FACULTAD INGENIERIA, ARQUITECTURA, ARTE Y DISEÑO

PROGRAMA INGENIERIA QUÍMICA

ASIGNATURA BIOTECNOLOGÍA

PRÁCTICA N°1
CULTIVOS MICROBIANO

Objetivo:

 Al finalizar el trabajo práctico el estudiante estará en capacidad de: preparar

adecuadamente medios de cultivo naturales y medios deshidratados
comerciales.

 Fundamento
 Técnicas

1. Materiales y reactivos
 Elermeyer.
 Cajas de Petri.
 Espatulas.
 Agua destilada.
 Papa y Leche.
 Agar – Agar.

2. Equipos
 Balanza.
 Incubadora.
 pH metro.

3. Experimento N°1. Preparación del Agar con papa dextrosa. (200 mL)
 Papa 100 g
 Agar-Agar 3 g
 Dextrosa o glucosa 4 g
 Levadura 0,4 g

3.1 Procedimiento:

 Pelar y poner a hervir la papa en 100 mL de agua destilada o purificada durante

10-15 min.
 El extracto se filtra y se adiciona más agua hasta ajustar 100 mL para reponer lo
que se evaporó.
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 Se agrega los otros ingredientes y se calienta a fuego lento moviendo

constantemente hasta que queden totalmente disueltos.

4. Experimento N°2. Agar - Agar con leche en polvo.

 Leche en polvo 0,2 gr.
 Extracto de levadura 0,52 gr.
 D- Glucosa 0,2 gr.
 Agar – Agar 2 gr.

4.1 Procedimiento (Para 200 mL)

 Disolver 0,2 g de leche descremada en polvo en 100 mL de agua destilada

tibia.
 En 100 mL de agua destilada adicionar 0,52 g de extracto de levadura, 0,2
gr de glucosa y 2 gr de agar – agar.
 Calentar hasta disolver el agar.
 Dejar enfriar a una temperatura de 60ºC, aproximadamente.
 Mezclar la leche y el medio de carne.
 Esterilizar en autoclave.
 Distribuir en placas de Petri previamente esterilizadas.

5. Experimento N°3. Preparación Medio de Cultivo artificial.

 Medio de cultivo a preparar.
 Agua destilada pH neutro.
 Elermeyer.
 Espatulas.
 Estufas.

5.1 Procedimiento

 Revisar la etiqueta del medio de cultivo (fecha de vencimiento,

componentes, preparación).
 Realizar los cálculos de la cantidad solicitada, con base en el dato de
preparación.
 Pesar la cantidad del medio de cultivo.
 Medir pH del agua destilada (debe ser nutra 6,5 – 7,0).
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 Hidratar, agregando aproximadamente la mitad de agua mezclar y luego la otra

mitad.
 Calentar, solo los medios de cultivo sólidos y semisólidos, los medios líquidos no se
calientan.
 Servir en tubos los medios de cultivo semisólidos y los medios de cultivos líquidos,
o de acuerdo a su uso.
 Esterilizar en autoclave a 121ºC, 15 libras de presión por 15 minutos.
 Los medios de cultivo destinados a cajas de Petri se sirven una vez que el medio
adquiere una temperatura aproximada de 45ºC. (preferiblemente en el baño
serológico), para evitar la formación de agua de condensación en la tapa de la caja
de Petri.
 Realizar control de calidad para esterilidad y especificidad de medios de cultivo.

V. Investigación.

1. ¿Por qué es necesario preparar los medios de cultivo con agua destilada o
desmineralizada?.
2. ¿Diferencias entre agua destilada y agua desionizada?
3. ¿Cual es el nombre del alga que se utiliza para preparar los agares?
4. ¿Mencionar dos ejemplos de medios de cultivo que requieran esterilización
por filtración?
5. ¿Por qué se recomienda enfriar a 45°C el agar antes de efectuar el vaciado en
las cajas Petri?
6. ¿Qué características tiene el agar en cuanto a composición química, valor
alimenticio y propiedades físicas?
7. ¿Como se realiza el control de calidad de especificidad y esterilidad de los
medios preparados?
8. ¿Como se realiza el almacenamiento de los medios de cultivos preparados?
9. Errores que se producen durante la preparación de medios de cultivos y que
precauciones debo tener durante y luego de su preparación?
10. Del medio de cultivo artificial que prepararon investigar: composición,
fundamento del medio, usos, microorganismos que crecen y como se
evidencia su crecimiento.
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VI- Bibliografía

 Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos

Generales
 (2da edición). Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela.
 Difco y BBL. 2003. Manual de Medios de Cultivo Microbiológicos.
 Merck. 2002. Microbiology Manual
 Ortega, Y; Quevedo F. 1991. Garantía de la Calidad de los Laboratorios de
Microbiología
 Alimentaria. Organización Panamericana de la Salud. Harla S.A. México D.F.