pozo por medio
de un frasco estéril o con algún otro dispositivo adecuado previamente sanitizado.
Muestreo en grifos:
● Para la toma de muestra de un grifo, sanitizar y abrir completamente dejando que el agua
fluya de 2 a 3 minutos o el tiempo suficiente para permitir la purga de la línea. Controlar el
flujo de la llave para que se pueda llenar el frasco o bolsa sin salpicaduras.
4. ¿Cuáles son los límites permisibles de los organismos coliformes fecales en agua de
consumo y aguas naturales y cuáles son las normas que aplican?
5. ¿Qué significan las siglas siguientes: ETEC, EPEC, EHEC, EIEC, EAEC, Y DAEC de
acuerdo con las principales cepas de Escherichia y a que características se refieren sus
diferencias?
ETEC (Escherichia Coli Enterotoxigénica): colonizan la mucosa del intestino delgado por medio de
pilis o fimbrias que tienen diversas formas denominadas CFA (colonización factor antígeno),
siendo su principal mecanismo de patogenicidad la síntesis de alguna o ambas enterotoxinas
llamada toxina termolábil (LT), y toxina termoestable (ST). Las toxinas LT Y ST aumentan el nivel
intracelular de cAM y cGMP respectivamente, que se encuentra en las membranas de la célula
intestinal, provocando la salida de agua y iones.
EPEC (Escherichia Coli Enteropatógeno): fue el primer grupo que se identificó serológicamente y se
asoció con casos de diarreas en infantes siendo la adherencia su principal factor de patogenicidad.
El proceso de adherencia íntima ,entre la bacteria y la membrana de células del epitelio intestinal
,seguida de la destrucción de la microvellosidad con polimerización ,con polimerización de actina
que lleva la alteración del citoesqueleto en el sitio de la unión de la bacteria ,debido a los aumentos
de los niveles de calcio intracelular y de proteína cinasa c, ha sido denominado adherencia y
esfacelamiento (A/E). En ensayos in vitro las cepas EPEC se caracterizan por formar
microcolonias en el citoplasma de las células Hep-2 y su estudio incluye factores de patogenicidad
como el efecto A/E presencia de plásmidos y fimbrias.
Las cepas EPEC se consideran típicas cuando tienen los genes eae para la intimina, que participa
en A/E, y el plásmido EAF que codifica para el Bfp; se dice que son atípicas cuando solo presentan
los genes eae pero no el plásmido EAF(Vidal-Graniel,2003).
EHEC (Escherichia Coli Entero Hemorrágica): Riley describo y relaciono a EHEC con brotes
caracterizados con dolor abdominal, diarrea acuosa con sangre y poco o nada de fiebre, cuadro al
que se le llamó colitis hemorrágica (CH) y que era debido a la ingestión de carne cruda o mal
cocida. La bacteria aislada de todos los casos fue E. Coli del serotipo O157:H7. Karmali en 1983,
la asocio con casos aislados de síndrome urémico hemolítico (SUH) caracterizado por daño renal
agudo, trombocitopenia y anemia hemolítica microangiopática, precedida con diarrea por sangre,
con la presencia en heces de E. Coli productora de una citotoxina con actividad en células vero,
por lo que se llama verotoxina (VT), y a las cepas capaces de reproducirse se les denominó E. Coli
vero toxigénicas (VTEC), además se observó que la citotoxina se neutralizó con antitoxina
obtenida a partir de shigella dysenteriae tipo 1, por lo que se le llamó “shiga- like- toxin” o toxina
semejante a shiga (SLT) (Viviana Griselda Morales Cruz, 2010).
EIEC (Escherichia Coli entero invasiva): El grupo EIEC y shigella spp está relacionado genética y
bioquímica mente ya que son descarboxilasa negativas, ,no móviles y lactosa negativas .El
mecanismo de patogenicidad de EIEC es la invasión del epitelio del colon; para ello el primer paso
es la adherencia de la bacteria a las vellosidades de mucosa requiriendo de mucinasa y adhesinas
,para después entrar por endocitosis a la célula y posterior multiplicación de la EIEC dentro de la
célula y diseminación a células sanas adyacentes.
La información genética para este mecanismo está en loci del cromosoma y del plásmido, además
de tener la capacidad de elaborar uno o más entero toxinas que pudieran ser importantes en la
producción de la diarrea. Los genes necesarios para la invasión se encuentran en un plásmido de
140 MDa llamado plnv, que codifica para proteínas, como por ejemplo las ipa y otras que están
involucradas en el proceso de patogénesis.
EAEC (Escherichia Coli Entero Agregativa):
El sitio blanco dañado de EAEC puede ser la mucosa del intestino grueso y delgado, con un
periodo de incubación de menos de ocho horas y puede durar hasta 18 o 20 días. Esta bacteria
puede causar brotes o casos aislado de diarrea persistente. En niños puede manifestarse con diarrea
líquida, de color verde con moco, sin sangre, y que en ocasiones puede llegar a ser severa y requerir
rehidratación intravenosa. Algunas veces el cuadro clínico se presenta como diarrea con moco con
o sin sangre, vomito y sin o con poca fiebre.
Las cepas de E. Coli de adherencia difusa no forman microcolonias cuando se adhieren a células
Hep-2 .Se sabe poco de su mecanismo de patogenicidad pero se ha caracterizado un fimbria de
superficie, conocido como F1845 ,involucrada en el fenómeno de adherencia difusa. Los genes
codificados para esta fimbria se pueden encontrar en el cromosoma o en un plásmido.
El grupo DAEC se puede aislar tanto de personas sanas como como en personas con diarrea,
siendo más importante en niños de 4 a 5 años. Los principales síntomas que se presentan son
acuosos sin sangre y sin leucocitos. La hibridación con sondas derivadas de un fragmento del gen
daaC, que codifica para la fimbria F1-845, también se ha empleado para el diagnóstico, pero puede
presentar falsos positivos, y el diagnóstico empleado PCR aún no se ha desarrollado (Rodriguez-
Angeles, 2002).
NOM-112- SSA1-1994: Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para
estimar el número de coliformes presentes en productos alimenticios, por medio del cálculo del
número más probable (NMP) después de la incubación a 35 °C de la muestra diluida en un medio
líquido. Este procedimiento puede aplicarse a agua potable, agua purificada, hielo y alimentos
procesados térmicamente, así como a muestras destinadas a evaluar la eficiencia de prácticas
sanitarias en la industria alimentaria. Este procedimiento debe seleccionarse cuando la densidad
esperada es como mínimo de una bacteria en 10 ml de producto líquido o una bacteria por gramo
de alimento sólido. Cuando la densidad bacteriana sea menor que la aquí citada y si la naturaleza
del alimento lo permite, utilizar el método de filtrado en membrana. Si la densidad microbiana se
espera sea mayor a 100 por mililitro o gramo de muestra, ampliar el intervalo de diluciones o utilizar
el método en placa.
NOM-127-SSA1-1994: Esta Norma Oficial Mexicana establece los límites permisibles de calidad
y los tratamientos de potabilización del agua para uso y consumo humano, que deben cumplir los
sistemas de abastecimiento públicos y privados o cualquier persona física o moral que la distribuya,
en todo el territorio nacional.
En el método de cultivo Coliscan Easygel se pudo observar varias colonias de coliformes en las
muestras del primer grupo del folio 02 de 1 ml y 02 de 5ml (agua de pozo) es donde se pudo ver
una mayor cantidad de coliformes totales, se puede ver en la Tabla 2. De los blancos de ambos
equipos también se pudo identificar 6 coliformes totales de cada uno (F03 y F05 de
2.5 ml).
Cabe destacar que la calidad microbiológica del agua en una red pública es óptima por la
contaminación que se da por los sistemas de distribución (tuberías), ya que el agua potable es
almacenada en tanques o cisternas de la vivienda.
CONCLUSIONES
El agua constituye un elemento esencial, ya que es indispensable para la vida, por lo que es
necesario llevar un seguimiento de la calidad. Con este análisis se ha determinado la calidad del
agua.
Este tipo de análisis son fundamentales para identificar si se produce alguna alteración en el agua
que habitualmente consumimos de forma directa o indirecta, analizar la composición de los
alimentos, y en este caso en el agua, es importante pues de esta forma podemos identificar si existe
la presencia de microorganismos y comprobar que sea potable para su consumo, tanto humano o
industrial.
Esta práctica nos sirvió para detectar la presencia de microorganismos como E. Coli, se debe aplicar
pruebas bioquímicas correspondientes para así saber si el agua potable no contiene ningún agente
patógeno.
Es importante que para dicha práctica se cumpla estrictamente lo establecido en las normas, ya que
estas destacan todo el procedimiento y los límites permisibles de los microorganismos que se
encontraron en la práctica.
REFERENCIAS.
1. “ANÁLISIS DE AGUA - ENUMERACIÓN DE ORGANISMOS COLIFORMES
TOTALES, ORGANISMOS COLIFORMES FECALES (TERMOTOLERANTES) Y
Escherichia coli – MÉTODO DEL NÚMERO MÁS PROBABLE EN TUBOS
MÚLTIPLES (CANCELA A LA NMX-AA-42-1987)” Norma Mexicana NMX-AA-042-
SCFI-2015, Diario Oficial de la Federación, 18 de abril de 2016.
2. Barrios, R. L., Sierra, C.A., Bertel, M. E. (2013). Biología y Microbiología Ambiental.
https://www.eumed.net/libros-gratis/ciencia/2013/22/22.pdf
3. “CALIDAD DEL AGUA – DETECCIÓN Y ENUMERACIÓN DE ORGANISMOS
COLIFORMES, ORGANISMOS COLIFORMES TERMOTOLERANTES Y
4. ESCHERICHIA COLI PRESUNTIVA – MÉTODO DE FILTRACIÓN EN
MEMBRANA” Norma Mexicana NMX-AA-102-SCFI-2006, Diario Oficial de la
Federación, 21 de agosto de 2006.
5. “DETERMINACIÓN DE BACTERIAS COLIFORMES.TÉCNICA DEL NÚMERO
MÁS PROBABLE” Norma Oficial Mexicana NOM-112-SSA1-1994, Diario Oficial de la
Federación, 15 de agosto de 1994.
6. Martínez R. I., Gónzalez, F. M. (2018) Manual de prácticas de laboratorio. Universidad de
Ciencias y Artes de Chiapas. Ed 11.
7. “Método para la cuenta de microorganismos coliformes totales en placa” Norma Oficial
Mexicana NOM-113-SSA1-1994, Diario Oficial de la Federación, 15 de agosto de 1994.
8. Rodríguez-Angeles, G. (2002). Principales características y diagnóstico de los grupos
patógenos de Escherichia coli. Salud Pública de México, 464-475.
9. “SALUD AMBIENTAL, AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO-LÍMITES
PERMISIBLES DE CALIDAD Y TRATAMIENTOS A QUE DEBE SOMETERSE EL
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https://www.pediatria.gob.mx/archivos/burbuja/13.4_NOM-127-SSA1-
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10. “Salud ambiental. Agua para uso y consumo humano, requisitos sanitarios que se deben
cumplir en los sistemas de abastecimiento públicos y privados durante el manejo del agua.
Procedimientos sanitarios para el muestreo” NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-
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11. UNAM (2012). PROTOCOLO DE PRÁCTICAS MICROBIOLOGÍA
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https://amyd.quimica.unam.mx/pluginfile.php/1760/mod_resource/content/1/Protoc
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12. Vidal-Graniel, J. E. (2003). Escherichia coli enteropatógena (EPEC): Una causa frecuente
de diarrea infantil. Salud en Tabasco, 188-193.
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Vigentes . Revista Mexicana de Pediatría, 271-276.