Tecnológico Nacional de México

Instituto Tecnológico de Veracruz

Práctica 1 “Fotosíntesis (Extracción de Pigmentos)”

Materia: Bioquímica

Ingeniería Bioquímica

Nombre de Alumn@: Bravo Portugal Chelsea Camila

Dra. Dinora Marina León Gutiérrez

12/OCTUBRE/2020
 Objetivo:
-Al finalizar la práctica el alumno será capaz de:
-Comprender el papel de los pigmentos en la fotosíntesis.
-Identificar los pigmentos fotosintéticos
-Explicar que ocurre en la cromatografía en papel

Fundamento
La fotosíntesis es un proceso físico-químico por el cual plantas, algas, bacterias
fotosintéticas y algunos protistas como diatomeas utilizan la energía de la luz solar
para sintetizar compuestos orgánicos. Se trata de un proceso fundamental para la
vida sobre la tierra y tiene un profundo impacto sobre la atmósfera y el clima
terrestres: cada año los organismos con capacidad fotosintética convierten
en carbohidratos más del 10% del dióxido de carbono atmosférico. El conocimiento
básico de este proceso es esencial para entender las relaciones entre los seres
vivos y la atmósfera, así como el balance de la vida sobre la tierra.

Tipos de Pigmentos
Un pigmento es una sustancia que absorbe ciertas longitudes de onda de la luz y
refleja otras. Los colores no son una propiedad de los objetos, sino de la luz.

Clorofila
Es el pigmento fotorreceptor responsable de la primera etapa en la transformación
de la energía de la luz solar en energía química, y consecuentemente la molécula
responsable de la existencia de vida superior en la Tierra. Se encuentra en
orgánulos específicos, los cloroplastos, asociada a lípidos y lipoproteínas.
La clorofila es la responsable del color verde de las plantas, las cuales a través del
proceso de la fotosíntesis transforman la luz del sol en energía química natural.
Existen varios tipos de pigmentos de clorofila. Entre ellos, la clorofila A y la clorofila
B son dos tipos de clorofilas. Tienen una estructura similar con una ligera diferencia
en el anillo de porfirina. La clorofila A tiene grupos CH3 en el anillo de porfirina,
mientras que la clorofila B tiene un CHO (grupo aldehído) en el anillo de porfirina.
La clorofila A es el pigmento fotosintético primario presente en plantas y algas. Es
el tipo de clorofilas de mayor distribución. Es un pigmento de color verdoso, capaz
de capturar energía de la luz solar y producir alimentos en fotoautótrofos. Hay dos
tipos de fotosistemas relacionados con la reacción de la luz.
La clorofila B es un pigmento fotosintético accesorio presente en plantas y algas
verdes. Ayuda a la clorofila A al recolectar energía y pasarla. Similar a la clorofila A,
es un pigmento de color verde. Además, tiene una estructura similar a la de la
clorofila A.

Carotenoides
Los carotenoides, localizados en cromoplastos, son hidrocarburos altamente
insaturados, poseen colores que van del amarillo a púrpura pasando por naranja y
rojo, son de naturaleza lipofílica, insolubles en agua y están constituidos por:
-Carotenos: son hidrocarburos derivados del isopreno. El más sencillo es el
licopeno. Si se cicla por los extremos se puede producir el betacaroteno.
-Xantofilas: Son derivados hidrooxigenados de las anteriores como por ejemplo la
zeaxantina y la neoxantina.
En esta práctica realizaremos experimentos de extracción de diferentes pigmentos
vegetales tales como: clorofilas A y B, xantofilas y carotenoides. Se identificará los
diferentes pigmentos que se en encuentran en las hojas de espinaca, con el uso de
la cromatografía.
Material y Reactivos Virtuales:
-Hojas de espinaca o acelga
-Mortero
-Alcohol del 96 (30ml)
-Matraz ó vasos de precipitado
-Embudo de plástico o vidrio
-Arena (1 cucharadita)
-1 tubo de ensayo de 15ml
-2ml de gasolina (95 octano) Img 1) Materiales y reactivos utilizados
en la práctica
-1 lápiz
-Papel filtro
-Tira de papel filtro Whatman 3 nm para cromatografía
-Cinta adhesiva
-Tijeras

Método:
1: Colocar en el mortero hojas de Espinaca o acelga trozandolas con las tijeras,
añadir ahí mismo arena (30ml) y alcohol del 96 (verter 5ml, machacar la espinaca
hasta que se forme una pasta verde oscuro, luego añadir el resto del alcohol), triturar
hasta que el alcohol tome un color verdoso.

Img 2) Se deben cortar las espinacas y

posteriormente comenzar a triturarlas
2: Colocar un papel filtro sobre el embudo y este dentro de un vaso o matraz.

3: Decantar el líquido sobre el embudo con papel filtro y desechar los trozos de hojas
retenidos en el mismo, la solución es de color verde intenso y contiene varios tipos
de pigmentos

-Clorofila A
-Clorofila B
-Carotenoides
-Xanofilas

Img 3) Proceso de decantación.

4: Ahora se separará la clorofila de otros pigmentos, para ello pondremos en un tubo

de ensayo 10ml de la solución alcohólica completa y añadir 2ml de gasolina. Agitar
la mezcla volteando varias veces el tubo y dejar reposar unos minutos. Por
diferencia de densidad se separa en la parte superior del tubo de gasolina teñida de
color verde intenso (clorofilas) y el inferior color amarillenta (el alcohol con los
pigmentos xantofilas y carotenoides).

Img 4) Se añaden 2ml de gasolina

al tubo de ensayo.
 Img 5) En la parte superior del tubo de
gasolina teñida de color verde intenso se
encuentran las clorofilas y la parte inferior
color amarillenta el alcohol con los
pigmentos xantofilas y carotenoides.

5: Separar los distintos pigmentos por cromatología de papel y para ello se utiliza
los 20ml de extracto alcohólico restante, el cual colocaremos en el fondo de un vaso
de precipitado.
6: Luego de recortar una tira rectangular de papel de filtro 3mm de la misma longitud
del vaso y la sujetamos de manera vertical al centro de un lápiz con cinta adhesiva.
Apoyamos el lápiz en los bordes del vaso para que la tira del papel toque en el
centro de la superficie. El alcohol ascenderá por capilaridad en papel de filtro y se
separará la mezcla compleja de pigmentos.

Img 6) Se deja reposando el

papel filtro.

7: Transcurridos unos 30 minutos sacaremos del vaso el papel filtro y lo dejaremos

secar. Por último, observaremos la presencia de 4 bandas coloreadas en la tira de
papel. La banda inferior color verde oscuro corresponde a la Clorofila B; la siguiente
banda color verde claro es la Clorofila A; sobre ella se encuentra una banda
amarillenta que es la Xantofila y la banda superior de color anaranjada corresponde
a los Carotenoides.

Img 7) En la imagen podemos

observar la presencia de diferentes
colores, identificando los diferentes
tipos de pigmentos.

Resultados y Discusión:
La clorofila se encuentra en todas las plantas y algas verdes, siendo el pigmento
forreceptor responsable de la primera etapa en la transformación de la energía de
la luz solar en energía química (Fotosíntesis). Se almacena en orgánulos celulares
específicos: los cloroplastos.
Los pigmentos fotosintéticos son los únicos que tienen la capacidad de absorber la
energía de la luz solar y hacerla disponible para el aparato fotosintético. Los
cloroplastos de las plantas superiores contienen siempre varios pigmentos, Clorofila
A, clorofila B, algunas xantofilas y carotinas.
En la Separación de Xantofilas, según el grado de solubilidad con el alcohol y el
tetracloruro de carbono se reconocen zonas heterogéneas y no miscibles en este
orden
1. Clorofila a+b+ tetracloruro de C
2. Xantofilas y carotenoides + alcohol
La Cromatografía es una técnica de separación de una mezcla de solutos en función
de la diferente velocidad con la que se mueve cada uno de ellos a través de un
medio poroso arrastrado por un disolvente en movimiento. Hay diferentes técnicas
cromatográficas, en esta práctica utilizamos la técnica de de reparto sobre la tira de
papel filtro.
La Cromatografía en papel se basa en la diferencia de velocidad al desplazarse los
distintos pigmentos sobre una banda de papel poroso. Los más solubles se
desplazan más deprisa: los menos solubles, más despacio.
En la práctica que se realizó pudimos observar que en el papel filtro se puede
apreciar la separación de los pigmentos. Al observar el papel, vemos cuatro bandas
o zonas que corresponden a los distintos pigmentos fotosintéticos presentes en las
hojas de espinaca

¿Qué pigmentos se separan?

-clorofila B
-clorofila A
-xantofila
-carotenos

¿Cómo se separan?
Según el grado de la solubilidad con el alcohol.
Se realizó la separación de las xantofilas a partir de un extracto de espinaca
adicionando sustancias como la gasolina que permite el arrastre de la clorofila y el
alcohol toma las propiedades de la xantofila permitiendo su separación logrando su
visibilidad.
El alcohol tiene la propiedad de extraer algunas características de los compuestos
con los cuales es mezclado, por esta razón permite la separación de la xantofila en
la disolución.
Al momento de añadirse la gasolina que a su vez permite el arrastre y separación
de clorofila. Ya que este tiene afinidad por algunos pigmentos como lo es con la
clorofila y es llamado separador.
Referencias y enlaces:
Elena Pérez-Urria Carril. (2009). Fotosintesis: Aspectos básicos. 2020, de Reduca
(Biología). Serie Fisiología Vegetal. Sitio web:
https://eprints.ucm.es/9233/1/Fisiologia_Vegetal_Aspectos_basicos.pdf

Jorge Morales Alistum. (2014). LOS PIGMENTOS VEGETALES . 2020, de Centro

Universitario de Occidente Sitio web: https://es.slideshare.net/jma1859/los-pigmentos-
vegetales

Sebastian Sanchez Espejo. (2010). Clorofila. 2020, de EcuRed Sitio web:

https://www.ecured.cu/Clorofila

Paul, Moumita. (2018). Diferencia entre clorofila A y B. 2020, de bccrwp.org Sitio web:
https://es.bccrwp.org/compare/difference-between-chlorophyll-a-and-b/