LABORATORIO DE QUIMICA INORGANICA

ESPECTROFOTOMETRIA

TUTOR
ING. BELKYS POLO

CARLOS ANDRES BARROS ROMERO

1065614519

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

VALLEDUPAR, CESAR
ACTIVIDAD 1

Análisis cualitativo de resultados: Observa la relación entre el color de las

cubetas y el valor de absorbancia. Comparando las 3 medidas, ¿observas alguna
dependencia entre el valor de absorbancia y la mayor o menor concentración de
PNF en la cubeta?

Lacubeta1,conelcolormá
stransparente,yaquetienem
ayorcantidaddeaguaylam
enordepNF
obtuvolamenormedidadea
bsorbancia.Lacubeta2conu
namarillopálidoportenerm
ayorcantidadde
pNFylamenorcantidadde
agua,obtuvolasegundamedid
amásaltaylaterceracubeta
soloconpNF
obtuvolamedidamásaltade
absorbancia.
La cubeta 1, con el color más transparente, ya que tiene mayor cantidad de agua y
la menor de PNF obtuvo la menor medida de absorbancia. La cubeta 2 con un
amarillo pálido por tener mayor cantidad de PNF y la menor cantidad de agua,
obtuvo la segunda medida más alta y la tercera cubeta solo con PNF obtuvo la
medida más alta de absorbancia.
Análisis cuantitativo de resultados: Calcula la concentración de PNF en la
mezcla final de cada cubeta, sabiendo que la concentración en la botella es de 80
µM PNF. Prepara una tabla con los datos y traza una gráfica representando A
frente a C. ¿Cómo puedes describir lo que observas?
USANDO LA FORMULA
C 1 V 1=C 2 V 2

CUBETA 1
C1V 1
C 2=
V2
C 1=1 ml

80 µM∗1 ml
A= 80µM C 2=
3 ml
V2= 3 ml C 2=26.67 µM

CUBETA 2
C1V 1
C 2=
V2
C 1=2 ml
 80 µM∗2ml
A= 80µM C 2=
3 ml
V2= 3 ml C 2=53.33 µM

CUBETA 3
C1V 1
C 2=
V2
C 1=3 ml

80 µM∗3 ml
A= 80µM C 2=
3 ml
V2= 3 ml C 2=80 µM

0.45
0.4
0.35
0.3 f(x) = 0 x − 0.05
R² = 0.83
0.25
A405

0.2
0.15 Linear ()

0.1
0.05
0
0 100 200 300 400 500 600
C(µM)

Se mezcla 1 mℓ de una muestra problema con 2 mℓ de agua. Calcula la

concentración de pNF en la muestra de partida si el ensayo ha proporcionado un
valor A405 = 0.911

y = 0,0203x - 0,0207
 Y + 0.0207
X=
0.0203
0.911+0.0207
X=
0.0203
X =45.89 µ M

ACTIVIDAD 2

Análisis cualitativo de resultados: Observa la relación entre el color de las cubetas

y el valor de absorbancia. Comparando entre sí las medidas, ¿observas alguna
dependencia entre la absorbancia y la mayor o menor concentración de proteínas
en la cubeta?

Podemos concluir que la relación es proporcional a la concentración de proteína, a

menor proteina menor es la absorbancia.

Análisis cuantitativo de resultados: Calcula la concentración de proteínas en la

mezcla final de cada cubeta, sabiendo que la concentración en la botella es de
800 mg/ℓ. Prepara una tabla con los datos y traza una gráfica representando A
frente a C. ¿Cómo puedes describir lo que observas?

USANDO LA FORMULA
C 1 V 1=C 2 V 2

CUBETA 1
C1V 1
C 2=
V2
C 1=0 ml

mg
mg 80 0 ∗0 ml
A=800 l
l C 2=
3 ml
mg
V 2=3 ml C 2=0
l

CUBETA 2
C1V 1
C 2=
V2
C 1=1 ml

mg
mg 80 0 ∗1 ml
A=800 l
l C 2=
3 ml
 mg
V 2=3 ml C 2=266.66
l

CUBETA 3
C1V 1
C 2=
V2
C 1=2 ml

mg
mg 80 0 ∗2 ml
A=800 l
l C 2=
3 ml
mg
V 2=3 ml C 2=533.33
l

600

500 f(x) = 1157.39 x + 102.7

R² = 0.83
400
A595

300

200
Linear ()
100

0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45

C (mg/ℓ)
Se mezcla 1 mℓ de una muestra problema con reactivo de Bradford, para un
volumen total de 3 mℓ. Calcula la concentración de proteínas en la muestra de
partida si el ensayo ha proporcionado un valor A595 = 0.280

y = 1488,2x + 5,536
Y −5,536
X=
14 88 , 2
0.280−5,536
X=
14 88,2
mg
X =−0.00353
l

ACTIVIDAD 3
Análisis cualitativo de resultados: Observa la relación entre el color de las
cubetas y el valor de absorbancia. Comparando entre sí las medidas, ¿observas
alguna dependencia entre la absorbancia y la mayor o menor concentración de
proteínas en la cubeta?
Se puede observar que a mayor concentración de proteínas mayor es la
absorbancia. La concentración y la absorbancia son directamente proporcionales.

Análisis cuantitativo de resultados: Calcula la concentración de proteínas en la

mezcla final de cada cubeta, sabiendo que la concentración en la botella es de
800 mg/ℓ. Prepara una tabla con los datos y traza una gráfica representando A
frente a C. ¿Cómo puedes describir lo que observas?

USANDO LA FORMULA
C 1 V 1=C 2 V 2

CUBETA 1
C1V 1
C 2=
V2
C 1=0 ml

mg
mg 80 0 ∗0 ml
A=800 l
l C 2=
3 ml
mg
V 2=3 ml C 2=0
l
CUBETA 2
C1V 1
C 2=
V2
C 1=1 ml

mg
mg 80 0 ∗1 ml
A=800 l
l C 2=
3 ml
mg
V 2=3 ml C 2=266.66
l
CUBETA 3
C1V 1
C 2=
V2
C 1=2 ml

mg
mg 80 0 ∗2 ml
A=800 l
l C 2=
3 ml
mg
V 2=3 ml C 2=533.33
l

0.45
0.4
0.35
0.3 f(x) = 0 x − 0.05
R² = 0.83
A595

0.25
0.2
0.15
Linear ()
0.1
0.05
0
0 100 200 300 400 500 600

C (mg/ℓ)

ACTIVIDAD 4
Medida: A continuación, introduce al espectrofotómetro las cubetas, de una en
una, y pulsa el botón para registrar el espectro entre 200 y 800 nm. Pulsa en el
icono de cámara de fotos y copia la imagen resultante para poderlas comparar
todas al terminar el experimento.

CUBETA 1

CUBETA 2

CUBETA 3
2ª medida: Observando el espectro, anota dos longitudes de onda (de la región
visible, no ultravioleta) en las que haya un pico (un máximo local de absorción). A
continuación mide y anota la absorbancia de las 3 cubetas a cada una de esas
dos longitudes de onda. Representa tus resultados en una gráfica, considerando
que la concentración de partida de hemoglobina (en la botella) es de 200 mg/ℓ.
USANDO LA FORMULA
C 1 V 1=C 2 V 2

CUBETA 1
C1V 1
C 2= V 2=3 ml
V2
C 1=3 ml

mg
mg 200 ∗3 ml
A=200 l
l C 2=
3 ml
mg
C 2=200
l
CUBETA 2
C1V 1
C 2= V 2=3 ml
V2
C 1=2 ml
 mg
mg 200 ∗2 ml
A=200 l
l C 2=
3 ml
mg
C 2=133.33
l

CUBETA 1
C1V 1
C 2= V 2=3 ml
V2
C 1=1 ml

mg
mg 200 ∗1 ml
A=200 l
l C 2=
3 ml
mg
C 2=66.66
l

¿Cómo puedes describir las conclusiones de lo observado? ¿Cuál de las

longitudes de onda sería útil para determinar la concentración de muestras
problema de hemoglobina?
Albajarlaconcentracióndehemoglobinaaumentandocantidadesdeag
ua,seobservaquelacomposición
delospicosdeabsorbanciamáxima,semantieneregistradoenlos40
0nm,peroeltamañosereduce
considerablementemientrasmenossealacantidaddehemoglobinausad
a.Demaneranumérica,setiene
unaabsorbanciasobreel1.5con3mLdehemoglobinadelaprimera
cubeta,enlasegundacubetala
absorbanciaestasobre1yenlatercerasobre0.5.Loqueindicaqu
eamenorconcentración,menor
absorbancia
Albajarlaconcentracióndehemoglobinaaumentandocantidadesdeag
ua,seobservaquelacomposición
delospicosdeabsorbanciamáxima,semantieneregistradoenlos40
0nm,peroeltamañosereduce
considerablementemientrasmenossealacantidaddehemoglobinausad
a.Demaneranumérica,setiene
unaabsorbanciasobreel1.5con3mLdehemoglobinadelaprimera
cubeta,enlasegundacubetala
absorbanciaestasobre1yenlatercerasobre0.5.Loqueindicaqu
eamenorconcentración,menor
absorbancia
Al bajar la concentración de hemoglobina aumentando cantidades de agua, se
observa que la composición de los picos de absorbancia máxima se mantiene
registrado en los 400 nm, pero el tamaño se reduce considerablemente mientras
menos sea la cantidad de hemoglobina usada. De manera numérica, se tiene una
absorbancia sobre el 1.5 con 3 ml de hemoglobina de la primera cubeta, en la
segunda cubeta la absorbancia esta sobre 1 y en la tercera sobre 0.5. Lo que
indica que, a menor concentración, menor absorbancia.
ACTIVIDAD 5
Se trata de comparar el espectro de absorción en la región de luz visible entre las
diversas formas de la hemoglobina.
Cubeta 1
Tipo de hemoglobina: desoxihemoglobina.
A(ƛ) máximos de absorción:560 nm

Cubeta 2
Tipo de hemoglobina: oxihemoglobina
A(ƛ) máximos de absorción: 580nm
Cubeta 3
Tipo de hemoglobina: metahemoglobina
A(ƛ) máximos de absorción:500 nm

Cubeta 4
Tipo de hemoglobina: carboxihemoglobina
A(ƛ) máximos de absorción:540 nm

Cubeta 5
Tipo de hemoglobina: cianmetahemoglobina
A(ƛ) máximos de absorción:540 nm