MARCO TEORICO:

ANTECEDENTES:

 Concepto de cromatografía. Tipos de cromatografía. Cromatografía de adsorción y

cromatografía de partición.
 Fenómeno de adsorción. La propiedad de retención. Concepto de Rf
 La cromatografía en capa fina. Sus características y aplicaciones.
 Eluyentes, soportes y reveladores más comunes para cromatografía en capa fina.
 Factores que influyen en una separación por cromatografía de capa fina.

FUNDAMENTOS:

La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más compuestos

por distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase
móvil. Varios tipos de cromatografía son posibles, dependiendo de la naturaleza de las
dos fases involucradas: sólido-liquido (capa fina, papel o columna), liquido-Liquido y
gases-liquido (fase vapor).

La cromatografía en capa fina (thin layer chromatography o TLC) es una técnica analítica
rápida y sencilla, muy utilizada en un laboratorio de Química Orgánica. Esta permite:

 Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede determinar así, por

ejemplo, la efectividad de una etapa de purificación.

 Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podrían ser idénticas.

Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la misma sustancia.

 Realizar el seguimiento de una reacción. Es posible estudiar como desaparecen

los reactivos y como aparecen los productos finales o, lo que es lo mismo, saber

cuándo la reacción ha acabado.

La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lámina de plástico o

aluminio que previamente ha sido recubierta de una fina capa de adsorbente (fase
estacionaria). Entonces, la lámina se coloca en una cubeta cerrada que contiene uno o
varios disolventes mezclados (eluyente o fase móvil). El eluyente ascenderá, por
capilaridad, por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo
"manchas" de los componentes estas tendrán un reparto diferencial de los productos
presentes en la muestra entre el disolvente y el adsorbente.

Hay adsorbentes que contienen un indicador de fluorescencia para facilitar la

identificación de muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos,

se requerirán otras técnicas de revelado.

Eluyentes más comunes para cromatografía en capa fina:

- éter de Petróleo - cloruro de metileno

- n-hexano - acetato de etilo

- ciclohexano - acetona

- tolueno - iso-propanol

- dietil-éter - etanol

- t-butil-éter - metanol

- cloroformo - ácido acético

Reveladores más comunes para cromatografía en capa fina:

Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras pueden
revelarse mediante:

 Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase
estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F25a ó F366), el
número que aparece como subíndice nos indica la longitud de onda de
excitación del indicador utilizado"
 La introducción de la placa en vapores de yodo.
 El rocío con una solución de agua/H2SOa 1:1 (dentro de un compartimiento
especialmente protegido y bajo una campana de extracción de gases). Después
calentar intensamente, por ejemplo, con un mechero, hasta carbonizar los
compuestos.
Adsorbentes más comunes para cromatografía en capa fina:

 Gel de sílice (se utiliza en el 80% de las separaciones)

 Oxido de Aluminio ó Alúmina (ácida, neutra ó básica)
 Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
 Poliamidas

Para la selección del adsorbente deber tomar las siguientes consideraciones:

 Polaridad
 Tamaño de partícula
 Diámetro
 área Superficial
 Homogeneidad
 Pureza

Factores que influyen en una separación por cromatografía de capa fina.

 Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase

estacionaria.
 La cromatografía debe llevarse a cabo en un área sin corrientes de aire.
 Limpieza de las placas. Muchas placas están contaminadas con grasa o agentes
plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequeña escala, éstas deben
limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y después
dejar secar completamente antes de aplicar la muestra.
 Pureza de los disolventes.
DETERMINACION DEL RF (relación de frentes)

La retención se puede explicar en base a la competencia que se establece entre el soluto

a separar y la fase móvil por adsorberse a los centros activos polares de la fase
estacionaria. Así, las moléculas de soluto se encuentran adsorbidas en la fase
estacionaria y a medida que se produce la elución van siendo desplazadas por la fase
móvil. La retención y la selectividad en la separación dependen de los valores
respectivos de las constantes de los diferentes equilibrios químicos que tienen lugar,
que están en función de:

 La polaridad del compuesto, determinada por el número y naturaleza de los

grupos funcionales presentes. Los solutos más polares quedarán más retenidos
puesto que se adsorben más firmemente a los centros activos de la fase
estacionaria, mientras que los no polares se eluirán con mayor facilidad.

 Naturaleza del disolvente. Así, para un mismo compuesto, un aumento en la

polaridad del disolvente facilita su desplazamiento en la placa.

A relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente desde el origen
de la placa se conoce como Rf, y tiene un valor constante para cada compuesto en unas
condiciones cromatográficas determinadas (adsorbente, disolvente, tamaño de la
cubeta, temperatura, etc.).

Debido a que es prácticamente imposible reproducir exactamente las condiciones

experimentales, la comparación de una muestra con otra debe realizarse eluyendo
ambas en la misma placa.

En resumen el símbolo Rf significa “Relación de frentes”, es una relación de distancias,

y se expresa como el cociente entre la distancia recorrida por la sustancia y la distancia
recorrida por el disolvente hasta el frente del eluyente:
 distancia recorrida por el compuesto (X)
𝑅𝑓 =
distancia recorrida por el eluyente (Y)

Orden de
Polaridad Tipo de compuesto
elución
Menor
Menor
Alcanos Alquenos
retención
Éteres
Derivados
halogenados
Aldehídos y cetonas
Esteres
Aminas
Alcoholes
Fenoles
Mayor
Ácidos carboxílicos
retención
Mayor

La distancia recorrida por el compuesto se mide desde el centro de la mancha. Si ésta es

excesivamente grande se obtendrá un valor erróneo del Rf.

El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra: tipo de

adsorbente, eluyente, así como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de
saturación, etc. Tiene una reproducibilidad de  20%, por lo que es mejor correr
duplicados de la misma placa.

Se recomienda elegir un eluyente en el que los componentes de la mezcla presenten un

Rf medio en torno a 0.3‐0.5. Para compuestos poco polares, se debe utilizar un
disolvente apolar como el hexano. En el caso de compuestos con polaridad media, se
aconseja utilizar mezclas hexano/acetato de etilo en distintas proporciones. Los
productos más polares, requieren disolventes más polares como mezclas de
diclorometano/metanol en distintas proporciones.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

PREPARACION DE CROMATOPLACAS Y CAPILARES:

Se pueden utilizar cromatofolios ya preparados (comerciales), o bien, preparar las

cromatoplacas en el laboratorio.

Para preparar las cromatoplacas, se introducen dos portaobjetos juntos, limpios y secos,
en una suspensión de gel de sílice al 35% en acetato de etilo, se dejan secar al aire y se
separan con cuidado. Se preparan 6 cromatoplacas y se ordenan sobre una hoja de
papel.

Para aplicar las soluciones a las cromatoplacas utilice capilares, que previamente deber
ser estirados en la flama del mechero (flama pequeña), con el fin de que tengan el
diámetro adecuado.

Para mayor claridad de los resultados, incluya en su informe los dibujos de las
cromatoplacas a tamaño natural de todos los experimentos de esta sesión.

APLICACIÓN DE LA MUESTRA Y EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN:

Con la micro pipeta, tome una pequeña cantidad de la solución-problema y aplique una
gota sobre la capa de Silicagel, a 1 cm. aprox. del borde inferior de la placa y trace una
marca, con un lápiz fino, en el borde derecho, para no perder el punto de aplicación.

Para saber cuál es el efecto de la concentración (o el tamaño) de las gotas, se harán 3

aplicaciones de la solución No. 1 en orden creciente de concentración, en una sola placa,
como se indica en el siguiente ejemplo:
Para desarrollar el cromatoqrama, introduzca la placa en una cámara de elución, (que
puede prepararse con un frasco de tamaño apropiado), a la que previamente se le coloca
por dentro un cuadro de papel filtro para aumentar la saturación de los vapores del
eluyente, coloque unos 4 mL de acetato de etilo y tápela.

Una vez que la placa esté dentro de la cámara, no debe moverla. Cuando el frente del
eluyente esté casi en el borde superior de la capa de Silicagel, abra el frasco, retire la
placa y marque el frente del eluyente con un lápiz fino. Coloque la placa en su hoja de
papel, donde anotará sus datos, y déjela secar al aire.
Para visualizar las manchas, revele primero con la lámpara de luz UV, marcando el
contorno de cada una con un lápiz fino y luego introduciendo la placa en una cámara
con cristales de yodo.

POLARIDAD DE LAS SUSTANCIAS Y POLARIDAD DE LOS ELUYENTES.

Para comparar la polaridad de dos sustancias diferentes, se le proporcionarán las

soluciones No. 2 y No. 3. Prepare 3 cromatoplacas y aplique estas dos soluciones en cada
una de ellas, de tal manera que queden como en el siguiente ejemplo:
Para comparar la polaridad de los eluyentes, eluya la primera cromatoplaca con hexano,
la segunda con AcOEt y la tercera con MeOH.

En cada caso, deje evaporar el eluyente y revele con luz UV, observe y anote sus
resultados (calcule el Rf de cada mancha). Luego, revele con yodo y anote sus
observaciones.

PUREZA DE SUSTANCIAS:

Se desea saber cuál sustancia es pura y cuál es impura- Para esto se le proporcionarán
las soluciones No.4 y No. 5. Prepare una cromatoplaca y aplique en ella ambas
soluciones, como en el experimento anterior.

Eluya con AcOEt y deje secar. Revele con luz UV y luego con yodo. Anote sus resultados
y observaciones.