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Escuela Nacional De
Ciencias Biolgicas
EQUIPO 3
HERNNDEZ BALDERAS JOSE LUIS, RAMREZ PREZ ANA BERTHA
CROMATOGRAFIA
La cromatografa puede definirse como una tcnica que separa una mezcla de solutos basada en la velocidad de
desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al ser arrastrados por una fase mvil (lquida o gaseosa) a travs
de un lecho cromatogrfico que contiene la fase estacionaria, la cual puede ser lquida o slida. Las propiedades de los
componentes de una mezcla determinan su movilidad entre s y con respecto a la fase mvil. La base de la separacin
cromatogrfica ser, por tanto, la diferencia en la migracin de los mismos.
El botnico ruso Mijail Tswett (Figura
1) estableci las ventajas de la tcnica, adopto
la terminologa y defini los procedimientos
experimentales bsicos para esta tcnica, se
considera que es el Padre de la Cromatografa.
En los aos 30 y 40 empez su desarrollo y
aplicacin en diferentes procedimientos de
experimentacin.
Aplicar y comparar los mtodos cromatograficos de capa fina y colimna, para separar, identificar y purificar
compuestos organicos.
Observar el afecto de diferentes fases mviles y estacionarias en la separacin.
Determinar los valores de Rf como un parmetro en la identificacin de los compuestos separados.
Practica IV Cromatografa
HIPOTESIS
Experiencia. Separacin de licopenos.
Si desarrollamos los pasos de cromatografa en papel en los
licopenos obtenidos en la prctica Extraccin liquido-liquido y
la mezcla de Hexano-Acetato, obtendremos el desarrollo de
cromatograma y con esto poder observar los componentes del
licopeno.
Experiencia. Cromatografa en capa fina de una mezcla
de colorantes.
Si efectuamos la cromatografa en varias cromatoplacas desde
puntos sealados, en contacto a la mezcla de Acetato de EtiloEtanol a diferentes concentraciones y medimos las distancias
entre los puntos, obtendremos los valores de Rf y
observaremos cual es la concentracin adecuada para esta
cromatografa.
MATERIALES
REACTIVO
Silica-gel para columna
Hexano-Acetato de Etilo
1:1
Acetato de Etilo-Metanol
1:1
Acetato de Etilo-Metanol
7:3
Acetato de Etilo-Metanol
1:1
Mezcla de colorantes
anaranjado de metiloazul de metileno 1:1
CANTIDAD
4g
30 ml
30 ml
10 ml
10 ml
10 ml
OBSERVACIONES
En la separacin de licopenos se preparo la columna para
cromatografa cuidando que el pedazo de algodn que se
debe colocar, fuera de un tamao, por el cual no se
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Practica IV Cromatografa
RESULTADOS
En la columna cromatografa se apreci muy claramente la
separacin de las fases, los primeros tubos que colectamos
eran muy coloridos, y gradualmente fueron perdiendo esta
caracterstica, lo que nos indica la separacin por volmenes.
En la tercera experiencia, en la mescal hexano: Acetato de
etilo 1:1 es poco polar por lo que al hacerla pasar por la
columna, eluyeron las sustancias no polares, mientras que las
polares quedan adheridas a la matriz de la columna, es decir al
slica-gel; al cambiar la mezcla a acetato de etilo: metanol 1:1
de mayor polaridad, las molculas polares van movindose al
reemplazarse su interaccin con la slica-gel por interaccin
con la mezcla acetato de etilo: metanol 1:1. Con lo que
observamos una mayor separacin.
En la cromatografa de capa fina se ocuparon 3 tintas, amarilla,
naranja y rosa, el Rf (distancia recorrida por el solvente
/distancia recorrida por el soluto) de cada una es de:
Tinta amarilla = 2.3 cm /3.9 cm = 0.59
Tinta naranja = 1 cm /3.9 cm = 0.256
Tinta amarilla = 0.5 cm /3.9 cm = 0.128
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DISCUSIONES
En la cromatografa de columna dependiendo de las
caractersticas de cada compuesto algunos tendern a
quedarse ms retenidos en el slido, mientras que otros
avanzarn con el paso del disolvente. En este caso la
polaridad es muy importante para elegir el tipo de disolvente y
para saber en que parte del sistema quedara nuestro analito,
permitindonos as obtener una buena separacin de los
constituyentes del mismo.
En la cromatografa de columna es importante que la columna
no se seque en ningn momento ya que el aire se introduce en
la misma, agrietndola. Las grietas impiden el normal
desarrollo de los equilibrios de adsorcin y desorcin entre el
adsorbente y el disolvente, reducindose la capacidad de
separacin.
Practica IV Cromatografa
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CONCLUSIONES
Se conoci la tcnica de cromatografa y los factores que la
afectan, as como la efectividad de diferentes mezclas de
solventes para realizar la tcnica.
Con la cromatografa de columna se determin que
solventes son ms efectivos para realizar una separacin,
mientras que con la cromatografa en columna se pudo
apreciar la velocidad a la que eluyen los licopenos.
BIBLIOGRAFA
Brewter Ray Q. Curso de Qumica orgnica
experimental.
Editorial Altambra.Espaa 1974
Pgs. 43-48