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Actividad

Redaccion De Articulos Cientificos (Universidad de Guayaquil)

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Descargado por Eliann Alexander Ardila Ardila (eliannardila-@hotmail.com)
 Relación entre absorbancia y concentración
Diseño del experimento: Utilizando el para-nitrofenol (pNF) y agua, prepara 3 muestras en
sendas cubetas, que contengan distintos volúmenes de pNF y siempre un volumen total de 3 mℓ.

Medidas de absorbancia

Análisis cualitativo de resultados:

Observa la relación entre el color de las cubetas y el valor de absorbancia. Comparando las 3 medidas,
¿observas alguna dependencia entre el valor de absorbancia y la mayor o menor concentración de pNF en
la cubeta?

La cubeta 1, con el color más transparente, ya que tiene mayor cantidad de agua y la menor de pNF
obtuvo la menor medida de absorbancia. La cubeta 2 con un amarillo pálido por tener mayor cantidad de
pNF y la menor cantidad de agua, obtuvo la segunda medida más alta y la tercera cubeta solo con pNF
obtuvo la medida más alta de absorbancia.

Por lo que se puede observar que mientras mayor es la cantidad de pNF usada, la medida de absorbancia
es directamente proporcional.

Análisis cuantitativo de resultados:

Calcula la concentración de pNF en la mezcla final de cada cubeta, sabiendo que la concentración en la
botella es de 80 µM pNF. Prepara una tabla con los datos y traza una gráfica representando A frente a C.
¿Cómo puedes describir lo que observas?

Usamos la fórmula de: c1v1=c2v2

 c 1∗v 1
C=
2 v2
Para la cubeta 1, sabiendo que c1= 80 µM, v1= 1mL, v2= 3mL y se encuentra c2:

80∗1
C=
2
3

c2 = 26,67 µM

Para la cubeta 2, sabiendo que c1= 80 µM, v1= 2mL, v2= 3mL y se encuentra c2:

80∗2
C=
2
3

c2 = 53,33 µM

Para la cubeta 3, sabiendo que c1= 80 µM, v1= 3mL, v2= 3mL y se encuentra c2:

80∗3
C=
2
3

c2 = 80 µM

Medidas de absorbancia

1.8
1.61
1.6 R² = 1

1.4

1.07
A405

1.2

0.8 0.53

0.6
30 40 50 60 70 80
0.4 [pNF] (µM)
20

Se observa una tendencia lineal, lo que corrobora que la concentración y la absorbancia son directamente
proporcionales.

Espectro de absorción de la hemoglobina

Diseño del experimento: Utilizando agua y la disolución de hemoglobina, prepara distintas
diluciones y analiza su espectro UV-VIS completo. Para ello, llena una cubeta con hemoglobina
y en las otras dos cubetas prepara sendas mezclas diferentes de hemoglobina con agua. Todas
las cubetas deben tener un volumen total de 3 mℓ.

Medida: A continuación, introduce al espectrofotómetro las cubetas, de una en una, y pulsa el

botón para registrar el espectro entre 200 y 800 nm. Pulsa en el icono de cámara de fotos y
copia la imagen resultante para poderlas comparar todas al terminar el experimento.
Análisis cualitativo de resultados: Compara los 3 espectros. ¿Qué efecto se observa al diluir la
hemoglobina de partida? ¿Cambia la posición (λ) de los picos de absorción máxima? Describe
lo que observas.

Espectros de cubeta 1, 2 y 3 respectivamente

Al bajar la concentración de hemoglobina aumentando cantidades de agua, se observa que la composición

de los picos de absorbancia máxima, se mantiene registrado en los 400 nm, pero el tamaño se reduce
considerablemente mientras menos sea la cantidad de hemoglobina usada. De manera numérica, se tiene
una absorbancia sobre el 1.5 con 3mL de hemoglobina de la primera cubeta, en la segunda cubeta la
absorbancia esta sobre 1 y en la tercera sobre 0.5. Lo que indica que a menor concentración, menor
absorbancia.

2ª medida: Observando el espectro, anota dos longitudes de onda (de la región visible, no
ultravioleta) en las que haya un pico (un máximo local de absorción). A continuación mide y
anota la absorbancia de las 3 cubetas a cada una de esas dos longitudes de onda. Representa tus
resultados en una gráfica, considerando que la concentración de partida de hemoglobina (en la
botella) es de 200 mg/ℓ.

Usamos la fórmula de: c1v1=c2v2

c 1∗v 1
C=
2 v2
Para la cubeta 1, sabiendo que c1= 200 mg/ℓ, v1= 3mL, v2= 3mL y se encuentra c2:

200∗3
C=
2
3
c2 = 200 mg/ℓ
Para la cubeta 2, sabiendo que c1= 80 µM, v1= 2mL, v2= 3mL y se encuentra c2:

200∗2
C 2=
3
c2 = 133,33mg/ℓ
Para la cubeta 3, sabiendo que c1= 80 µM, v1= 3mL, v2= 3mL y se encuentra c2:

200∗1
C=
2
3
c2 = 66,67 mg/ℓ

Medidas de absorbancia

λ=410
1.6
1.4
R² = 1 1.2
1
0.8
A410

0.6
0.4
507090 110 130 150 170 190 210
CHb (mg/ℓ)

λ=590
 0.05
0.04
0.04 R² = 1
0.03
0.03
0.02
0.02

A590
0.01
0.01
507090110 130 150 170 190 210
CHb (mg/ℓ)

Análisis cuantitativo de resultados: ¿Cómo puedes describir las conclusiones de lo

observado? ¿Cuál de las longitudes de onda sería útil para determinar la concentración de
muestras problema de hemoglobina?
Basándose en el valor de r 2 que indica la linealidad de las rectas, se escoge el de valor cercano a
1, ya que indica una menor dispersión de los datos, es decir mayor precisión. Por lo tanto la
longitud de onda λ=410 es la mejor elección ya que tiene un valor de 0,9998, que es mayor a
0,997 corresponde a λ=590.