Facultad de Ciencias
Fisiología vegetal - Agronomía
Extracción y separación de pigmentos fotosintéticos
Photosynthetic pigment extration and separatio
1. Introducción:
La fotosíntesis es la absorción de
energía lumínica y conversión en
potencial químico estable por la
síntesis de compuestos orgánicos
(Bidwell,1993).
La fotosíntesis es importante para el
hombre, entre otros aspectos,
porque mediante ella se producen
alimentos y oxigeno (Barceló et al
1983). pero, además, de forma
directa o indirecta ella alimenta casi
la totalidad del mundo vivo en el
planeta (Campbell y Reece, 2005).
Los pigmentos son las sustancias
capaces de captar energía lumínica
y de transformarla en energía
química mediante la fotosíntesis.
Pero la captación de energía para la
función fotosintética no es la única
función de los pigmentos
fotosintéticos en las plantas. La gran
variedad de sustancias que
responden al concepto de pigmentos
se diferencia en su biogénesis y en
su composición y estructura
molecular, diferencias que son la
causa de sus distintas propiedades.
(Barceló et al, 1983).
La clorofila a está presente en todas
las plantas fotosintéticas; por
consiguiente, la clorofila b está la
mayoría de las plantas verdes, en las
algas verde-azul en su lugar hay
ficocianina, en las algas pardas
fucoxantina y en las algas rojas
ficoeritrina. La clorofila tiene el
potencial para diversos mecanismos
de reacción en la absorción lumínica.
Puede cambiar su contenido
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Agropecuarias
Universidad Nacional de
Trujillo
energético por resonancia de la
estructura de sus enlaces
coordinados (los enlaces alternos
sencillos y dobles pueden resonar
“cambiando lugares” una y otra vez),
por reducción de uno de sus enlaces
dobles, por reducción de la quinona
en el anillo V, o por pérdida de un
electrón en la estructura con dobles
enlaces. ‘Los experimentos con los
isótopos del hidrógeno deuterio o
tritio han indicado claramente que la
clorofila no participa en las
reacciones de transferencia de H o
en óxido reducciones que involucren
H. Al parecer la clorofila participa en
las reacciones de transferencia de
energía tanto por transporte de
electrones (o sea oxidorreducción
por ganancia y pérdida de un
electrón), (Arteaga,2020).
La cromatografía en papel es una
técnica de separación de los
componentes
de una mezcla compleja de
sustancias químicas, tal como los
constituyentes
solubles de una planta.
Generalmente los tejidos vegetales
se extraen con un solvente que mata
todas las células y desnaturaliza las
enzimas (comúnmente se usa etanol
o metano caliente) y el extracto se
concentra. Luego se aplican unas
pocas gotas del extracto en la
esquina de una hoja de papel filtro,
por lo general de 20-50 cm por lado
y una orilla se sumerge en un
solvente orgánico apropiado
(Bidwell,1993).
El objetivo de este trabajo es extraer
los pigmentos que se encuentran en
los cloroplastos de las plantas
superiores y también determinar la
ubicación de los pigmentos
cloroplásticos al hacerlo difundir en
un solvente a través de una tira de
papel de filtro.
2. Materiales y procedimiento
A. Extracción de pigmentos
fotosintéticos
Se coloco a secar hojas de espinaca
(apróximamente 30 grs.) en una
estufa a 50 ªc durante 3 días. Una
vez que las hojas están
completamente secas, se reduce a
polvo en un mortero. Se peso 3 grs.
de polvo de espinaca y se coloco en
un mortero completamente limpio, se
agrego unos pequeños trozos de
CaCO3, enseguida se adiciono
60ml. de acetona al 80% y luego con
el mazo del mortero se presionó a fin
de extraer los pigmentos del polvo de
espinaca el que dará una
colaboración verde oscura al
solvente. Se filtro la solución
acetona- pigmentos a través de un
papel de filtro de porosidad mediana.
El tubo de ensayo con el filtrado se
cubrió con papel aluminio. Se coloco
parte de la solución acetona
pigmentos en un tubo de ensayo a
través del cual hará incidir un haz.
B. Separación de pigmentos
fotosintéticos por cromatografía
de papel
Se confecciono tiras de papel de
filtro de unos 4,5 cm. de ancho por
30cm. de largo. se fijó un pabilo de
uno de los extremos de la tira de
papel de filtro para lo cual se hace un
orificio en el papel, se atravezo el
pabilo y se amarro. En el otro
extremo de la tira de papel de filtro y
a una distancia de 3 cm. del borde
inferior, se ubico cuidadosamente
con ayuda de una varilla de vidrio
una gota de la solución acetona-
pigmento, obtenido de la experiencia
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anterior, de modo que esta gota
impregne el papel de un diámetro no
mayor de 6 mm. En una probeta con
tapa se coloco bencina o benzol
hasta una altura de 2 cm se tapo el
envase y se agito para la
vaporización del solvente dentro de
la probeta. Luego cuidadosamente
se ubicó la tira de papel de filtro
dentro la probeta, tal manera que la
bencina este en contacto con el
extremo inferior de la tira, pero sin
cubrir la impregnación. Enseguida se
fijo la tira del papel mediante el
pabilo y se cerro la probeta. Se ubico
el sistema durante 45 minutos en
una cabina oscura. Trascurrido el
tiempo, sacar el sistema de la
cabina. Se retiro la tira de papel y se
marco inmediatamente el nivel que
alcanzo el solvente, observe las
diferentes coloraciones que presenta
el papel filtro, se dibujo las manchas
en el papel y se marco un punto en
la zona media de cada mancha, el
que será utilizado para calcular el Rf.
Distancia recorrida por el pigmento
Rf=
Distancia recorrida por el solvente
Valores de las distancias de la
separación de pigmentos en le
cromatograma:
a. Distancia del solvente: 16.10cm
b. Distancia del pigmento 1:1:60cm
c. Distancia del pigmento 2:4:00cm
d. Distancia del pigmento 3: 6.80cm ofrece un color diferente a cada tipo
e. Distancia del pigmento4:10:50cm de clorofila, a la primera se le
f. Distancia del pigmento5:15:80cm determina un color verde claro y a la
3. Resultados segunda le da un verde oscuro
Se anoto los pigmentos separados respectivamente, pero además de un
por cromatografía de papel en la cambio de color, debido a esta
tabla1. pequeña diferencia, se le reconoce
Tabla1. Pigmentos fotosintéticos de mayor polaridad a clorofila b en
las hojas de Spinacia oleracea comparación con la clorofila a. En el
“espinaca” y separados por caso de los carotenos, estos son
cromatografía de papel. hidrocarburos con estructuras
compuestas únicamente de
Pigmento Color Rf hidrogeno y carbono por lo que
1.clorifila a
Verde claro 0.099 solamente son solubles en
2. clorofilaVerde 0.248 disolventes no polares siendo mucho
b oscuro más apolares que las clorofilas,
3. xantofilaAmarillo 0.422 tienen coloraciones que van desde el
débil amarillo hasta el anaranjado y los
4. caroteno Amarillo 0.652 más comunes son los carotenos alfa
intenso y beta. Por esta razón, la disolución
5.xantofila Amarillo 0.981 de estos componentes después de la
débil maceración de las hojas se realiza
comúnmente en Etanol que presenta
Grafica 1. Pigmentos una polaridad de 4.3 en el cual se
fotosintéticos con el Rf solubilizan tantos los carotenoides
como las clorofilas. Debido a las
Pigmentos vs Rf diferentes estructuras moleculares
1.5 de cada uno de estos pigmentos,
presentan un grado diferente de
1
solubilidad de acuerdo a su
0.5 polaridad, y su desplazamiento y
0 velocidad en la fase estacionaria
depende de la afinidad de estas
clorifila a clorofila b xantofila
sustancias con cada tipo de
caroteno xantofila disolvente de fase móvil, la cual
difiere de la misma forma debido a la
polaridad del eluyente utilizado y de
4. Discusión:
un mecanismo de adsorción y
La cromatografía es una técnica que
desorción por parte de la fase
separa los componentes de las
estacionaria.
mezclas por una fase fluida móvil a
través de una fase estacionaria
(Barceló et al, 1987) Por lo leído la
separación se da por la fase móvil y
la fase estacionaria; ya que esta por
5. Conclusiones:
capilaridad “arrastra y sube” (la fase
En la practica pudimos observar las
móvil) mientras la fase estacionaria
mejores fases móviles y fases
actúa como partículas la cual separa
estacionarias llegando así a la
los componentes de las mezclas
verificación en la cual se podía
Se vio dos fases: clorofila y
mejorar el proceso de separación de
carotenoides; esta diferenciación

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pigmentos al cambiar la fase móvil, cromatografía sobre papel casera
teniendo en cuenta el solvente de evaluada con pigmentos
acuerdo a su polaridad, mostrando fotosintéticos de espinaca.
así no solo una como mejor, como Barceló, C. J., Nicolás, G. R.,
también si la fase estacionaria es de Sabater, B. G., & Sánchez, R. T.
mayor polaridad, esta retendrá los (1987). pp. 429-441. Fisiología
componentes más polares de la vegetal. Cuarta edición. Ediciones
mezcla, además de atender que, si la Pirámide, Madrid.
polaridad es menor en la fase móvil, Bidwell, R. G. S. (1993). Fisiología
la velocidad de los pigmentos vegetal (No. 968-463-015-8. 02-A4
vegetales aumentaría. LU. FT-FSG. 3.). AGT.
como en este caso, la espinaca, Campbell, N. A., & Reece, J. B.
presentan dos clases de pigmentos (2005). Respiración celular:
fotosintéticos: las clorofilas obtención de energía
identificadas como clorofila a y química. Alberto Alcocer. Biologia.
clorofila b, y los carotenoides, que se 7ª ed. Madrid-España:
dividen en carotenos y xantofila. Panamericana, 170-176.
Condori, M. B., Aro Aro, J. M., Muñoz
Cáceres, A. E., & Rodríguez
Mendoza, J. (2020). Determinación
de antocianinas y capacidad
antioxidante en extractos de
Referencias bibliográficas: (Muehlembeckia volcanica).
Arteaga, E. J. G. (2020). El mejor Revista de Investigaciones
montaje sistemático de una Altoandinas, 22(2), 161-169.

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