UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA DE BIOLOGÍA

LAB. DE QUÍMICA ORGÁNICA

Pedro Cabello. CI 18182901

PRÁCTICA #5: CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

OBJETIVOS:

 Conocer el uso de la técnica de Cromatografía de Capa Fina.

 Comprobar el poder de separación y analítica de la cromatografía de capa fina.
 Conocer la variación de los valores del parámetro RF para sustancias de estructuras y
polaridades distintas con el uso de disolventes de diferentes polaridades.
 Determinar las condiciones de separación de los componentes del extracto de los
colorantes de la zanahoria y el tomate.

INTRODUCCIÓN:

La cromatografía es una técnica que permite la separación de los componentes de una mezcla
debido a la influencia de dos efectos contrapuestos. Retención, efecto producido sobre los
componentes de la mezcla por una fase estacionaria; desplazamiento, efecto ejercido sobre los
componentes de la mezcla por una fase móvil, que puede ser un líquido y un gas.

Al fenómeno de migración de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase

estacionaria, impulsados por la fase móvil, se le llama elución. La mezcla a separar se deposita
sobre la fase estacionaria, mientras que la móvil atraviesa el sistema desplazando a los
componentes de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus
interacciones relativas con ambas fases. Las dos fases se eligen de forma que los componentes
de la mezcla se distribuyan de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria.
Aquellos compuestos que son más fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven
lentamente por el flujo de la fase móvil; por el contrario los componentes que se unen
débilmente, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad los
compuestos se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o
cuantitativamente.

Según el tipo de interacción que se establece entre los componentes de la mezcla y la fase
móvil y estacionaria, podemos distinguir entre cromatografía de adsorción, donde la fase
estacionaria es un sólido polar capaz de adsorber a los componentes de la mezcla mediante
interacciones de tipo polar y, cromatografía de partición donde la separación se basa en la
diferencia de solubilidad de los componentes de la mezcla en la fase estacionaria y móvil, que
son ambas liquidas.

La cromatografía en capa fina, es una técnica que se basa en la preparación de una capa,
uniforme de un absorbente mantenido sobre una placa, la cual es de vidrio. La fase móvil es
un líquido y la fase estacionaria es un sólido. La fase estacionaria será un componente polar y
el eluyente será por lo general menos polar que la fase estacionaria de modo que los
componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares

La mezcla a analizar se deposita a una pequeña distancia del borde inferior de la placa y se
introduce en una cámara que contiene la fase móvil, esta asciende a lo largo de la placa por
capilaridad, desplazando a los componentes de la mezcla a diferentes velocidades, lo que
provoca su separación. Cuando el frente del disolvente se encuentra próximo al extremo
superior de la placa esta se saca y se visualiza.

La relación entre la distancia recorrida por un compuesto y por el disolvente desde el origen,
se conoce como Rf, y se define por la siguiente fórmula:

Rf= Distancia recorrida por el compuesto / Distancia recorrida por el disolvente

La búsqueda del eluyente requiere probar con varios disolventes de diferente polaridad o con
mezclas. Para compuestos pocos polares, que se desplaza con mucha facilidad, se debe utilizar
un disolvente apolar como el hexano y en el caso de compuesto de polaridad media, mezclas
de hexano y acetato de etilo. Se debe tener una cámara de revelado que servirá para visualizar
aquellos compuestos que sean incoloros o cuya separación sea difusa.

METODOLOGÍA:

1.- Preparación de las placas.

Para la preparación de dichas placas se emplearon portaobjetos de vidrio previamente

lavados, y carentes de irregularidades o imperfecciones en la superficie del vidrio. Luego, tras
la colocación en parejas de los portaobjetos, y manteniendo en contacto una cara del
portaobjeto con una cara del otro portaobjeto mientras se dejaban expuestos los otros lados
de las placas, se procedió a sumergirlos en gel de sílice del laboratorio, el cual fue preparado
originalmente a partir 35 g de Sílica y 75 mL de Cloruro de Metileno. Una vez sumergidos los
dos portaobjetos, y al verificar que se secase el gel de sílice a temperatura ambiente y se
mantuviese una capa del mismo homogénea a través del vidrio, se separaban los portaobjetos
obteniendo así dos placas listas para cromatografía. Este proceso se repitió hasta alcanzar diez
placas preparadas.

Posterior a la preparación de los soportes, se les fue sembrado a estas placas algunas muestras
de compuestos, los cuales se encontraban mezclados con Benceno o Cloroformo ya fuese el
caso, empleando un tubo capilar para tomar una pequeña porción de dicha mezcla y colocarla
en la placa a aproximadamente a 0,5 cm del borde inferior de la placa. Los compuestos
utilizados con Benceno fueron: Benzofenona y Benzhidrol, preparando dos placas, la primera
de ellas con una muestra de cada compuesto, y en la segunda placa una muestra de la mezcla
de ambas soluciones; de forma semejante, con Cloroformo se prepararon soluciones de
Benzofenona, trans-estilbeno y Benzhidrol, preparando otras dos placas, la primera de ellas
con una muestra de cada compuesto, y en la segunda placa una muestra de la mezcla de las
tres soluciones.

2.- Preparación de las cámaras de desarrollo.

Empleando un Beacker de 400 mL como cámara de desarrollo, se procedió a la utilización de

una tira de papel de filtro que cubrió dos tercios de las paredes internas del beacker, y luego se
le vertieron pequeñas cantidades de Benceno hasta que el papel de las paredes se encontraba
húmedo por efecto de este disolvente y se formó un pequeño fondo del mismo en el
recipiente, el cual no superaba los 0,5 cm de altura. Este proceso se repitió una vez más para
generar una cámara de desarrollo empleando Cloroformo como disolvente; totalizando dos
cámaras de desarrollo una de Benceno y otra de Cloroformo como disolvente.

3.- Desarrollo de la Cromatografía de Capa Fina, con Benceno y Cloroformo como disolvente.

Una vez preparadas las placas con las muestras y la cámara de desarrollo se procedió a la
cromatografía, introduciendo la placa con Benzofenona y Benzhidrol dentro de la cámara con
benceno como disolvente, la placa se introdujo de forma vertical y con cuidado de que las
muestras no entrasen en contacto directo con el disolvente del fondo, una vez ubicado dentro
de la cámara se permitió el ascenso del disolvente a través de la placa por capilaridad y al
alcanzar la altura máxima del gel de sílice se transportó la placa a una cámara de gases de Iodo
para revelar la cromatograma y realizar las mediciones de los recorridos de los compuestos; así
mismo con el Benceno se realizó otra cromatografía con la placa que contenía la mezcla de los
compuestos de Benzofenona y Benzhidrol, realizando los mismos pasos para su realización.

De la misma manera que se trabajó la cámara de benceno se trabajo la de cloroformo,

introduciendo una placa con muestras por cromatografía dentro de la cámara de desarrollo
con cloroformo, pasándolo luego a la cámara de vapores de Iodo para revelar el
cromatograma, y realizando las mediciones de los recorridos realizados por los compuestos.

Finalmente al obtener los valores de las distancias recorridas, se procedió al cálculo de los
valores RF para cada sustancia en cada disolvente y posteriormente se compararon para
visualizar cual de los dos disolventes era el más apropiado para esta separación. El Cálculo del
Valor RF se llevo a cabo a través de la relación:

RF = dist. recorrida por el compuesto / dist. recorrida por el disolvente

4.- Comprobación del poder separador y analítico de la cromatografía de capa fina.

Tras la selección del disolvente más apropiado, se procedió a preparar la siguientes soluciones:
(A) Trans-estilbeno+Benzofenona, (B) Trans-estilbeno+Benzhidrol, (C) Benzofenona+Benzhidrol
y (D) Trans-estilbeno+ Benzofenona+Benzhidrol, y con la ayuda de un tubo capilar se colocaron
en una primera placa previamente preparada, tres muestras, de las sustancias A, B y C,
respectivamente; en una segunda placa previamente preparada se agrego una muestra de la
sustancia D. Y, luego, se realizó la técnica de cromatografía y cálculo de los valores RF según los
pasos explicados anteriormente.

RESULTADOS Y DISCUCIÓN:
 Una vez realizados las primeras cromatografías, donde se utilizaron Trans-estilbeno,
Benzofenona y Benzhidrol, con Cloroformo y con Benceno como disolvente se arrojaron los
siguientes resultados:

BENCENO CLOROFORMO
Recorrido Recorrido Recorrido Recorrido
del del del del
Compuesto RF RF
compuesto disolvente compuesto disolvente
(cm) (cm) (cm) (cm)
Benzofenona 3,4 4,7 0,72 3 3,7 0,81
Benzhidrol 3,2 4,7 0,68 2,8 3,7 0,76
Trans-estilbeno - - - 3,5 3,7 0,95

En base a esto, se evidencia la mayor atracción de los compuestos por un disolvente no polar
como el cloroformo, el cual arrastró una mayor distancia a cada uno de los compuestos
ubicadas en la placa.

BENCENO CLOROFORMO
Recorrido Recorrido Recorrido Recorrido
del del del del
Compuesto RF RF
compuesto disolvente compuesto disolvente
(cm) (cm) (cm) (cm)
Benzofenona +
Benzhidrol +
Trans-estilbeno - - -

Para las mezcla de soluciones realizadas, se mantuvo una mayor atracción sobre los
compuestos por parte del cloroformo, donde a pesar de encontrarse mezclados se
comportaron de manera muy semejante a la cromatografía anterior donde se encontraban los
compuestos por separado, reflejando que la técnica permite una separación de los
compuestos la cual es verificable y repetible a través de distintos experimentos.

Luego de la evaluación de los resultados, fue tomada la decisión de utilizar como disolvente el
cloroformo, que generó mayor atracción en los compuestos utilizados a pesar de mantener
aproximadamente el mismo nivel de separación, por tal motivo para la siguiente cromatografía
se utilizó este disolvente.

Recorrido del Recorrido del

Compuesto RF
compuesto (cm) disolvente (cm)
Trans-estilbeno+Benzofenona 2,8 3,7 0,76
Trans-estilbeno+Benzhidrol 3 3,7 0,81
Benzofenona+Benzhidrol 3,2 3,7 0,86
Trans-estilbeno+ 2,8 3,2 0,86
Benzofenona+Benzhidrol

CONCLUSIONES:
 Cromatografía en capa fina es una técnica muy sencilla que funciona a partir de la
afinidad o repelencia de los compuestos con las distintas fases del proceso a partir de
muy pequeñas cantidades de muestra.
 El uso de dicha técnica permite la separación de compuestos, pudiendo así conocer la
pureza de las sustancias con las que se trabaja.
 El uso de esta técnica permite conocer el comportamiento que pueden tener los
diferentes compuestos con respecto a los disolventes que se quieran utilizar.