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EQUIPO N 7:
GRUPO: 2305
03/MARZOO/2017
Cromatografa en capa fina y en columna para el chile guajillo
RESUMEN
A una muestra de chile guajillo se le realiz cromatografa en capa fina con varios eluyentes
(diclorometano, ter de petrleo, cloroformo, acetato de etilo, hexano, metanol acetona, tolueno)
para elegir el o los que ms pigmentos separara, as como su proporcin y polaridad y pasar la
cromatografa a columna con los disolventes adecuados para eluir la mayor parte de pigmentos y asi
obtenerlos cada uno por separado.
INTRODUCCIN
La cromatografa es una tcnica para separar una mezcla de dos o ms compuestos de polaridad
diferente por distribucin del soluto en dos fases.
Las diferentes interacciones que originan que las molculas orgnicas se unan a la superficie del
adsorbente con mayor a menor fuerza dependen de su naturaleza polar o no polar. Las molculas no
polares interaccionan dbilmente con el adsorbente mediante fuerzas de Van Der Waals.
Las ms fuertes se manifiestan con molculas polares de fuerzas tipo dipolo-dipolo, enlace de
coordinacin y puentes de hidrogeno.
Un compuesto no polar puede en el eluyente ser muy eluido por fuerzas de Van Der Waals y
dbilmente adsorbido por lo tanto se va a mover rpidamente a travs de la columna. Por el
contrario, uno polar es fuertemente atrado por el adsorbente y se mover ms lento a travs del
adsorbente.
Debido a la diferencia de velocidad de migracin en la columna los compuestos de la mezcla se
separan en bandas que se mueven a su propia velocidad.
El chile guajillo contiene una veintena de diferentes tipos de carotenoides, Su principal componente
es el beta caroteno seguido por la violaxantina estos son pigmentos los cuales son molculas que
producen color entre ellos destacan xantofilas que producen la coloracin amarilla, las antocianinas
que dan el color rojo, purpura o azul y las betalainas cuyo color es el rojo, violeta y amarillos.
El objetivo de este experimento fue el de extraer los pigmentos del chile guajillo eligiendo de entre
varios disolventes el que mejor eluya y separara los pigmentos para una posterior recoleccin de los
mismos en cromatografa en columna y as saber el nmero exacto de pigmentos as como ver su
proporcin, la hiptesis que se manejo es que el chile al estar compuesto de pigmentos como los
beta carotenos, violaxantinas, capsantinas de diferente polaridad y se requieren separar debemos
usar disolventes de polaridad similar en una cromatografa en capa fina para ver cul es el mejor
separndolos y asi con los disolventes correctos en una cromatografa en columna obtenerlos cada
uno por separado.
METODOLOGIA
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
Una vez elegidos la mezcla de disolventes a usar para la separacin de los pigmentos se
procede a realizar una cromatografa en columna para aislar todos los pigmentos
En un vaso de precipitados agregar hexano con silica gel para columna, no hay cantidades
exactas, la consistencia no debe ser muy densa, agregar a la columna, a esto se le conoce
como va hmeda. No dejar de agregar hexano para evitar que se seque la columna y as
evitar la fractura de la misma; el hexano se recolecta y se reutiliza para evitar grandes gastos
de reactivos.
En un vaso de precipitados colocar un poco de silica gel para columna se le agrega la muestra
liquida del chile guajillo con cloroformo previamente preparado en la prctica de cromatografa
por capa fina, se deja volatilizar todo el disolvente y se agrega a la columna cromatografica, (a
esta parte se le llama muestra por va seca) aproximadamente cm 3.
Se agrega la mezcla de disolventes 70% tolueno 30% cloroformo en un volumen de 50mL y se
agrega a la columna cromatografica y se dejan separar los eluatos recolectndolos en tubos
de ensayo separando por colores.
DIAGRAMA:
RESULTADOS Y ANALISIS
Se observa que la acetona desplaza a todos los compuestos siendo estos menos polares que la
acetona, pero no los separa, el tolueno los separa muy bien en tres tipos de compuestos el naranja,
amarillo y rojo, siendo el menos polar el amarillo, el hexano al igual que el ciclohexano no los separa
en nada ni siquiera subieron con el disolvente, es decir, eran ms polares que el solvente, el
benceno los separo pero muy poco adems que no se vieron los tres compuestos sino solo el rojo y
el amarillo, siendo el ms polar el color rojo, el acetato de etilo los desplazo a todos y separo muy
poco al amarillo del compuesto rojo siendo de polaridad similar a la del eluente, el cloroformo los fue
separando pero no se vio una separacin marcada sino desplazo a todos por igual.
De aqu se eligieron el disolvente que ms y el que menos separo a los componentes de la mezcla
que fueron tanto el tolueno como el hexano, se hicieron mezclas de estos a
diferentes concentraciones y la que mejor se observ que los separo fue la
mezcla a proporcin 7:3
Al agregar la muestra a la columna el primer compuesto en eluir con el hexano
fue colorante el amarillo, un amarillo muy claro, de este se recolecto una
buena cantidad. Despus se fueron separaron el rojo junto con otro amarillo,
pero ms fuerte, la divisin entre estos no era muy marcada, pero se
apreciaba la diferencia de colores, para que se separaran an ms estos
compuestos y se notara la separacin y fuese ms fcil recolectarlos por
separado se agreg la mezcla de tolueno con hexano a la columna y estos
separaron en tres, el colorante amarillo muy fuerte, un anaranjado y un rojo
que quedo en la parte superior de la columna.
El primero en separarse como se haba mencionado fue el amarillo fuerte, de este se recolecto una
mnima cantidad, le sigui en recoleccin un anaranjado no muy marcado que se obtuvo en
proporcin por igual con el primer colorante amarillo claro.
El orden de la elucin se llev a cabo de los menos polares a los ms polares, los colores obtenidos:
amarillo fuerte, amarillo claro, naranja (Violaxanthin) , amarillo, amarillo muy tenue, el color rojo no se
pudo obtener que corresponde al Capsanthin, los varios tonos de amarillo obtenidos corresponden al
pigmento llamado anteraxanthin.
Por falta de reactivos y de tiempo no se determin si los pigmentos corresponden a lo observado por
cromatografa en capa fina; La mezcla de disolventes fue insuficiente pues el color rojo (Capsanthin)
no se pudo separar.
CONCLUSIN
La cromatografa en capa fina es un mtodo de anlisis cualitativo econmico, rpido y fcil cuyo
propsito es la separacin de componentes mediante una fase estacionario y una mvil se
fundamenta en la diferencia de polaridad entre los componentes de la mezcla.
Es til para analizar el nmero de componentes de un compuesto y su importancia radica en que en
la separacin se pueden extraer por separado y analizar qu tipo de compuesto es el que se tiene
presente, adems que es un paso previo a la cromatografa en columna pues aqu se pueden elegir
los mejores eluentes y las mezclas de estos para el tipo de compuesto que se est analizando por
ser rpido y sencillo.
El uso de la cromatografa en capa fina es amplio siendo til en el estudio de impurezas, para llevar
el control de una reaccin adems de optimizar el sistema de columna.
En total se obtuvieron cinco colorantes ms probablemente uno ms que quedo en la columna que
componan a la mezcla de chiles, estos se obtuvieron en diferentes proporciones siendo el amarillo
claro y el naranja claro quienes se encontraron en mayor proporcin, el de menor cantidad fue el
amarillo claro, la separacin se debi a que sus polaridades fueron a fines a los eluentes utilizados
para saber esto se tuvo que hacer previo una cromatografa en capa fina que es ms sencilla y
rpida a diferencia de la de columna, pero siendo la de columna ms eficiente a la hora de querer
aislar los componentes para su futuro estudio debido a que posee una mayor rea de superficie
para que los componentes eluyan y se puedan separar ms fcilmente y observar las separaciones.
BIBLIOGRAFIA:
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1992
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Ofelia C.Z, Federico G.J, Ricardo M.G. Comparative study of caretoid composition in three mexican
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