UNIVERSIDAD POLITÉCNICA

DEL VALLE DE TOLUCA.

ASIGNATURA: BIOQUÍMICA.

PRÁCTICA 3: CROMATOGRAFÍA EN PAPEL PARA SEPARAR

PIGMENTOS FOTOSINTÉTICOS Y EXTRACCIÓN DE ADN DE
UN PLÁTANO.

FACILIADOR: DRA. EN C.Q. ESMERALDA RIVERA

GUTIÉRREZ

ALUMNA: MARTÍNEZ CONTRERAS AURORA TONANTZIN

MATRÍCULA: 1321341294

GRUPO: IBT3MA

CUATRIMESTRE MAYO-AGOSTO 2022

FECHA DE ENTREGA: VIERNES 29 DE JULIO DE 2022

 PRÁCTICA 3: CROMATOGRAFÍA EN PAPEL PARA SEPARAR PIGMENTOS
FOTOSINTÉTICOS Y EXTRACCIÓN DE ADN DE UN PLÁTANO.

INTRODUCCIÓN

En la presente práctica de laboratorio de unidad 3 llamada metabolismo y energía

de la asignatura de bioquímica tiene se refiere a todos los procesos físicos y
químicos del cuerpo que convierten o usan energía, tales como a respiración, la
circulación sanguínea, la regulación de la temperatura corporal, etc. Para esta
unidad se pretende realizar una práctica enfocada a cromatografía en papel para
poder detectar algunos pigmentos presentes en alimentos cotidianos, así como
identificar el ADN presente en un plátano.

Antes de proseguir, es importante mencionar que la cromatografía en papel es un

proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis cualitativos, la fase
estacionaria está constituida simplemente por una tira de papel de filtro, la muestra
se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la solución y evaporando
el solvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace ascender por
capilaridad. Se coloca la tira de papel verticalmente y con la muestra del lado de
abajo dentro de un recipiente que contiene fase móvil en el fondo.

Por otro lado, los pigmentos fotosintéticos tienen la capacidad de absorber la

energía de la luz solar y hacerla disponible para el aparato fotosintético. En las
plantas terrestres hay dos clases de pigmentos fotosintéticos: las clorofilas y los
carotenoides. La capacidad de las clorofilas y los carotenoides para absorber la luz
del sol y utilizarla de manera efectiva está relacionada con su estructura molecular
y su organización dentro de la célula.

Por último, los ácidos nucleicos son biomoléculas grandes que implica el
almacenamiento y la expresión de información genómica, siendo estos de dos tipos:
ácido desoxirribonucleico (DNA) y ácido ribonucleico (RNA). Los nucleótidos que
forman el DNA están constituidos por el azúcar 2´desoxirribosa unido mediante
enlace éster a ácido fosfórico y mediante enlace N-glucosídico a una de las cuatro
bases nitrogenadas (adenina, guanina, timina o citosina).
 OBJETIVOS

• Demostrar la presencia de diferentes pigmentos fotosintéticos (clorofila,

carotenos y xantofilas) en la hoja de espinaca.
• Extraer ADN de un plátano.

MARCO TEÓRICO

La cromatografía comprende un conjunto de técnicas que tienen como finalidad la

separación de mezclas basándose en la diferente capacidad de interacción de cada
componente en otra sustancia. De forma general, consiste en pasar una fase móvil
(una muestra constituida por una mezcla que contiene el compuesto deseado en el
disolvente) a través de una fase estacionaria fija sólida.

La fase estacionaria retrasa el paso de los componentes de la muestra, de forma

que los componentes la atraviesan a diferentes velocidades y se separan en el
tiempo. Cada uno de los componentes de la mezcla presenta un tiempo
característico de paso por el sistema, denominado tiempo de retención. Cuando el
tiempo de retención del compuesto deseado difiere del de los otros componentes
de la mezcla, éste se puede separar mediante la separación cromatográfica.

La separación de los diferentes componentes de una mezcla que se encuentran en

un líquido o gas es el resultado de las diferentes interacciones de los solutos a
medida que se desplazan alrededor o sobre una sustancia líquida o sólida (la fase
estacionaria). Las diversas técnicas para la separación de mezclas complejas se
fundamentan en la diversidad de afinidades de las substancias por un medio móvil
gas o líquido y un medio absorbente estacionario (papel, gelatina, alúmina o sílice)
a través del cual circulan.

El término 'pigmento' es utilizado para describir una molécula que absorbe luz y
presenta un color. Las plantas contienen una gran variedad de pigmentos que dan
lugar a los colores que en ellas observamos. Obviamente, las flores y los frutos
contienen muchas moléculas orgánicas que absorben luz. Las hojas, tallos, y raíces
también contienen muchos pigmentos, que incluyen las antocianinas, flavonoides,
flavinas, quinonas y citocromos. Sin embargo, ninguno de éstos debe ser
considerado como un pigmento fotosintético.

Las plantas y las algas contienen una gran variedad de pigmentos que dan lugar a
los colores que en ellas observamos. Estos pigmentos son: clorofila-a (verde
intenso), clorofila-b (verde), carotenos (naranja), xantofilas (amarillo), antocianinas
(rojizo, púrpura o azulado) y las ficobilinas (rojo). El color particular que presenta un
alga o un órgano vegetal depende generalmente del predominio de uno u otro
pigmento o la combinación de ellos.

Los pigmentos presentan un grado diferente de solubilidad en alcohol. En nuestra

próxima práctica, vamos a aprovechar esta propiedad para separarlos. Para ello
vamos a triturar hojas, flores o algas para obtener un extracto líquido de color
intenso donde estarán los pigmentos. Pondremos el extracto en un vaso de
precipitados. En el extracto introduciremos una tira de papel poroso de manera que
los pigmentos ascenderán por capilaridad.

Los más solubles se desplazarán a mayor velocidad, pues acompañarán fácilmente

al alcohol a medida que éste va ascendiendo. Al cabo de cierto tiempo, a lo largo
del papel se irán situando los distintos pigmentos formando bandas coloreadas.
Cada una de las bandas de pigmentos será más ancha cuanto mayor sea la
abundancia de este pigmento en la mezcla. Esta técnica de separación se llama
cromatografía y el papel de filtro con los pigmentos separados recibe el nombre de
cromatograma.

Científicos franceses han secuenciado el genoma del plátano, concretamente de la

variedad conocida como plátano malayo (Musa acuminata). En total han identificado
36.500 genes, es decir, 14.000 más que los seres humanos. El hito supone un paso
importante dado que se trata de un alimento básico, considerado, además, el
principal cultivo frutícula del mundo tanto en términos de producción como de
comercio.
 MATERIALES Y REACTIVOS

2 vasos de precipitado de 250 ml 1 probeta de 100mL

Papel filtro 1 vidrio de reloj

1 mortero con pistilo 1Pipeta graduada de 5mL

1 embudo 1 matraz Erlenmeyer de 250mL

Alcohol 45 ml de agua

Hojas de espinaca 5 ml de jabón y 5g de sal

Bolsa de plástico 100 ml de alcohol frio

PROCEDIMIENTO

EXPERIMENTO 1

Primero se machacó
una hoja de espinaca
en un mortero y con
ayuda de un pistilo y
posteriormente se
agregó 20ml de
alcohol.

Después, en un
embudo con papel filtro
se vació el machacado
para poder filtrarlo.
 Luego, se hizo en
forma de rectángulo un
pedazo de papel filtro
para ponerlo sobre el
vaso de precipitado y
esperar a que se
separen los pigmentos.

Por último, se dejó

En esta primera imagen se
secar el papel y se
puede observar como la
comparó los pigmentos
clorofila se encuentra en su
con la tabla siguiente
mayoría en la parte de abajo
de las distintas
del papel, por ello las hojas de
clorofilas.
espinaca posee β-caroteno y
clorofila como principales
componentes responsables
del color de las mismas y
cantidades menores de
xantofilas.

En esta segunda imagen se

puede apreciar más a detalle
que las espinacas poseen
carotenos, clorofilas,
xantofilas tal como se ve en el
Pigmento Color
pedazo de papel filtro después
Clorofila A Verde azulado de unos minutos.
Clorofila B Verde amarillento

Carotenos Naranja

Xantofilas Amarillo
EXPERIMENTO 2

Primero se colocó en un matraz

Erlenmeyer 100ml de alcohol etílico y
se metió al refrigerador. Luego se
colocó en una bolsa plátano y se
agregaron 5 ml de agua destilada,
haciendo la mezcla puré.

Por consiguiente, en un vaso de

precipitado se colocaron 45 ml de agua
destilada, 5 ml de jabón de trastes y 5g
de NaCl para posterior homogeneizarlo.

Seguido a esto, se vació el puré de

plátano en el vaso de precipitado que
contiene la mezcla anteriormente
homogeneizada.

Antes de concluir, se filtró la mezcla por

medio de un embudo y papel filtro,
dejando cierto volumen en vaso de
precipitado, a ese volumen restante se
le añadió el alcohol frio que se dejó en
un inicio en el refrigerador.
 En ambas imágenes se puede apreciar
como en la superficie de la mezcla
comienzan a subir las hebras de ADN
del plátano, dado por la solución
alcohólica. En su mayoría es ADN, así
como ARN.

De igual forma podemos notar que la

sal y el detergente rompen la pared y
membranas celular y nuclear, y el
alcohol ayuda a separar las proteínas a
las que se encuentra unido el ADN.

CUESTIONARIO

1. ¿Por qué la cromatografía en capa fina se dice que es por adsorción y

no por absorción?
Porque, la fase estacionaria consiste en un sólido adsorbente empaquetado en una
columna de vidrio además de que la mezcla a separar (muestra) se deposita sobre
la superficie superior de la fase estacionaria quedando adsorbida en ella. La
principal diferencia entre absorción y adsorción es que mientras la absorción es el
proceso por el que un fluido se disuelve en un líquido o un sólido; en la adsorción
los átomos, iones o moléculas de una sustancia se adhieren a la superficie del
material.
2. ¿Qué pigmentos fotosintéticos observó?
En el caso de las espinacas se pudo observar principalmente clorofila que es lo que
le da color a las hojas, así como también xantofilas y carotenos los cuales tienen la
capacidad de captar la energía luminosa y actúan como antioxidantes.
3. ¿Qué consistencia tenía el ADN extraído del plátano?

Las hebras se desplazaron en la parte superior de los vasos, dado que estaba en
una sustancia acuosa y viscosa gracias al detergente, así como del alcohol.
 REFERENCIAS

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https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?bookid=1473§ionid=1027424
79#1118678473

Bionesia. (2016). Los colores de las plantas y las algas. 26/07/22, de Bionesia Sitio
web: https://www3.gobiernodecanarias.org/medusa/ecoblog/ncarroq/2015/02/01/los-
colores-de-las-plantas-y-las-algas/

Edublog. (2019). Cromatografía. 26/07/22, de Edublog Sitio web:

https://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_fonament.html

Genome. (2022). Ácidos nucleicos. 26/07/22, de Genome Sitio web:

https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/acido-nucleico

Plant and Soil Sciences. (Pigmentos fotosintéticos). 2019. 26/07/22, de Plant and
Soil Sciences Sitio web:
https://passel2.unl.edu/view/lesson/ae42848963d4/2#:~:text=Los%20pigmentos%2
0fotosint%C3%A9ticos%20son%20los,las%20clorofilas%20y%20los%20carotenoi
des.

Quimica.es. (2021). Cromatografía en papel. 26/07/22, de Quimica.es Sitio web:

https://www.quimica.es/enciclopedia/Cromatograf%C3%ADa_en_papel.html

Vygon. (2021). ¿CÓMO INFLUYE LA ADSORCIÓN Y LA ABSORCIÓN EN LA

INFUSIÓN IV?. 26/07/22, de Vygon Sitio web: https://campusvygon.com/adsorcion-
absorcion/#:~:text=La%20principal%20diferencia%20entre%20absorci%C3%B3n,
a%20la%20superficie%20del%20material.