CUANTIFICACIÓN DE ACETAMINOFÉN POR HPLC

1
Raúl Orjuela Morales; 1 Diego Andres Gonzalez Moya; 1 Olga Patricia Muñoz; 1Daniela Lozano Cubides
2
Juan David Parra Ducuara
1,2
Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales - UDCA
1
Estudiantes Química Instrumental - VI semestre, 2 Profesor

Bogotá, D. C., 01 de Septiembre 2022

RESUMEN: Inicialmente se realizó las soluciones stock tanto para el paracetamol en una concentración de
100ppm, continuamente se realizaron los patrones de cada muestra, con esta solución en una concentración de 1
ppm, 2 ppm, 3, ppm, 5 ppm, 7 ppm, 8 ppm, 9 ppm, y 10 ppm todo en volúmenes de 50 mL, posteriormente se
realizó la solución de las muestras problema en donde la primer muestra fue una tableta, el pesó de esta fue de
567 mg, luego se trituró y se disolvió en un balón de 250 mL, se aforó al volumen de 250 mL, de esta solución
se tomó una alícuota de 1 mL y se transfirió a un balón de 50 mL y de esta solución se tomó una alícuota de 5
mL y se llevó a un balón de 50 mL, se filtró y se llevó al vial para cromatografía. Por otro lado, la segunda
muestra a cuantificar fue Acetaminofen 150mg/5mL jarabe. De esta muestra se tomó 1 mL de jarabe, se
transfirió a un balón de 50 mL, luego de esta solución se tomaron 5 mL en un balón de 50 mL, de esta
solución resultante se tomó una alícuota de 5 mL en un balón de 50 mL, esto con el objetivo de preparar las
muestras de manera que se encontraran dentro del rango de la curva de calibración. Luego de filtrar cada una de
las muestras se llevaron al equipo de cromatografía y se establecieron las condiciones de análisis para la
cuantificación del principio activo Acetaminofén en muestras comerciales en formas farmacéuticas sólidas y
líquidas.

PALABRAS CLAVE: Dilución, Cromatografía, Curva de Calibración, Cuantificación.

ABSTRACT: Initially, stock solutions were made for both paracetamol at a concentration of 100ppm,
patterns for each sample were continuously made, with this solution at a concentration of 1ppm, 2ppm, 3ppm,
5ppm, 7ppm, 8ppm. , 9 ppm, and 10 ppm all in volumes of 50 mL, later the solution of the problem samples
was made where the first sample was a tablet, the weight of this was 567 mg, then it was crushed and dissolved
in a balloon of 250 mL, it was calibrated to the volume of 250 mL, from this solution an aliquot of 1 mL was
taken and transferred to a 50 mL balloon and from this solution an aliquot of 5 mL was taken and taken to a
50 mL balloon. mL, filtered and taken to the vial for chromatography. On the other hand, the second sample to
be quantified was Acetaminophen 150mg/5mL syrup. From this sample, 1 mL of syrup was taken, transferred
to a 50 mL flask, after this solution 5 mL were taken in a 50 mL flask, from this resulting solution an
aliquot of 5 mL was taken in a 50 mL flask. mL, this in order to prepare the samples so that they are within
the range of the calibration curve. After filtering each of the samples, they were taken to the chromatography
equipment and the analysis conditions were established for the quantification of the active ingredient
Acetaminophen in commercial samples in solid and liquid pharmaceutical forms.

KEYWORDS: Dilution, Chromatography, Calibration Curve, Quantification.

Introducción Datos tabulados, cálculos, resultados y
discusión de resultados (análisis):
La cromatografía líquida de alta resolución
es el tipo de cromatografía por elución más 1. Determinación del Contenido de
versátil y más utilizado. La técnica es Acetaminofén
utilizada por científicos para separar y
determinar especies en una variedad de Resultados cromatogramas:
materiales orgánicos, inorgánicos y
biológicos. En la cromatografía líquida, la
fase móvil es un disolvente líquido que
contiene a la muestra en forma de una
mezcla de solutos. Los tipos de
cromatografía líquida de alta resolución
suelen clasificarse con base en su
mecanismo de separación o según el tipo de
fase estacionaria.

En el pasado, la cromatografía líquida se

llevaba a cabo en columnas de vidrio que Figura 1. Línea Base
tenían diámetros interiores de entre 10 y 50
mm. Las columnas se empacaban con
partículas sólidas con una longitud de 50 a
500 cm, las cuales estaban cubiertas con un
líquido adsorbido que formaba la fase
estacionaria. La cromatografía líquida de
alto rendimiento (HPLC) es una de las
técnicas de cromatografía más utilizadas
debido a su capacidad de separar analitos
de distinta naturaleza presentes en una
mezcla. Su aplicación industrial abarca la Figura 2. Estándar 1 ppm
farmacéutica, la bioquímica, los alimentos,
los productos de la industria química, la
medicina clínica y la química forense. La
HPLC es uno de los tantos métodos de
cromatografía para la separación y análisis
de los componentes químicos de una
mezcla. Básicamente, en este método
participan las fases móvil y estacionaría
(inmiscibles entre sí) y la muestra de interés.
La fase móvil es líquida y su función es
llevar la muestra a través de la fase
estacionaría, que puede ser sólida o una Figura 3. Estándar 2 ppm
película líquida soportada en un sólido
inerte.
Figura 3. Estándar 3 ppm Figura 7. Estándar 9 ppm

Figura 4. Estándar 5 ppm Figura 8. Estándar 10 ppm

Figura 5. Estándar 7 ppm

Figura 9. Curva de Calibración

Muestra Peso Área

Tableta 567 mg 2577012

Jarabe 1 mL 3787940
Tabla 1. Datos de la Muestra.

Figura 6. Estándar 8 ppm

 Concentración Área
(ppm) Cromatografía
1 771724
2 1570934
3 2358211
5 3152342
7 4413279
8 5031138
9 5660030
10 6282633
Tabla 2. Relación Concentración vs Área
Análisis y Discusión de Resultados:
A partir de acetaminofén grado analítico se
preparó una solución estándar para
posteriormente diluirla y construir la curva
de calibración.
Cantidad necesaria de acetaminofén
analítico para preparar 100 ml de solución a
100 ppm:

● Condiciones Cromatográficas

Parámetro Especificación
Columna LiChrospher RP-18 Se disolvió 10 mg de acetaminofén en 5 ml
Metanol : Agua de metanol y se completó hasta el aforo en
Fase Móvil
1:3 un matraz de 100 mL.
Flujo 1mL / min
Volumen de inyección 5μL Se realizaron 8 soluciones patrón de 1,0 a
Longitud de Onda 243 10,0 ppm a partir de una solución de 100
Diluente Fase Móvil ppm.

● Cálculos

Tabla 1. Datos de [ ] y Área bajo la curva

C1. Concentración Tableta 500 mg

Con los datos anteriores se realizó una

gráfica por extrapolación para determinar la
concentración de la muestra problema

Gráfica 1. Curva de calibración para el

acetaminofén

C2. Concentración Jarabe Acetaminofen 150 mg/ 5 mL

Se determinó la siguiente ecuación de la
recta:

Concentración de acetaminofén en el
jarabe:

Con los datos obtenidos de área bajo la

curva para las muestras problemas
obtenemos la concentración de
acetaminofén en las disoluciones, luego
multiplican las concentraciones obtenidas
por el factor de dilución y así hallamos la
concentración de acetaminofén en el jarabe
original:

Concentración de acetaminofén en la
tableta:
Ahora utilizamos el factor de dilución:
La concentración de acetaminofén tableta,
se encuentra dentro del criterio de
aceptación indicado por la USP:
USP Acetaminofén:
Discusión:
Para la determinación de acetaminofén
llevada a cabo se tiene en cuenta su
polaridad por lo cual, es afín a sustancias
polares, razón para realizar la cromatografía
de fase inversa en donde se utiliza una fase
estacionaria apolar y una fase móvil polar.
Los errores en los resultados se deben
principalmente al mal uso que se le puede
dar las pipetas y al mal uso del equipo al
momento de inyectar la muestra, a la
dificultad que se tenga en el manejo de la
muestra, para que a la hora de diluirla
muestra tomada sean las muestras exactas
las que se necesita y no más ni menos
porque al final las diferencias no se notaron
en los resultados obtenidos ya que tuvieron
similitud entre sí.
Figura 1. Representación esquemática de
un equipo de HPLC
Para que la fase móvil se desplace a través
de la columna y los demás componentes,
los equipos emplean un sistema de bombeo.
Un limitante en la precisión de las medidas
es la reproducibilidad que se puede
introducir la muestra en la columna. La
dificultad es por el ensanchamiento de
banda que acompaña a la sobrecarga de las
columnas. Los volúmenes son muy
pequeños (de unas pocas décimas de micro
litro).
El cromatógrafo emplea un bucle de
muestra (ver figura 2), éste dispositivo nos
permite la elección de tamaños de muestra
que van desde 5 a 500 μL. La muestra se
introduce en el bucle mediante una
microjeringa que toma un volumen (en este
caso 10 μL) y lo traslada al cromatógrafo.
Figura 2. Representación esquemática de
un bucle de muestra.
 Es necesario tener cuidado especial con la
fase móvil utilizada, la cual no puede
contener gases, que afectarían seriamente
el equipo pudiendo dañarlo, para su
eliminación se usa principalmente el filtrado
al vacío.

Es posible la utilización de distintos tipos de

detectores, siendo los más comunes el
UV-Vis y el infrarrojo, la utilización de un tipo
de detector en especial depende del analito.

Referencias Bibliográficas:

1. Skoog,D. West,D. Holler,J.

Crouch,S.(2005), fundamentos de Química
analítica 9a. edición.

2. Christian, 2009) “ Química Analítica'' Sexta

Edición.

3. Fundación Universidad de América Revista

Semilleros: Formación Investigativa, Vol. 4
N° 1, Enero – Diciembre de 2018.
Conclusiones:

La aplicación de métodos analíticos es cada

vez más necesario en el campo de análisis
farmacéutico por ello el desarrollo de
técnicas que permitan realizar el aislamiento
del o los analitos de interés previo a la
determinación instrumental ha ganado
bastante terreno en la química analítica.

El método validado presentó una buena

linealidad entre las concentraciones
empleadas en la práctica, como así mismo
resultó preciso, exacto y selectivo para el
principio activo ensayado.

Es muy importante filtrar los solventes a

utilizar, ya que se pueden encontrar
partículas disueltas en ellos que afecten el
resultado o dañen el instrumento.