TIRULACIÓN DE AMINOÁCIDOS

ANGIE V. ORTIZ P. (349166) YISETH A. FERNANDEZ C.(361919) y CAROLINA BELLO G.

(331840)
Facultad de Ingeniería Ambiental, Universidad Pontificia Bolivariana
Km 7 Autopista a Piedecuesta, Floridablanca-Colombia.

Realizado: Entregado:

Resumen

En la siguiente practica se realizó la determinación del punto isoeléctrico de dos aminoácidos por medio de la
titulación, el cuales fueron la tirosina y el acido glutámico, se inició por la calibración de los equipos y la
preparación de las soluciones. La solución con la que inicialmente se trabajo fue el ácido glutámico con agua,
para la titulación se llenó la bureta con NaOH con 50 ml, la cual se agregó sucesivamente al aminoácido hasta
alcanzar un PH de 12. Se realizo una repetición con una nueva muestra de aminoácido (tirosina), pero
tomando como volumen inicial 0.5 Ml de NaOH hasta alcanzar nuevamente un pH de 12 y finalmente se
registraron los datos para así realizar la curva de titulación

Palabras claves:

Introducción 1. Marco teórico

Las unidades estructurales o monómeros de
las proteínas son los aminoácidos. En los
seres vivos se encuentran 20 aminoácidos
diferentes que poseen en común un grupo
carboxilo (-COOH) y un grupo amino (-NH2 )
en la posición alfa al respecto al carboxilo.
Sin embargo, estructuralmente se diferencian
entre si por una cadena lateral “-R”. Las
propiedades de cada aminoácido dependen
tanto de su grupo carboxilo, como el grupo
amino y la cadena lateral “-R”
Un aminoácido se caracteriza porque en una
misma molécula están presentes grupos
ácidos, capaces de ceder H+ y grupos básicos
capaces de captar H+. Por lo tanto, en medios
ácidos se comportan como bases y en medios
básicos se comportan como ácidos.
Las proteínas son macromoléculas
compuestas por unidades más pequeñas
conocidas como aminoácidos. En las
proteínas se encuentra básicamente veinte
aminoácidos diferentes, los cuales contienen
un grupo carboxilo y un grupo amino unidos
al mismo átomo de carbono (carbono α) estos
aminoácidos difieren unos de otros solo por la
naturaleza de sus cadenas laterales, o grupos
“R” que varían tanto en estructura, como en
tamaño y carga eléctrica e influyen en la
solubilidad en agua
Cada aminoácido tiene sus propio pK, puesto
que presenta diferentes sustituyentes en sus
cadenas laterales. Mediante una titulación, se
puede determinar el pK de un aminoácido
Titulación:
Es la adición de sucesivas cantidades de una
base un ácido fuerte, a una solución de ácido
o de base a titular, con la medición
simultánea de su pH, hasta el punto de
equivalencia en el cual los equivalentes de
ácido y de base se igualan. La curva de
titulación será bifásica. Habrá dos porciones
separada o inflexiones en la curva de
titulación. El punto medio de la primera
inflexión (B) es donde el aminoácido Volumen NaOH vs pH muestra 1
está mitad en forma ácida y mitad en forma 10
9
zwitterion. EL punto de inflexión C ocurre 8
cuando todo el aminoácido original ya está en 7
la titulacion se realizo con
forma de zwitterion. El pH al cual esto ocurre 6 se titulo NaOH la solucion
intervalos de 1,0 mL hasta
5 de aminoacido contenida
se denomina el pH isoeléctrico (punto 4 en el vaso precipitado
pasar el primer punto de
pKa
isoeléctrico) y se le da el símbolo pI 3
(asumiendo que el grupo “R” no tiene carga). 2
1
En la titulación de pH de un aminoácido con 0
un grupo no ionizable “R”, el punto de 0 1 2
Luego se registro los datos
3 4 5 6
La titulacion debe hacerse
equivalencia ocurre en la pI del aminoácido. de pH a medida que se
adicionaba la base
hasta llegar a un pH 12,0
En el punto medio de la segunda inflexión
(D), la mitad del aminoácido está en forma de
zwitterion y la otra mitad está en forma
básica. Se repitio el proceso para
vereficar el punto
isoelectrico, con la
2. Metodología diferencia que se hizo con
intervalos de 0,5 mL
a) Preparación de instrumentos y
soluciones
b) Realización de la titulación

Volumen Muestra Volumen Muestra

NaOH 1 pH NaOH 2 pH
mL mL
0 3,38 0 4,55
1 3,38 0,05 7,21
2 4,10 0,15 7,68
3 6,28 0,3 8,10
3,1 7,52 0,5 8,30
3,3 8,02 0,65 8,51
3,5 8,21 0,8 8,59
4 8,53
4,5 8,91
5 9,12

3. Resultados
Tabla 1. Datos obtenidos de la titulación del
aminoácido por duplicado

Figura 1. Curva de calibración de la muestra

1.
 segunda muestra la tirosina, con base a
Volumen NaOH Vs pH muestra 2 estos datos se realizo las curvas de
titulación para cada aminoácido , en la
10
figura 1 se encuentra la curva de titulación
9
de la muestra 1 donde se hallo el pl , con
8
sus respectivos pKa 1 y pKa 2 , así mismo
7
se hizo con el aminoácido en la figura 2 ,
6 mostrando un comportamiento similar ya
5 que los resultado de pl hallados por una
4 media aritmética se encuentran en valores
3 con poca diferencia entre ellos.
2
1
Como se sabe el punto isoeléctrico se
define como el pH en el cual el número de
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 cargas positivas es iguala al número de
Cálculos de pl Muestra 1. cargas negativas que aportan los grupos
ionizables de una molécula. En el punto
isoeléctrico la carga neta de la molécula es
cero (0). Para estas muestras seria en un pH
pKa 1+ pKa 2
pl= 6,25 para la muestra 1 y un pH 6,57 para la
2 muestra 2.
3,38+9,12 Ahora bien, comparando los puntos
pl=
2 isoeléctricos estándar de estos aminoácidos y
pl=6,25 los hallado en práctica es posible halla el
porcentaje de error en cada una de las
muestras.
Figura 2. Curva de calibración de la muestra
2.
%E=¿ teorico−experimental∨ ¿ ∗100 ¿
experimental

Cálculos de pl Muestra 1.

%E 1=¿3,22−6,25∨ ¿ ∗100 ¿
6,25
pKa 1+ pKa 2
pl= %E 1=48,5 %
2
4,55+8,59
pl=
2
%E 2=¿ 5,6−6,57∨ ¿ ∗100 ¿
6,57
pl=6,57
%E 2=14,8 %
4. Análisis

En la tabla 1. Se muestra los resultados de la Finalmente con los cálculos realizados

titulación de los dos aminoácidos , la muestra anteriormente se puede demostrar el margen
1 se encuentra el acido glutámico y la de error de cada uno de los aminoácidos ,
arrojando un valor de 48,5 % para el ácido
glutámico y un valor de 14,8 para la tirosina,
estas diferencias pueden llevarse a cabo por
mediciones mal hechas de pH en las
muestras.
carboxilo es atraído por el grupo amino (-
NH2), ya que al nitrógeno le sobraban
dos electrones de valencia, que está en
posición alfa y quedando este como
grupo amoníaco (-NH3+).

5. Conclusiones

En conclusión los dos aminoácidos

obtuvieron puntos isoeléctricos similares ,
comparando los valores teóricos con los
experimentales mostraron grandes % de error
respecto al primer aminoácido el cual fue el
ácido glutámico con un valor de 48,5 y la
tirosina de 14,8 , estos márgenes de error se
debieron , talvez a un mal manejo de
equipos , mal toma de datos o las condiciones
propiciaron los resultados pues en los dos
aminoácidos de manejaron diferentes
intervalos durante la titulación.
6. Preguntas de profundización
¿Porqué cada aminoácido tiene un Tabla de puntos isoeléctricos de
punto isoeléctrico característico? aminoácidos

El punto isoeléctrico es el pH al que un Fuente:http://www.quimitube.com/determinar-pk-

aminoacido-valoracion-acido-base
polianfólito tiene carga neta cero. El
concepto es particularmente interesante Bibliografía
en los aminoácidos y también en las
proteínas. A este valor de pH, la  http://www.quimitube.com/determi
solubilidad de la sustancia es casi nula. nar-pk-aminoacido-valoracion-acido-
base
Las moléculas complejas, tales como las
 http://depa.fquim.unam.mx/amyd/a
proteínas, se combinan con los iones
rchivero/AMINOACIDOSYPROTEINAS
hidrógeno y con otros iones presentes en
_25152.pdf
la disolución, dando lugar a la carga neta
e la molécula. A la concentración de  http://www.ehu.eus/biomoleculas/b
iones hidrógeno, o al pH, para el cual la uffers/buffer3.htm
concentración del ion híbrido de una
proteína es máxima y el movimiento neto
de las moléculas de soluto en un campo
eléctrico es prácticamente nulo, se le
denomina punto isoeléctrico.
Los aminoácidos pueden existir como sal
interna, llamada zwitterión. Esto ocurre
porque un protón del oxígeno del grupo