PRÁCTICA 7: ANALISIS DE FARMACOS (DETERMINACION SIMULTANEA

DE ACETOMINOFEN, ACIDO ACETILSALICILICO, Y CAFEINA EN UN

COMPRIMIDO)

Natalia Legarda 1; Dayana Lopez 2; Ingrid Pinza 3

Departamento de Ciencias Químicas, Facultad de Ciencias Naturales, Universidad ICESI.

Fecha de Realización: 16 de mayo de 2019

Fecha de Entrega: 30 de mayo de 2019

Durante la práctica se utilizó la cromatografía liquida de alta resolución (HPLC) como un

método analítico indirecto para la determinación de los principios activos (ácido
acetilsalicílico, cafeína y acetaminofén) de un comprimido farmacéutico (Sevedol). Cada
cromatograma se elaboró con 5 estándares cada uno con diferente concentración de
solución multicomponente la cual contenía (acetaminofén y ácido acetilsalicílico 1g/L y
cafeína 0.3 g/L). A partir de las áreas de cada uno de los 3 picos obtenidos en cada
cromatograma, se construyeron 3 curvas de calibración las cuales relacionan el área de cada
pico como respuesta analítica frente a la cantidad de principio activo presente en la
muestra. Finalmente por interpolación se determinó la cantidad de cada principio activo
presente en la muestra de Sevedol obteniendo de esta manera una concentración
experimental de 32.50 mg, 8.87 mg, y 24.4 mg correspondientes a un porcentaje de
32.50%, 8.87% y 24.4% para acetaminofén, cafeína y ácido acetilsalicílico
respectivamente. Al comparar el porcentaje de cada principio activo teórico con el
experimental se obtuvieron porcentajes de error de 2.7% para acetaminofén, 2.07%, para
cafeína y finalmente 26.97%. Para ácido acetilsalicílico

INTRODUCCION

El sevedol es un comprimido La industria farmacéutica está sometida a

farmacéutico que reúne las propiedades
analgésicas del acetaminofén, con la
actividad antiinflamatoria analgésica del
ácido acetilsalicílico, potencializadas por
la acción de la cafeína brindando así un
analgésico y antiinflamatorio potente
especialmente indicado en dolores
severos como la migraña (Pérez).
reglas de mercado que imponen unas
exigencias de calidad, por tanto es
fundamental realizar un control de calidad
para evitar de esta manera efectos
adversos y garantizar que el fármaco
desempeñe las funciones para las cuales
fue diseñado (Caro).
El control de calidad consiste en realizar
mediciones de parámetros del fármaco
determinando si los valores obtenidos
están en concordancia con unas
especificaciones preestablecidas
(Castellano). En la práctica se realizó
medición de los principios activos del
Sevedol mediante la técnica de HPLC
cabe destacar que el principio activo de
un fármaco son las sustancias a la cuales
se debe el efecto farmacológico de un
medicamento. La HPLC permite realizar
la cuantificación de los principios activos
de un fármaco mediante su naturaleza de
polaridad por tanto el descenso de cada
compuesto depende de la polaridad de
cada molécula. En la práctica se utilizó
una fase móvil polar y fase estacionaria
apolar por ende el orden en que eluyen
los principios activos del sevedol será del
mas polar hasta el menos polar el área del
pico en cada cromatograma es
proporcional a la concentración del
principio activo en la muestra.
CALCULOS Y RESULTADOS
RESULTADOS Y METODOLOGIA
Preparación de la fase móvil.
Se calculó la cantidad necesaria de fase
móvil para toda la práctica. Se elaboró la
solución A al 1% v/v de ácido acético
glacial en agua Mili-Q, disolviendo 10mL
de ácido acético glacial en 1L de agua. El
cálculo se muestra en la fórmula 1.
mLA . acetico glacial=( 1 % ) . (1000 mL )=10 mL
(1)
Posteriormente se realizó la solución B al
1% v/v de ácido acético glacial en
metanol grado HPLC, añadiendo 5mL de
ácido acético glacial en 500mL de
metanol grado HPLC. El cálculo se
muestra en la fórmula 2.
mLA . acetico glacial=( 1 % ) . (500 mL )=5 mL
(2)
Finalmente se preparó la mezcla de
Solución A y Solución B, en relación
65:35, fase móvil de trabajo.
Preparación de la solución
multicomponente
Se preparó 50 mL de solución
multicomponente con acetaminofén 1g/L,
ácido acetilsalicílico 1g/L y cafeína
0,3g/L.
Los cálculos para obtener los gramos para
preparar las tres soluciones se muestran
en las fórmulas 3, 4 y 5.
g acetaminofen= ( 10001 gmL ) . ( 50 mL)=0,05 g
(3)
g A . acetilsalisilico= ( 10001 gmL ) . (50 mL )=0,05 g
(4)
0,3 g
g cafeina= ( 1000 mL )
. ( 50 mL )=0,015 g
(5)
Esta solución se enrazo con fase móvil.
Curva de calibración
Se preparó una curva de calibración a
partir de la solución multicomponente
tomando: 0,125 - 0,25 - 0,5 - 0,75 y 1 mL
y llevando al volumen con fase móvil
hasta 25 mL. Los cálculos para las nuevas
concentraciones obtenidas se muestran a
continuación, utilizando y despejando la Posteriormente, se tomó y se llevó una
fórmula 6. alícuota de 1 mL a un balón aforado de 25
mL y se llevó al volumen con fase móvil.

Los pesos de las patillas y su promedio se

C 1 V 1=C 2 V 2 muestran en la tabla 1.
(6)

C1 V 1 Tabla 1. Pesos de las pastillas y

=C 2(7)
V2
Para acetaminofén y Ácido acetil
Salicílico son iguales puesto que se parte
de una misma concentración, a
continuación, se muestra el cálculo
promedio.
Peso pastilla 1 (g) 0,7200
Peso pastilla 2 (g) 0,7259
Peso pastilla 3 (g) 0,7273
Peso pastilla 4 (g) 0,7210
Promedio 0,7236

1000 ppm ∙ 0,125ml Procedimiento

C 1= =5 ppm
25 ml
Antes de inyectar cualquier soluto se dejó
(8) correr fase móvil, a un flujo de 2 mL/min
por aproximadamente 15 minutos.
Con estos cálculos se obtuvieron las 5
concentraciones que corresponden a 5,
Tanto las solución stock, la curva de
10, 20, 30, y 40 ppm para los respectivos
calibración y la muestra, se filtraron a
volúmenes.
través de la membrana de poro de 0,2
micras, y se inyectaron en el
Para la cafeína: cromatógrafo para determinar los tiempos
de retención de cada componente.
300 ppm ∙ 0,125 ml Finalmente, se inyectó y filtró cada una
C 1= =1.5 ppm de las soluciones patrones de la curva de
25 ml
(9) calibrado, una pequeña cantidad de la
muestra para ser inyectada en el
Con estos cálculos se obtuvieron las 5 cromatógrafo.
concentraciones que corresponden a 1.3,
3, 6, 9, y 12 ppm para los respectivos Se obtuvieron los siguiente gráficos,
volúmenes. donde se representa las áreas del pico
cromatográfico vs el tiempo de retención
para los estándares, los compuestos y la
Preparación de la muestra muestra.

Se pesaron 4 comprimidos y se determinó

el peso promedio de estos, se maceraron y
se pesó 0,1 g de muestra en un beaker de
50 mL y se disolvió con fase móvil, se
filtró, se llevó a un matraz aforado de 100
mL llevando al volumen con fase móvil.
 Grafica 5. Patrón estándar 5. (Dilución
Grafica 1. Patrón estándar 1. (Dilución 1mL)
0,125mL)

Grafica 2. Patrón estándar 2. (Dilución Grafica 6. Muestra.

0,25mL)
Las áreas de los picos cromatográficos
para cada solución patrón se registraron
en la tabla 2 para el acetaminofén, en la
tabla 3 para el ácido acetilsalicílico y en
la tabla 4 para la cafeína.

Tabla 2. mAU Acetaminofén.

Concentración Área (mAU)
(ppm)
5 127105
Grafica 3. Patrón estándar 3. (Dilución 10 480556
0,5mL) 20 601185
30 948717
40 1255872

Tabla 3. mAU Cafeína

Concentración Área (mAU)
(ppm)
1,5 115144
3 428280
6 526982
Grafica 4. Patrón estándar 4. (Dilución 9 842444
0,75mL) 12 1132838
Tabla 4. mAU Ácido acetilsalicílico. Curva de calibracion Area (mAU) vs Concentración (ppm)
Concentración Área (mAU) A. acetilsalicílico
(ppm) 700000
5 63872 600000

Area (mAU)
500000 f(x) = 14395.83 x + 21644.68
10 223748 400000 R² = 0.97
20 275586 300000
200000
30 451167 100000
0
40 605413 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
Concentración (ppm)
Se realizó la curva de calibración para
cada compuesto con los datos registrados Grafica 9. Curva de calibración Área
en las tablas 2, 3 y 4. (mAU) vs Concentración (ppm) Ácido
acetilsalicílico.
Curva de calibracion Area (mAU) vs Concentración (ppm)
Acetaminofén Determinación de acetaminofén
1400000
1200000
f(x) = 29852.49 x + 55784.76 A partir de la gráfica 7 se puede obtiene
1000000
Area (mAU)

800000
R² = 0.97 la ecuación de la recta que modela esta
600000 gráfica, la cual corresponde a:
400000
200000
0 y=29852 x +55785(10)
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
Concentración (ppm)
Grafica 7. Curva de calibración Área Para la determinación de acetaminofén en
(mAU) vs Concentración (ppm) la muestra se despeja la ecuación anterior
acetaminofén. con “x” siendo la concentración y “y” el
área obtenida para la muestra con la
ayuda de la gráfica 6 la cual es 443823
Curva de calibracion Area (mAU) vs Concentración (ppm)
Cafeína mAU. Así:
1200000
1000000 f(x) = 89534.76 x + 45068.59 [ Acetaminofen ]= 443823−55785 =12.99 ppm
R² = 0.97 29852
Area (mAU)

800000
600000 (11)
400000
200000
Al aplicar el factor de dilución al valor
0
0 2 4 6 8 10 12 14 anterior y relacionando el peso de
Concentación (ppm) acetaminofén con el pesado en la solución
inicial se determina el porcentaje de
Grafica 8. Curva de calibración Área
acetaminofén así:
(mAU) vs Concentración (ppm) Cafeína

25 mL
12.99 ppm . =324.98 mg/ L(12)
1 mL

mg
324.98 .0.1 L=32.50 mg (13)
L
32.50 mg
.100=32.50 %(14)
100 mg 8.69−8.87

Finalmente, se calcula el porcentaje de

%error= [ 8.69 ]
. 100=2.07 % (24)

error utilizando el valor teórico de

concentración de acetaminofén el cual se Determinación de ácido acetilsalicílico.
muestra a continuación:
y=14396 x +21645(25)
250 mg .100
%Acetaminofen= =33.41% (
748.3 mg [ A . acetilsalisilico ] = 162211−21645 =9.76 ppm
15) 14396
(26)
vteo−vexp
%error= [ vteo ]
. 100(16) 9.76 ppm .
25 mL
1mL
=244.1 mg /L (27)

33.41−32.50
%error= [ 33.41 ]
. 100=2.7 %
244
mg
L
.0 .1 L=24.4 mg (28)
(17)
24.4 mg
.100=24.4 %(29)
De igual manera que para la 100 mg
determinación de acetaminofén se
realizan los cálculos para la cafeína y el 250 mg .100
%A. acetilsalisilico= =33.41 %
ácido acetilsalicílico: 748.3 mg
(30)
Determinación de Cafeína
33.41−24.4
y=89535 x + 45069(18) %error= [ 33.41 ]
.100=26.97 %
(31)
[ Cafeina ] = 362891−45069 =3.55 ppm(19
89535 ANALISIS DE RESULTADOS
)
Se realizó la determinación de los
25 mL principios activos de un comprimido
3.55 ppm . =88.74 mg/ L(20)
1 mL farmacéutico (Sevedol), mediante
cromatografía liquida de alta eficiencia,
mg basándose en las diferencias en la
88.74 .0 .1 L=8.87 mg (21)
L velocidad de migración entre los
componentes de la fase móvil. Para este
8.87 mg análisis se realiza cromatografía en fase
.100=8.87 % (22)
100 mg
reversa, que consiste en una fase
65 mg .100 estacionaria apolar (sílica) y una fase
%Cafeina= =8.69 %(23) móvil de polaridad moderada (mezcla de
748.3 mg
MeOH:AcOH:H2O), puesto que la fase
móvil debe disolverse con el analito, esta
debe presentar la misma polaridad del
analito. [ CITATION Ele11 \l 3082 ]
El principio de este procedimiento es que
las partículas apolares se unen a la matriz
solida apolar y son retenidas en esta, las
partículas de polaridad media son muy
poco retenidas por y las partículas polares
son rechazadas y eluidas con el flujo de la
fase movil. Como consecuencia de las
movilidades de los analitos por la fase
estacionaria, se obtienen bandas o zonas
que son detectadas en los cromatogramas.
La posición de los picos en este diagrama
se pueden utilizar para identificar los
componentes de la muestra.[ CITATION
Hoy16 \l 3082 ]
A partir de los cromatogramas obtenidos
es posible observar que el primer
compuesto en eluir con la fase móvil es el
acetaminofén que es el primer pico
observado a la izquierda, el segundo es la
cafeína y por ultimo ácido acetil
salicílico. Esto se explica porque la
cafeína cuenta con varios enlaces N-C
cuyos átomos difieren en
electronegatividad y la hace más polar
que el acetaminofén que cuenta con dos
puentes de hidrogeno y por último se
tiene ácido acetil salicílico que es el más
apolar debido a que cuenta con un grupo
carboxilo[ CITATION Jos13 \l 3082 ]
Para determinar la concentración de estos
compuestos en el comprimido
farmacéutico se realizó una curva de
calibración. Para esto se preparó una
solución multicomponente que fueron los
patrones y se llevó al equipo de HPLC
junto con la muestra. A partir de estos
análisis se obtuvieron los cromatogramas,
el área bajo los picos proporciona una
medida cuantitativa de la cantidad del
analito[ CITATION Ele11 \l 3082 ], con este
dato y las concentraciones de los patrones
se obtuvieron las curvas de calibración
para acetaminofén, cafeína y ácido acetil
salicílico que se muestran en las gráficas
7, 8 y 9 respectivamente. Con las
ecuaciones de la recta de las gráficas y el
área bajo la curva del cromatograma de
las muestras se obtuvieron las
concentraciones de los analitos y los
porcentajes de error.  Según esto, se
obtuvieron resultados satisfactorios, ya
que las ecuaciones de regresión en los tres
casos tuvieron elevados coeficientes de
correlación lineal, y porcentajes de error
relativamente bajos, a excepción del ácido
acetil salicílico que fue de 26,97%, este
error puede estar relacionado a la mala
preparación de la muestra durante la
práctica, por ejemplo una mala filtración
que no elimino por completo las
partículas que podían obstruir el
instrumento, ocasionando un dato
erróneo[ CITATION Wat19 \l 3082 ].
CONCLUSIONES
 La técnica HPLC es una técnica
precisa y reproducible puesto que
permitió la construcción de una
buena curva de calibración y
medición aceptable de los
principios activos del sevedol con
porcentajes de error bajos para
cafeína y acetaminofén y
 relativamente alto para acido
acetilsalicílico

 La buena filtración garantiza la

obtención de resultados adecuados
para la técnica, aunque se realiza
todos los pasos necesarios para
obtener un buen filtrado es
imposible obtener un filtrado sin
moléculas que puedan obstruir el
instrumento

 La obtención de buenos resultados

atravez de HPLC requiere de
realizar cada uno de los pasos del
proceso muy minuciosamente para
evitar errores experimentales
puesto que el papel del analista es
fundamental en esta técnica

BIBLIOGRAFÍA

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https://www.waters.com/webassets