Instituto Universitario de la Paz

Escuela de Ciencias. Química

Laboratorio de Biotecnología, Código 460704
Práctica No. [02]. Preparación de medios de cultivo, siembra y
aislamiento de Bacterias.

Geraldine Maoly Gomez Nova, Código 1005240288

Fecha de la elaboración de la práctica: 12-04-2023
Fecha de entrega de informe: 25-04-2023

RESUMEN
En la práctica de laboratorio se prepararon dos medios de cultivos, Agar EMB( Eosina Azul
de Metileno) y Agar Plate Count, posteriormente se realizó la siembra y alistamiento de
microorganismos utilizando la técnica de aislamiento por estría y la técnica de aislamiento
por dilución de decimales. Las muestras cultivadas fueron lixiviados y aguas contaminadas.
Se obtuvo como resultado diferentes bacterias cultivadas en su respectivo medio.

Palabras claves: Medios de cultivos, siembra y aislamiento, microorganismos, técnicas de aislamiento.

1. INTRODUCCIÓN sólidos, semisólidos o líquidos y deben

Para el desarrollo de microorganismos es
necesario un medio de cultivo que
proporcione nutrientes, humedad,
temperatura, pH, consistencia adecuada del
medio, presencia o ausencia de gases, luz, etc.
En una muestra de laboratorio es difícil
encontrar un solo tipo de microorganismo, por
eso cuando se quiere aislar un
microorganismo es necesario que las
condiciones del laboratorio imiten el estado y
condiciones que necesita el microorganismo
para multiplicarse, mantenerse o crecer y así
mismo límite el crecimiento de las especies
que no se desean estudiar.
Los medios de cultivos para aislar
microorganismos ambientales pueden ser
proporcionarles todas las condiciones
ambientales y nutricionales para el
crecimiento microbiano. La biotecnología y la
biología molecular ha sido muy importante
para identificar qué microorganismos pueden
cultivarse en el laboratorio, ya que no todos se
pueden cultivar en este debido a las
temperaturas extremas que necesitan para
mantenerse, como por ejemplo arqueas,
hongos, levaduras, eucariotas y bacterias que
se mantienen a niveles industriales.
Existe un variedad de tipos de medios de
cultivo, entre ellos los medios de
enriquecimiento, medios definidos, medios
complejos, medios selectivos, medio
diferenciales y medios de enriquecimiento.
Para aislar un microorganismo procariota es

1
necesario aislarlo en el medio en qué se 3. METODOLOGÍA
encuentran para obtener un cultivo axénico.

Existen diferentes procedimientos que se PREPARACIÒN DE MEDIOS DE CULTIVO

pueden utilizar para aislar microorganismos,
Se pesó la cantidad de medio de cultivo que
entre los más utilizados se encuentra el
indica la etiqueta del envase para preparar la
aislamiento por estría y las diluciones
cantidad requerida. En un Erlenmeyer se
decimales. El aislamiento por estrías cruzadas
colocó el doble del volumen, seguido se
permite alistar bacterias que dan lugar a
adiciono el agua necesaria y se calentó
colonias separadas y analizar la morfología de
suavemente. Por último se transfirió de 15 a
la colonia, posteriormente se puede transferir
20 mL de cada medio en cajas de Petri
una sola colonia a un nuevo medio y
estérile dejando que solidifique a
desarrollar un cultivo puro bacteriano.
temperatura ambiente.
El aislamiento por diluciones decimales
consiste en diluciones sucesivas, en TÉCNICA DE AISLAMIENTO POR ESTRÍA
condiciones estériles, de manera que se va
reduciendo el número de microorganismos de Se incineró al rojo vivo el asa bacteriológica,
la suspensión inicial, con el objetivo de contar luego se destapó el tubo que contiene el
el número de bacterias. Se realiza en medio cultivo de microorganismos y se tomó el
líquido y se puede realizar por la técnica de inóculo con el asa estéril, depositando el
vaciado en placa y extensión con la varilla de inóculo sobre la superficie de la placa de agar
vidrio se deslizando el asa con el inóculo sobre el
medio de cultivo haciendo una serie de
2. MATERIALES Y REACTIVOS estrías. Después de finalizar las estrías se
cerró la caja, se etiquetó y colocó en posición
Material Reactivo invertida sobre la mesa.
Erlenmeyers Etanol
TÉCNICA DE AISLAMIENTO POR DILUCIONES
Agitador Agar Plate count
DECIMALES
Plancha de calentamiento Agar EMB
Vaso de precipitado Para la dilución 10 -1, se transfirió 10 ml de la
Termómetro muestra de agua contaminada al erlenmeyer
que contiene 90 ml de solución salina al
Cajas de Petri
0.85% estéril, dejando homogeneizar. Luego
Autoclave se transfirió 1 ml de la dilución 10-1 a un tubo
Agua destilada que contenga 9 ml de solución salina 0.85 %
Mecheros estéril y así sucesivamente hasta 10-6.
Asas bacteriológicas
Para la dilución 10-1 de muestra de lixiviado,
se transfirió 10 ml de la muestra al
Tubos de ensayo
erlenmeyer que contiene 90 ml de solución
Varillas de vidrio salina al 0.85% estéril, así hasta la dilución
Pipetas 10-7 .
Balanza

2
Extensión con varilla de vidrio
Con una pipeta estéril de 1 mL se tomó 0.1
mL de la dilución 10-6 de la muestra a
trabajar y se colocó en el centro de la
superficie de una caja de petri. Se sumergió
una varilla de vidrio en etanol, dejándola
escurrir y pasándola por la flama del
mechero. Se dejó enfriar la varilla de vidrio
en un extremo de la superficie de la caja con
Agar y con ella se extendió la alícuota por
toda la superficie, por último etiquetar la
caja con fecha, técnica, grupo y dilución.
Repetir el mismo procedimiento con las
demás diluciones.
Técnica de vaciado en placa
Con una pipeta estéril se tomó 1 ml de la
dilución 10 -6 de la muestra y se colocó en el
centro de una caja Petri vacía estéril, en
condiciones asépticas, adicionando de 15-20
ml de agar Plate Count el cual debe estar a
una temperatura de 45ºC. Por último se
mezcló la caja petri aplicando la técnica de
vaciado en placa.
5. RESULTADOS Y ANÁLISIS
Cultivo de lixiviados por estría 10-6
3
Se siguió el procedimiento descrito en la
metodología de la preparación del medio de
cultivo, se preparó Agar EMB(Eosina Azul de
Metileno). Cabe resaltar que para la
realización de esto fue importante tener en
cuenta los aspectos que influyen en la
contaminación por microorganismos a los
medios de cultivo y que pudieran dar como
resultados fuentes de error, es decir, se hizo
uso de guantes, se esterilizó la zona con
alcohol antiséptico y se tuvo especial cuidado
con el lavado de los recipientes.
Después de una semana se analizó el cultivo
de lixiviados por estría 10-6, que evidencia un
crecimiento de microorganismos que se
muestran como pequeños puntos negros.
Según la literatura podría ser la bacteria
Escherichia coli ya que se observan cómo
puntos negros azulados y presentan un
crecimiento satisfactorio en Agar EMB.
Cultivo de agua residual por estría 10-5
Se observan microorganismos muy similares a
los observados en el cultivo de lixiviados, se
podría ver similar ya que ambas muestras son
extraídas de fuentes contaminadas, dónde de
igual manera se ve como la bacteria
Escherichia coli.
Cultivo de lixiviado por diluciones decimales.
Técnica de vaciado en placa 10-6.
4
En la placa se evidencia una colonia
bacteriana grande de forma irregular con
bordes ondulados, muestra una coloración
beige. Además de esta colonia se han contado
un total de 19 colonias en tamaños medianos
y pequeños, con coloraciones beige y naranjas
con bordes circulares algunas y otras con
bordes y formas irregulares.
Cultivo de agua contaminada por diluciones
decimales. Técnica de extensión con varilla
de vidrio 10-7.
En la placa se logran observar 25 colonias
grandes de coloración beige-naranja, algunas
circulares y otras con bordes irregulares.
Adicional se observa una cantidad
considerable de colonias pequeñas con forma
circular.
6. DISCUSIONES
Al momento de preparar los medios de
cultivos hubo interferencia únicamente en la
preparación del Agar Plate Count, el cuál se
demoró bastante en hervir, la solución que se
busco fue cambiar de estufa de calentamiento
y aumentar la temperatura.
En los cultivos realizados por el método de
estría se cultivaron aguas contaminadas y
lixiviados, se pudieron observar pequeños
puntos, que según la literatura podría ser la
bacteria Escherichia coli, sin embargo en este
tipo de muestras también puede crecer
satisfactoriamente en Agar EMB, la bacteria
Salmonella typhimurium la cual se encuentra
en aguas y alimentos contaminados, esta
bacteria crece incolora en el Agar EMB, es
decir, para corroborar que se encuentra en el
cultivo es necesario realizar estudios
microscopios.
Es importante resaltar la función que tiene el
medio de cultivo en el aislamiento de un
microorganismo pues le brinda los nutrientes
necesarios para que se puedan multiplicar,
también influyen los factores de temperatura
y tiempo de incubación. En los cultivos
realizados por dilución se evidenció un gran
número de colonias que representa un
resultado significativo
5
7. CONCLUSIÓN
Al momento de preparar un medio de cultivo
lo más importante es el correcto método de
esterilización y cuidado con la manipulación
de instrumentos, cabe resaltar que es
importante mantener las temperaturas
adecuadas a la hora de preparar el caldo
nutritivo, evitando así cualquier alteración o
complicación en la obtención del medio de
cultivo.
Los microorganismos aislados y cultivados por
la técnica de estría no sé encontraron en
condiciones de caracterizar, identificar o
obtener un cultivo axénico o puro ya que no
crecieron de la manera esperada, pudo
haberse presentado algún error humano al
momento de realizar la siembra o quizás en la
preparación del Agar EMB. Sin embargo en los
cultivos realizados por técnica de aislamiento
por diluciones decimales tuvo como resultado
un conteo de bacterias considerable el cuál si
se podría caracterizar o tener en cuenta.
8. BIBLIOGRAFÍA
Elena García-Valdés (2010) “PRÁCTICAS DE
MICROBIOLOGÍA”
https://www.uib.cat/depart/dba/microbiolo
gia/micro2/practicas.pdf
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
https://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20c
ultivo.pdf
EVANGELINA OLIVAS; LUIS ROBERTO
ALARCÓN (2017) “ ACADEMIA DE
MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA DPTO.
CIENCIAS QUIMICO BIOLOGICAS ICB, UACJ. “
https://bivir.uacj.mx/Reserva/Documentos/r
va2011297.pdf
Agar (con Eosina y Azul de Metileno)
https://www.britanialab.com/back/public/u
pload/productos/upl_6054e713a290e.pdf
Técnicas y tipos de sembrado en placa y tubo
https://labdemicrobiologia.wixsite.com/scienti
st-site/t-cnicas-y-tipos-de-sembrado
Microbiologia para humanos
https://microbiologiaparahumanos.wordpress
.com/medios-de-cultivo/
ANEXOS
1.Características de los medios de cultivo.
a) Medios naturales: Su preparación surge a
partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal como lo pueden ser
extractos de tejidos o infusiones, cuya
composición química es conocida.
b) Medios sintéticos: Estos medios
contienen una composición química definida
cualitativa y cuantitativamente. Son usados
principalmente para obtener resultados
reproducibles.
c) Medios definidos: En su composición
tienen sustancias químicas conocidas y
disueltas en agua destilada en proporciones
determinadas, resultando un medio de
composición perfectamente definido.
d) Medios complejos: En la práctica son los
más utilizados y que mejores resultados
proporciona. Su composición no es
exactamente definida, y por consiguiente no
6
es rigurosamente constante. Esto puede
tener ciertos inconvenientes en condiciones
experimentales, donde la reproducibilidad
no podrá ser exacta.
e) Medios selectivos: Son los medios que
tienen como objetivo o finalidad favorecer el
crecimiento de cierta población microbiana
específica. En ocasiones es posible añadir
suplementos artificiales a los medios para
producir un enriquecimiento del mismo.
f) Medios diferenciales: se utilizan para
poner en evidencia características
bioquímicas que ayudan a diferenciar
géneros o especies. La adición de un azúcar
fermentable o sustrato metabolizable se
utilizan para este fin.
g) Medios de enriquecimiento: Son aquellos
que, además de las sustancias nutritivas
normales, incorporan o contienen una serie
de factores indispensables para el
crecimiento de microorganismos exigentes.
Este enriquecimiento se hace por adición de
sangre u otros productos biológicos (sangre,
suero, leche, huevo, etc.)
2.¿Qué tipos de técnicas de siembra
existen?.
Siembra en superficie: se vierte sobre una
placa de Petri el medio de cultivo fundido, se
deja solidificar y se coloca sobre la superficie
el inóculo. Con ayuda de una espátula de
Drigalsky se extiende el inóculo hasta su
absorción total por el medio de cultivo. Este
tipo de siembra es recomendada para
microorganismos aerobios estrictos.
Siembra volumétrica: Este método de siembra
consiste en sembrar una muestra líquida cuyo
volumen no puede ser predeterminado, en
medio de cultivos sólidos o líquidos.

Siembra masiva: Cuando se desea realizar una

siembra masiva se puede utilizar la espátula
de Drigalski. En este caso la gota de muestra
líquida se esparce con la espátula por toda la
superficie del medio de cultivo sólido
imprimiendo un movimiento en espiral.