CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA - IKIAM

INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA 1 “G01”

Estudiante : Nathaly Martinez
Docente: Junior Villa
Fecha del experimento: 13 de junio de 2023.

Parámetros a calificar (%) Calificación

Introducción y marco 20
teórico
Procedimiento 20
experimental
Resultados 20
Conclusiones 20
Recomendaciones 10
Bibliografía 10
Total 100 /100

1. TÍTULO DEL EXPERIMENTO:

TITULACIÓN DE AMINOÁCIDOS

2. OBJETIVOS:
 Determinas los pKa’s del aminoácido (aa) problema
 Identificar cual es el aminoácido desconocido.
 Comprobas por medio de la reacción de Sörensen que los aminoácidos se
comportan como iones dipolares.

3. INTRODUCCIÓN Y MARCO TEÓRICO:

Los aminoácidos son un grupo heterogéneo de moléculas que poseen unas
características estructurales y funcionales comunes. Existen veinte aminoácidos diferentes
especificados en el código genético, aunque hay otros aminoácidos menos frecuentes que
se forman por modificaciones enzimáticas posteriores al proceso de traducción. En las
células, estos veinte aminoácidos se unen mediante enlaces covalentes formando largas
cadenas de combinaciones específicas que producen un gran número de proteínas

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 diferentes. El tamaño puede ser muy variado, desde péptidos formados por un número
pequeño de aminoácidos hasta polímeros de una elevadísima masa molecular. La
disposición lineal concreta de los aminoácidos de una proteína constituye su secuencia
primaria y es esta secuencia la que va a determinar su estructura tridimensional específica
que es fundamental para que desempeñen su función. (Elena Feduchi Canosa, 2021)
Uno de los aspectos fundamentales en el estudio de los aminoácidos es su capacidad de
ionizarse, es decir, de ganar o perder un protón (H+). Esto se debe a la presencia del grupo
amino y del grupo carboxilo, que actúan como ácidos y bases, respectivamente. Las
titulaciones de aminoácidos son técnicas utilizadas para determinar los valores de pH en
los cuales los aminoácidos se encuentran en forma de zwitterion, es decir, con carga
positiva y negativa neutralizada.
La titulación es un método que consiste en la cuantificación de una solución de una
sustancia por medio de la reacción al equilibrio, con otro compuesto cuya concentración y
volumen se conocen, las titulaciones acido-base se pueden realizar empleando compuestos
indicadores del cambio de color. Si se emplean un potenciómetro, se pueden obtener los
valores de pH de la solución que se esté titulando, al agregar pequeños volúmenes de
titulante para posteriormente, mediante una gráfica (pH vs volumen agregado) obtener el
punto de equivalencia. (Guinto, 2014)
La metodología para realizar la titulación de aminoácidos incluye la preparación de la
muestra, comúnmente por medio de la hidrólisis acida o la digestión proteoilítica; la
dilución de la muestra con un tampón adecuado; y la derivatización de los grupos amino de
los aminoácidos con un agente reactivo específico. Los aminoácidos derivatizados se
titulan con una solución estándar de ácido o base, y el pH se mide después de cada adición
de reactivo. Se construye una curva de titulación de pH vs volumen de reactivo, y se utiliza
para determinar la pKa y el punto isoeléctrico de los aminoácidos analizados.

4. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:

Reactivos Cant. Materiales Cant. Equipos Cant.
HaOH 0.1 M 500ml Bureta de vidrio con 1 pH-metro de mesa 1
llave de teflón de 25
ml
HCL 0.1 M 250ml Soporte universal 1 Agitador 1
magnético de
laboratorio
L-Glutamina 0.1 100 Kit de micro pipetas 1

2
 ml
con sus puntas
Fenolftaleína 0,5%
Iman o magneto 1
pequeño
Pipeta 5 ml 1
Matraces aforados de 1
50ml y 100 ml
Pinza de bureta 1
5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
Teniendo en cuenta que los pK de los grupos funcionales de los aminoácidos se
encuentran localizados en distintos rangos de pH, es necesario realizar una titulación que
abarque prácticamente todo el rango de pH (ácido y básico) para cada aminoácido, Así, se
emplea una solución de HCL 0.5 M para los grupos carboxilo, y una solución de KOH 0,5
para los grupos amino. Dado que la histidina presenta el grupo ionizable imidazol en su
cadena lateral, es necesario también caracterizar su pKR. Por lo tanto, hay que realizar
cuatro valoraciones (dos por cada solución de aminoácido, una con ácido y otra con base).
Otra posibilidad es ajustar el pH de la solución desconocida.
1. Se preparó el área de trabajo seguidamente se encendio el pH-metro.
2. Se procedió con la calibración del pH-metro de 4 a 17,7°C, neutro= 7,03 a 18,01°C
3. Seguidamente, se midio el pH de una muestra de 20ml del aminoácido(fenilalanina)
y tambien se tomo en cuenta su temperatura.
4. Por ultimo después de conocer los valores del pH y temperatura se llevo a la
muestra a 1.5 de pH mediante la adicion de 200 uL

6. RESULTADOS:

7. PREGUNTAS POSIBLES Y RESPUESTA RESPECTIVA DEL

EXPERIMENTO EXPUESTO (MÍNIMO 4 PREGUNTAS):

1.¿Cuáles son los aminoácidos básicos? Escriba su estructura a pH ácido.

Los aminoácidos básicos son la lisina, arginina e histidina. A pH ácido, el grupo carboxilo
(-COOH) de estos aminoácidos se encuentra ionizado y el grupo amino (-NH2) no lo está.
Por lo tanto, su estructura sería:
Lisina: H2N-CH2-CH2-CH2-CH(NH2)-COOH

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Arginina: H2N-(CH2)3-CH(NH2)-C(NH)(NH2)-(CH2)3-CH2-COOH
Histidina: H2N-(CH2)3-C3H3N2(CO)-COOH

2. ¿Cuáles son los aminoácidos ácidos? Escriba su estructura a pH ácido.

Existen tres aminoácidos considerados ácidos: ácido aspártico, ácido glutámico y la
cisteína. A pH ácido, el grupo carboxilo (-COOH) de los ácidos está ionizado y el grupo
amino (-NH2) no lo está. Las estructuras de cada uno serían:
 Ácido aspártico: H2N-CH(R)-COOH con R = CH2-COOH
 Ácido glutámico: H2N-CH(R)-COOH con R = CH2-CH2-COOH
 Cisteína: HS-CH2-CH(NH2)-COOH (Calvo)

3. ¿Qué es el pKa? ¿Cómo se obtiene?

El pKa es una medida de acidez que indica la fuerza que tienen las moléculas de disociarse
en una solución, especialmente de un ácido débil. Se obtiene mediante el logaritmo
negativo de la constante de disociación ácida (Ka) de una molécula. En la práctica, se
puede determinar experimentalmente midiendo el pH de una solución que contiene un
ácido débil que está en equilibrio con su forma disociada y su forma protonada, y luego
usar esos datos para calcular su pKa. (Perez Porto, 2019)

4. En la gráfica de titulación de un aminoácido, con NaOH y HCl señale dónde se

localiza el pKa de cada grupo.

5. ¿Cómo determina el punto isoeléctrico de un aminoácido neutro, de uno ácido y de

uno básico?
Para determinar el punto isoeléctrico de un aminoácido neutro, se debe calcular el
promedio de los valores pKa del grupo carboxilo (-COOH) y del amino (-NH3+) del
aminoácido, y luego calcular el pH al cual la carga neta del aminoácido es cero.
Para determinar el punto isoeléctrico de un aminoácido ácido, se debe calcular solamente
el valor pKa del grupo carboxilo (-COOH) del aminoácido, y luego calcular el pH al cual
la carga neta del aminoácido es cero.
Para determinar el punto isoeléctrico de un aminoácido básico, se debe calcular solamente
el valor pKa del grupo amino (-NH3+) del aminoácido, y luego calcular el pH al cual la
carga neta del aminoácido es cero. (Timberlake, 2013)

4
6. ¿Cómo aplicaría la ecuación de Henderson-Hasselbach para preparar una solución
amortiguadora de pH4?
Para preparar una solución amortiguadora de pH4, primero se debe seleccionar un ácido
débil cuyo pKa (constante de disociación ácida) sea cercano a 4, la solución se puede
preparar mezclando el ácido débil con su base conjugada en una proporción adecuada.
Luego, se puede utilizar la ecuación de Henderson-Hasselbalch (pH = pKa + log [base
conjugada] / [ácido débil]) para calcular la cantidad exacta de ácido débil y su base
conjugada que se necesitan para conseguir el pH deseado de 4. (Mares, 2014)
7. ¿Cómo esperaría los resultados de la titulación de un aminoácido en presencia de
formol? ¿Por qué?
En presencia de formol 12, un aminoácido reaccionará con el grupo amino 1,
convirtiéndolo en una amina terciaria y afectando así la curva de titulación 1. Por lo tanto,
se espera que la forma ácida del aminoácido disminuya y la forma básica del aminoácido
aumente en la curva de titulación. El cambio ocurre debido a que el formol (formaldehído)
forma enlaces cruzados de hidrógeno con los grupos amino de los aminoácidos, resultando
en una menor ionización de los grupos amino.
1. CONCLUSIONES:
En base a las observaciones hechas por el grupo llegamos a diversas conclusiones:
Todos los aminoácidos son solubles en compuestos polares, algunos de estos son
parcialmente solubles en compuestos no polares y otras su solubilidad es nula.
Los aminoácidos son moléculas que como vimos anteriormente tienen diferentes estados
según el medio en que se encuentren, los aminoácidos cuando se encuentran en soluciones
acidas el grupo carboxilo se encuentra protonado al igual que el grupo amino; estos cuando
están en un medio alcalino se grupo carboxilo se encuentra desprotonado al igual que el
grupo amino; y cuando el aminoácido están en su punto isoeléctrico su grupo carboxilo se
encuentra desprotonado y el grupo amino protonado (estado bipolar).

2. RECOMENDACIONES:
 Calibración de equipos: Antes de comenzar la titulación, asegúrate de calibrar todos
los equipos e instrumentos que utilizarás, como pipetas, buretas, pH metros. Esto
garantizará mediciones precisas y resultados confiables.
 Investigación y consulta: Antes de realizar la titulación, investiga y consulta fuentes
adicionales de información sobre los aminoácidos y las técnicas de titulación

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 utilizadas. Esto te permitirá comprender mejor los conceptos detrás de la titulación
y te ayudará a interpretar y discutir tus resultados.
 Trabajo en equipo: Si estás trabajando en equipo, asegúrate de comunicarte y
colaborar de manera efectiva con tus compañeros. Asigna roles y responsabilidades
claras, y mantén una comunicación abierta durante todo el proceso de titulación.
 Realizar varias réplicas de las titulaciones para reducir la variabilidad en los
resultados.
 Realizar varias réplicas de las titulaciones para reducir la variabilidad en los
resultados.

3. BIBLIOGRAFÍA:

4. ANEXOS:

1. Limpieza del pH-metro

2.Medicion del pH-del

Aminoácido desconocido.