INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

Departamento de ingeniería Bioquímica

Práctica 2:
“CURVA DE TITULACION DE UN
AMINOACIDO”
PRESENTA:

 Diego López Padilla

PROFESOR:
JUAN CARLOS GONZALEZ HERNANDEZ

MORELIA, MICHOACÁN 19 de octubre de 2020

1
INTRODUCCION
Un aminoácido puede existir en varias formas iónicas, dependiendo del pH del medio en donde se
encuentre disuelto. Esta propiedad se describe mejor utilizando la ecuación de Henderson –
Hasselbach. Los aminoácidos tienen al menos dos grupos disociables, el amino y el carboxilo; pueden
tener más si el grupo R tiene a su vez grupos que se puedan ionizar. Para cada uno de estos grupos
existe un pK, el del carboxilo se le llamará PKCOOH y PKNH2 al del amino.
la representación gráfica de la variación del pH de una solución por la adición de equivalentes de
ácido o de base se denomina curva de titulación. En el caso de los aminoácidos, las curvas de
titulación proporcionan la siguiente información (o bien se puede deducir a partir de las mismas):
- Medida del pK de los grupos ionizables: se localizan en el punto medio de la zona tampón.
- Regiones de capacidad tampón: mesetas donde se localizan los pKs; dichas regiones se encuentran
en el intervalo pK ± 1 unidad de pH.
- pI: se localiza en el intervalo de viraje.
- Formas ionizables del aminoácido en cada rango de pH.
- Carga eléctrica del aminoácido en cada rango del pH
- Solubilidad relativa del aminoácido en cada rango de pH.
Como se ha señalado, los aminoácidos son compuestos anfóteros, ya que pueden comportarse como
ácidos ó como bases, debido a que contienen al menos un grupo carboxilo (-COOH) y un grupo amino
(-NH2) en su estructura.
Los grupos laterales no polares no son solubles en agua, mientras que los grupos laterales polares y
cargados son solubles en agua. A partir de estos relativamente pocos aminoácidos, se puede sintetizar
una inmensa variedad de diferentes tipos proteínas, cada una de las cuales cumple una función
altamente específica en los sistemas vivos.
Los aminoácidos se unen entre sí por medio de enlaces peptídicos.
La secuencia de aminoácidos se conoce como estructura primaria de la proteína y de acuerdo con esa
secuencia, la molécula puede adoptar una entre varias formas. Los puentes de hidrógeno entre los
grupos C=O y NH tienden a plegar la cadena en una estructura secundaria repetida, tal como la hélice
alfa o la hoja plegada beta.
Las interacciones entre los grupos R de los aminoácidos pueden dar como resultado un plegamiento
ulterior en una estructura terciaria, que a menudo es de forma globular e intrincada. Dos o más
polipéptidos pueden actuar recíprocamente para formar una estructura cuaternaria.
Dada la variedad de aminoácidos, las proteínas pueden tener un alto grado de especificidad.
En las proteínas fibrosas, las moléculas largas entran en interacción con otras largas
cadenas de polipéptidos, similares o idénticas, para formar cables o láminas.
Las proteínas globulares también pueden cumplir propósitos estructurales. Los
microtúbulos, que son componentes celulares importantes, estáncompuestos por unidades
repetidas de proteínas globulares, asociadas helicoidalmente en un tubo hueco. Otras
proteínas globulares tienen funciones de regulación, de transporte y de protección.

2
OBJETIVOS
Determinar en forma practica la identidad del aminoácido problema mediante la construcción de una
curva de calibración
Determinar los valores de pka del aminoácido problema mediante el método de titulación por
neutralización acido-base
Comparar los valores de pka del aminoácido problema con los valores teóricos para su identificación.

Materiales y equipo
1 Vaso de precipitado de 30 mL
1 Potenciómetro
1 Bureta
DISCUSIÓN DE RESULTADOS

pH
14

12

10

0
0 10 20 30 40 50

Muestra B

La forma I (totalmente protonada) tiene una carga neta positiva. La forma II tiene carga neutra (una
positiva y una negativa), la forma III tiene una carga negativa y la forma IV tiene dos cargas
negativas. La proporción de moléculas en la forma IV (2 cargas negativas) es tan pequeña que
puede considerarse como despreciable a la hora de calcular el pI.
En base a la grafica se supone el acido glutámico como el aminoácido problema.

3
 pH
14

12

10

0
0 5 10 15 20 25 30 35

Muestra C

En base al análisis de la grafica se determino que el aminoácido problema es la glicina

CUESTIONARIO
I. ¿Qué es un aminoácido?
Los aminoácidos son monómeros que forman la base de las proteínas vitales para el funcionamiento
adecuado de nuestro organismo.
Cada aminoácido contiene un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (-COOH)
unidos a un átomo de carbono central. Un átomo de hidrógeno y el grupo lateral
están también unidos al mismo átomo de carbono. Esta estructura básica es
idéntica en todos los aminoácidos.
II. Mencione al menos tres aminoácidos que no formen parte de las proteínas y su
importancia biológica.
La L-ornitina y la L-citrulina son importantes intermediarios en el metabolismo de la eliminación
del nitrógeno.
La creatina juega un papel importante como reserva de energía metabólica.
III. Menciona tres propiedades de los aminoácidos.

4
Los aminoácidos son compuestos sólidos; incoloros; cristalizables; de elevado punto de fusión
(habitualmente por encima de los 200 ºC); solubles en agua; con actividad óptica y con un
comportamiento anfótero.
IV. ¿Por qué un aminoácido es anfótero?
Los aminoácidos presentan cargas. Los aminoácidos pueden captar o ceder protones al medio,
dependiendo del pH de la disolución en la que se encuentren. Si la disolución es ácida, los
aminoácidos captan protones y se comportan como una base. Si la disolución es básica, ceden
protones y se comportan como un ácido. Por tener este comportamiento, se dice que los
aminoácidos son anfóteros.
V. ¿Qué es un zwitterión?
Es un compuesto químico que es eléctricamente neutro pero que tiene cargas formales positivas y
negativas sobre átomos diferentes.
VI. ¿Qué significa titulación?
Es el método por el cual se determina una cantidad desconocida de una sustancia particular,
mediante la adición de un reactivo estándar que reacciona con ella en proporción definida y
conocida.
es un método de análisis químico cuantitativo en el laboratorio que se utiliza para determinar la
concentración desconocida de un reactivo a partir de un reactivo con concentración conocida.
Debido a que las medidas de volumen desempeñan un papel fundamental en las titulaciones, se le
conoce también como análisis volumétrico.
VII. ¿Cuál es la importancia de las curvas de titulación de los aminoácidos? Esquematice
por medio de reacciones el fundamento de la práctica. Es decir, desglose el
comportamiento químico de un aminoácido a distintos valores de pH.
Las curvas de titulación son las representaciones gráficas de la variación del pH durante el
transcurso de la valoración. Dichas curvas nos permiten:
- estudiar los diferentes casos de valoración (ácido fuerte vs. base fuerte; base fuerte vs. ácido
fuerte; ácido débil vs. base fuerte; base débil vs. ácido fuerte).
- determinar las zonas tamponantes y el pKa.
- determinar el intervalo de viraje y el punto de equivalencia.
- seleccionar el indicador ácido-base más adecuado.

La forma I (totalmente protonada) tiene una carga neta positiva. La forma II tiene carga neutra (una
positiva y una negativa), la forma III tiene una carga negativa y la forma IV tiene dos cargas

5
negativas. La proporción de moléculas en la forma IV (2 cargas negativas) es tan pequeña que
puede considerarse como despreciable a la hora de calcular el pI.

VIII. De los resultados presentados, detalle la identidad del o los aminoácidos problema.

En base a los resultados presentados la muestra B presenta características similares al acido

glutámico y la muestra C muestra similitudes con la glicina.
CONCLUSION
Mediante las curvas de titulación, obtenidas a partir de la titulación con un ácido o base, se pudo
demostrar que los aminoácidos son iones dipolares, debido a que se observó que el aminoácido
problema al estar en contacto con el HCl, el comportamiento de su grupo carboxilato es básico, ya
que capta protones del medio, y al observar su curva de titulación ésta es descendente, por el
contrario, el grupo amonio al estar en contacto con NaOH, se comporta como un grupo ácido,
donando sus protones al medio y se observa que su curva se encuentra ascendente.
A partir de los datos obtenidos también se pudo calcular el pk ya sea del ion amonio o del
carboxilato correspondiente para cada curva de titulación y el punto isoeléctrico.
Es posible que el pK difiera con el pK descrito en la teórica debido a errores en la lectura del pH o
al momento de la titulación, por consecuencia el PI también difiere levemente, sin embargo se
puede decir que no son variaciones demasiado lejanas a la realidad, cumplendo asi nuestro
objetivo práctico.

REFERENCIAS
Barros, J. (2015). Aminoácidos. Recuperado de: file:///C:/Users/one/Downloads/TPL5.pdf
Fornaguera, J., & Goméz, G. (s.f.). Bioquímica: la Ciencia de la Vida. Universidad EstataL a Distancia

Goñi, F., & Macarulla, J. (1994). Bioquímica humana. España: Editorial Reverté, S.A. López, J.,
Gómez, C., & Losada, M. (s.f.). Prácticas de Bioquímica. Sevilla: Universidad de Sevilla.

Teijón, J., & Garrido, A. (2006). Fundamentos de Bioquímica estructural. Obtenido de:
https://books.google.com.ec/books?Id=avt8LFmp8q4C&pg=PA54&lpg=PA54&dq=AMINOACIDOS+
MONOAMINO+C ARBOXILICOS&source=bl&ots=Y5gPnmBbpx&sig=DxlJTHWfZ5kaidaOxR4miMB

6
c3h4&hl=es&sa=X&ved=2ahUKEwjSp8OvgJjeAhVJmlkKHRDYDOQQ6AEwCXoE
CAkQAQ#v=onepage&q=AMINOACIDOS%20MONO

7
 INSTITUTO TECNOLÓGICO DE MORELIA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

Departamento de ingeniería Bioquímica

Práctica 3:
“ESPECTROFOTOMETRIA”

PRESENTA:

 Diego López Padilla

PROFESOR:
JUAN CARLOS GONZALEZ HERNANDEZ

MORELIA, MICHOACÁN 19 de octubre de 2020

8
INTRODUCCION
La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección
específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas
de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc) y estado de agregación (sólido, líquido,
gas). Los fundamentos físico-químicos de la espectrofotometría son relativamente sencillos.
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía interna. Esto
permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosíntesis en
plantas y bacterias.
Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun el vidrio que parece ser completamente
transparente absorbe radiación de longitudes de ondas que no pertenecen al espectro visible; el agua
absorbe fuertemente en la región del infrarrojo. La absorción de las radiaciones ultravioletas,
visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es característica para cada
sustancia química. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida; la energía
radiante no puede producir ningún efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que
éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a
nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbidas. La espectrofotometría ultravioleta-visible
usa haces de radiación del espectro electromagnético, en el rango UV de 80 a 400 nm,
principalmente de 200 a 400 nm y en el de la luz visible de 400 a 800 nm , por lo que es de gran
utilidad para caracterizar los materiales en la región ultravioleta y visible del espectro. Al campo de
luz uv de 200 a 400 nm se le conoce también como rango de uv cercano , la espectrofotometría
visible solamente usa el rango del campo electromagnético de la luz visible , de 400 a 800 nm.
Además, no está de menos mencionar el hecho de que la absorción y trasmitancia de luz depende
tanto de la cantidad de la concentración y de la distancia recorrida.
Determinar la cantidad de concentración en una solución de algún compuesto utilizando las
fórmulas ya mencionadas.
Para la determinación de estructuras moleculares.
La identificación de unidades estructurales especificas ya que estas tienen distintos tipos de
absorbancia (grupos funcionales o isomerías).
En esta espectrofotometría el equipo que se utiliza se denomina ESPECTROFOTÓMETRO UV-
VISIBLE, es un instrumento que mide la ABSORBANCIA de una solución. Por lo tanto para medir
la concentración de un analito por este método es necesario que el analito (o un producto de
reacción del analito) tenga la propiedad de absorber radiación electromagnética (luz) en la región
del UV-visible.
Cuando un haz de luz monocromática (de determinada longitud de onda) atraviesa una solución, la
ABSORBANCIA es directamente proporcional a la distancia recorrida por la luz atravesando la
solución absorbente y a la concentración del analito en la solución. La distancia recorrida por la luz
atravesando la solución se denomina camino óptico y se mide generalmente en cm.
Son métodos, cuantitativos, de análisis químico que utilizan la luz para medir la concentración de
las sustancias químicas. Se conocen como métodos espectrofotométricos y según sea la radiación
utilizada como espectrofotometría de absorción visible (colorimetría), ultravioleta, infrarroja.

9
OBJETIVOS
Conocer y aplicar los fundamentos de la espectrofotometría para la determinación de
concentraciones en soluciones.
Conocer los fundamentos de la espectrofotometría y la ley de Lambert – Beer
Determinar el coeficiente de absortividad molar de soluciones acuosas de yoduro de potasio por
medio de una curva patrón
MATERIALES Y EQUIPOS
6 Tubos de ensaye de 15 mL
2 Pipetas graduadas de 5 y 1 mL
1 Gradilla
1Espectrofotrometro UV-Vis
6 celdas espectrofotométricas
DISCUSIÓN DE RESULTADOS

CUESTIONARIO
I. ¿Cuál es la diferencia entre absorbencia y transmitancia?
La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos indica la
cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T.
La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz transmitida
que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, It, y la cantidad de luz que incidió sobre
ella, Io, y se representa normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x 100
II. Construya un diagrama del espectro electromagnético en el que se muestre los
diferentes tipos de luz, especificando sus intervalos de longitud de onda respectivos.
III. ¿Qué es un espectrofotómetro? Mencione sus partes esenciales y su clasificación.
Un espectrofotómetro es un instrumento utilizado para medir la transmitancia/absorbancia de una
muestra, en función de la longitud de onda de una radiación electromagnética. En general, un
espectrofotómetro está compuesto de 4 partes principales: una fuente, un monocromador, un divisor
del haz, un área de muestra y un detector. También cuenta con elementos ópticos como lentes o
espejos, que transmiten la luz a lo largo de todo el equipo.
Hay varios tipos de espectrofotómetros, que son de absorción atómica, de absorción molecular (que
comúnmente se conoce como espectrofotómetro UV-VIS), y no debe ser confundido con un
espectrómetro de masa.
IV. ¿De qué depende el material de las celdas utilizadas en el espectrofotómetro?

10
Las celdas o cubetas que contienen las muestras deben fabricarse de un material que no interfiera
con la radiación que estamos utilizando, para la región del ultra violeta (bajo de 350 nm)
necesitamos cubetas de cuarzo, tales cubetas son sumamente costosas por lo que se necesita
manejar con cuidado. En la región de 350nm – 2000nm se tilizan cubetas de vidrio de silicato, el
plástico se puede utilizar en el visible (400nm – 800nm), el ancho mas común de una cubeta es de 1
cm.
V. ¿A qué longitud de onda se localiza el máximo de absorbencia de la solución de yodo
a la concentración correspondiente?
VI. ¿Qué relación presenta la absorbencia con la concentración en la curva patrón?
CONCLUSION
REFERENCIAS

11